《洁净室（区）污染微生物溯源方法（征求意见稿）》编制说明

江苏省地方标准《洁净室（区）污染微生物溯源方法》（报批稿）编制说明标准起草组2025年5月12日一、目的意义 二、任务来源 3三、编制过程 3（一）成立标准编制组 （二）召开标准编制启动会 3（三）资料收集 （五）标准编制 四、主要内容 6五、技术指标确定的依据 （一）标准编制原则 （二）标准编制依据 《中国药典》2025版四部指导原则9204、9205 7（三）主要技术指标的确定 7六、重大分歧意见的处理过程和依据 七、与相关法律法规和标准的关系 八、推广实施建议 九、起草单位和起草人员信息及分工 《洁净室（区）污染微生物溯源方法》（送审稿）编制说明一、目的意义洁净室（区）对尘粒及微生物污染规定需要进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。工业洁净室（区）为受控环境，其压差、温度、相对湿度、非活性的空气悬浮粒子数、有活性的微生物等参数受控。洁净室（区）内污染微生物来源复杂：人员、水系统、物料投放过程中、洁净室消毒死角等都有可能造成洁净室（区）微生物污染；不同季节、不同地域污染微生物也不同，急需建立洁净室（区）空间分布采样或在线采样点设计，将采集到的污染微生物分类，建立污染微生物数据库。基于各种鉴别和分析方法，结合人员、物料、生产工艺、水体系以及可能原因分析，运用不同检测方法相结合，描绘微生物污染轨迹图，切实有效的解决微生物污染和溯源问题。微生物污染溯源技术主要是通过比较污染微生物与已知微生物或其他生物标记的微生物有无确定两者关系，从而确定污染微生物的来源。不同种类的微生物有其特异性的遗传特征、代谢产物等等，通过分析这些多样性的表型和基因型随着科技的发展，国内外有很多针对微生物的灵敏、快速的检测技术，目前用于鉴别污染微生物的方法主要有两类：1、传统形态与生化鉴定法，目前常用的试剂及仪器有生化反应套盒、Vitek2Compact鉴定仪、API鉴定试剂条等，这类方法是根据微生物基本形态和其特定生化反应进行鉴别，主要是微生物的表型鉴定，是经典方法，能获取污染微生物的基本信息。2、分子生物学方法：目前常用的有PCR反应结合电泳、荧光定量PCR、一代测序、高通量测序等，这类方法是利用微生物基因信息的差异对微生物进行鉴定和分型。以DNA序列为基础的数据库不断完善，以及新一代高通量测序为基础的全基因组溯源分析方法，结合空间采样点或在线采样点数据，将为相关污染事件、模拟灌装阳性结果、无菌检查阳性结果等偏差或超标（OOS）调查分析、消毒剂效果评价、生产工艺反馈提供科学依据。目前大部分企业或者科研院所都仅局限于关注数量，对于其种类和特点关注度较低，并且对环境监控过程中发现的污染菌没有有效的鉴别和管理，面对行业快速发展的机遇和挑战，亟需建立完善的洁净室（区）微生物溯源方法，了解洁净室（区）微生物负载情况，即微生物种类和分布情况，建立无菌制品生产过程、检验过程、配制过程中微生物污染溯源分析的有效方法，填补省内空白，规范行业发展，特编制《洁净室（区）污染微生物溯源方法》。二、任务来源2024年8月19日，江苏省市场监督管理局下发“苏市监标〔2024〕143号”文件《省市场监管局关于下达2024年度江苏省地方标准制修订计划的通知》。《洁净室（区）污染微生物溯源方法》被立项为省地方标准制定项目，项目序号为：第2024305号。该标准由江苏省药品监督检验研究院提出，江苏省实验动物标准化专业技术委员会归口并组织实施，由江苏省药品监督检验研究院、江苏省疾病预防控制中心共同起草。三、编制过程（一）成立标准编制组省地方标准制定项目《洁净室（区）污染微生物溯源方法》由江苏省药品监督检验研究院提出，任务下达后，江苏省药品监督检验研究院、江苏省疾病预防控制中心联合成立了《洁净室（区）污染微生物溯源方法》编制组，开始本标准的研究制定工作。（二）召开标准编制启动会编制组于2024年9月19日在江苏省药品监督检验研究院召开了标准编制启动会，编制组负责人张蕾总体报告分析了当前医药工业洁净室（区）微生物管理控制要求，医药工业洁净室（区）微生物污染控制和溯源调查现状情况，污染微生物的取样采集、培养、鉴定、溯源的方式和方法，洁净室（区）微生物污染溯源目前缺少标准化的实验方法，江苏省内暂时缺少相应的标准。启动会上对编制组成员的工作任务进行了分工安排。会议邀请了江苏省疾病控制预防中心的专家，听取他们关于标准重点内容与期望达成目标方面的意见和建议。（三）资料收集2024年9月-2025年1月，编制组收集了国内洁净室（区）污染微生物溯源相关的国家标准、行业标准、地方标准、团体标准，以及国外有关微生物采集、鉴定和溯源方法相关的内容，进行深入学习、消化。在对参考标准和资料研究分析和吸纳借鉴的基础上，2025年2月基本确定了《洁净室（区）污染微生物溯源方法》的编写思路和目次安排，拟定了按照洁净室（区）微生物监测、鉴定和微生物污染数据溯源分析工作流程编写标准：微生物采用仪器及设备，浮游菌、沉降菌和表面微生物采集方法，微生物培养，微生物分离纯化、表型鉴定和生化鉴定、分子生物学鉴定、其他非培养鉴定，微生物鉴定结果分析，微生物污染数据溯源分析，结果判定，在今后的推广应用中能够方便行业内单位理解和应用。（五）标准编制1.形成征求意见稿（1）2025年3月开展初稿编制，于2025年4月形成工作组讨论稿。（2）经编制组不断研讨完善，2025年5月形成《洁净室（区）污染微生物溯源方法》（征求意见稿）。2.形成送审稿根据意见，编制工作组逐条逐项进行修改完善，最终形成《洁净室（区）污染微生物溯源方法（送审稿）》。3.召开标准审查会议2025年9月3日省市场监管局发出“江苏省地方标准审查工作通知”，11月19日下午在江苏省药品监督检验研究院召开《洁净室（区）污染微生物溯源方法》标准起草工作会议，葛以跃、迟莹2位专家与会对标准送审稿及其他材料进行了审查，对标准送审稿修改完善提出了非常好的建议，主要包括：1）按照《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》（GB/T1.1-2020）的要求，进一步规范文本的格式和表述。2）将洁净室（区）微生物监测方法放置资料性附录中。3）将微生物污染数据溯源分析方法进行内容整合，形成流程图。评审专家一致同意通过审查，并形成了会议纪要。4.形成报批稿根据专家组意见，编制组逐条逐项进行修改完善，最终形成《洁净室（区）污染微生物溯源方法》江苏省地方标准报批稿。四、主要内容《洁净室（区）污染微生物溯源方法》提出了有关洁净室（区）微生物监测的基本方法、微生物鉴定的基本方法、微生物污染数据溯源分析的基本方法。第1条范围：明确了本标准包含内容及其适用工作领域。第2条规范性引用文件：规范引用了GB50073-2013等10个标准。第3条术语和定义：对浮游菌、微生物监测、微生物鉴定等进行了定义。第4条人员：洁净室（区）采样和微生物检测人员规定了基本要求。第5条微生物监测：从监测仪器、辅助设备和培养基、浮游菌、表面微生物和沉降菌采样方法、微生物培养方法等3个方面规定了基本要求。五、技术指标确定的依据（一）标准编制原则规范编制遵循“前瞻性、实用性、可拓展性”的原则，注重规范的实际可操作性，按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。（二）标准编制依据GB50073-2013洁净厂房设计规范JGJ71-90洁净室施工及验收规范GB50457-2019医药工业洁净厂房设计规范GB50333-2013医院洁净手术部建筑技术规范GB50849-2014传染病医院建筑设计规范GMP药品生产质量管理规范GB/T16293医药工业洁净室(区)浮游茵的测试方法GB/T16294医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法ISO14644-1:2015洁净室及相关控制环境国际标准《中国药典》2025版四部指导原则9204、9205（三）主要技术指标的确定本标准除前言外共7部分，其中，第6部分与第7部分为洁净室（区）污染微生物溯源方法的主要内容，技术指标的确立主要依据国家GMP药品生产质量管理规范等政策文件、洁净室（区）相关国家及行业标准、地方标准、《中国药典》2025版四部指导原则9204、9205技术要求。各章节的主要技术指标及其确立依据如下：1.微生物鉴定方法。从物料、用水、环境、产品等样品中检出的微生物，借助现有的分类系统，通过对未知微生物的特征测定，对其进行微生物大类的区分，或种属水平确定，以掌握微生物污染情况，进行污染溯源分析。微生物鉴定分为非培养鉴定和培养鉴定。（1）培养鉴定为微生物表型分析鉴定，将待检培养物分离纯化，挑取待检菌在适宜的固体培养基上连续划线分离纯化，以获取待检菌的纯培养物（单个菌落），必要时可进一步进行纯培养，为表型鉴定和随后的鉴定程序提供足够量的菌体，挑取单个菌落进行革兰染色镜检，观察菌体形态和染色结果。微生物重要的生化筛选试验包括：氧化酶试验、过氧化氢酶试验、凝固酶试验。本标准中还列举了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDl-TOFMS）等其他鉴定方法。（2）分子生物学鉴定：分子生物学方法包括聚合酶链式反应（PCR）及其衍生技术、核酸测序技术等。参照中国药典1001及1021或者商品化试剂盒说明书的要求规定采集的微生物分离纯化，进行核酸提取、PCR及测序方法。（3）其他非培养鉴定：标准列举了流式细胞技术、ATP生物发光法和拉曼光谱非培养型鉴定法，符合国家标准，与我省微生物鉴定整体水平相适应。2.微生物污染数据溯源分析。通过系统化、规范化的调查流程，对实验室检验过程中出现的微生物污染结果进行有效处理和科学评价。溯源调查的核心目标是深入分析并明确导致污染的根本原因，从而及时采取有针对性的纠正和预防微生物污染数据溯源分析流程图（1）微生物污染数据溯源分析方案制定：采用因果性/排除性分析，结合菌株同源性、时空关联、操作行为等判定条件，系统化排除非污染源，锁定根本原因。方案需明确采样点、检测方法、责任人及时间节点，提供设备改造、人员培训等具体措施，确保落地执行。（2）微生物污染调查与确认：对微生物污染进行排除性分析、因果分析，以及在现场证据缺失或争议时其他判定方（3）微生物污染溯源分析评估和报告：污染检测报告应包括但不限于以下内容：a)抽样区域信息；b)抽样日期；六、重大分歧意见的处理过程和依据本标准无重大分歧。七、与相关法律法规和标准的关系（一）本文件的制定符合现行相关法律、法规、规章及相关强制性标准的要求，所引用的规范性文件都是现行有效的标准。（二）本标准与现行的洁净室（区）相关标准内容比对，是对洁净室（区）污染微生物溯源进行了比较具体的规定，与相关标准相协调并有机补充。（三）本标准与现行相关标准的主要区别。ISO14698洁净室微生物控制（采样、评估）适用范围为制药、医药、生物安全、食品等需控制生物污染的洁净室和受控环境，主要是对环境的微生物污染的控制、监测与数据解读。GB/T38521-2020《洁净室及相关受控环境微生物污染控制》等同于ISO14698。《药品生产质量管理规范（GMP）》对无菌药品、原料药、生物制品等洁净区环境做出具体规定。本标准在国标和国内标准的基础上补充洁净室（区）污染微生物溯源分析，从微生物检测、培养、鉴定及溯源上对洁净室（区）微生物检测和管理提出具体方法，符合GMP及《中国药典》总体技术规范和要求，与现行标准相容相关相互补充。八、推广实施建议建议标准归口和组织实施单位江苏省医药标准化技术委员会和江苏省药品监督管理局等积极开展标准贯彻的指引工作，在标准发布后及时组织我省相关单位人员进行专题标准宣贯与培训，确保各级科技部门和洁净室（区）使用单位在具体项目中能准确理解和应用本标准。此外，为扩大标准的影响力，还可通过公共媒体、行业内部渠道、对外信息平台、单位内部培训等形式进行广泛宣传，深入学习和实践本标准，以促进和提高我省医药工业洁净室（区）污染微生物溯源分析能力。标准编制单位需对标准的执行情况进行持续的跟踪与评估，及时发现并收集标准应用过程中的出现的