DB14∕T 1509-2017 玉米镰孢茎腐病抗性鉴定圃种植及接种技术规程

ICS65.020.20DB14山西省质量技术监督局发布DB14/T1509—2017I前言 12规范性引用文件 13术语和定义 14病圃种植方法 2 26菌种培养及繁殖 2 3 39调查记载 3 3附录A（资料性附录）玉米镰孢茎腐病病原 5附录B（资料性附录）玉米镰孢茎基腐病抗性鉴定对照材料 6DB14/T1509—2017本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西农业大学提出并归口。本标准起草单位：山西农业大学农学院。本标准主要起草人：张作刚、王建明、姚艳平、贺冰、王美琴、郝晓娟、韩彦卿、张光明。DB14/T1509—20171玉米镰孢茎腐病抗性鉴定圃种植及接种技术规程本标准规定了玉米镰孢茎腐病抗性鉴定病圃的种植方法、菌种分离、菌种培养及繁殖、接种、管理、调查记载及抗性评价。本标准适用于栽培玉米（ZeamaysL.）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生玉米和玉米近缘种对玉米镰孢茎腐病抗性的田间鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1248.7玉米抗病虫性鉴定技术规范第7部分：镰孢茎腐病3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1玉米镰孢茎腐病主要由禾谷镰孢[FusariumgraminearumSchwabe]，有性态为玉蜀黍赤霉[GiberellazeaeSchwein(Petch)]所引起的根系和茎基腐烂的玉米病害。3.2抗性鉴定通过适宜技术方法鉴别植物对其特定侵染性病害的抵抗水平。3.3分离物采用人工方法分离获得的病原体的纯培养物。3.4致病性病原体侵染寄主植物引起发病的能力。3.5DB14/T1509—20172接种在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位。4病圃种植方法4.1病圃小区面积每小区4m2~5m2，每个材料种1小区，重复2次。4.2种植密度鉴定材料按正常玉米种植密度的2倍种植。4.3宽窄行种植每小区行长4m~5m，宽行距0.6m，窄行距0.4m，株距25cm~30cm，每穴种3~4粒。每个材料种2窄行，材料间宽行。材料按生育期长短分组排列，每50～100份鉴定材料设1组已知高抗和高感对照材料。4.4留苗通过间苗、定苗后，每穴留2株。5菌种分离以常规组织分离法或单孢分离法从发病植株茎基部分离茎腐病病原物。分离物经鉴定确认为禾谷镰孢（F.graminearumSchwabe）后，进行单孢分离物纯化，经致病性测定后，在4℃低温下保存备用。6菌种培养及繁殖6.1菌种培养将菌种接种于PDA平板或液体培养基中，25℃左右条件下培养7~10d，菌种长满培养基后待用。6.2玉米粒菌种繁殖将玉米粒清洗浸泡1d吸足水后，装入灭菌袋中，然后放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌1h。冷却后，将6.1平板培养的菌种用接种针划碎后用接种针接入或液体菌种直接倒入经高压灭菌的玉米粒上，每1kg玉米粒接种1/2~1平板菌种（直径9cm培养皿）或5mL~10mL液体菌液。混均后，在23℃~25℃下黑暗培养。培养5~7d后，菌丝布满玉米粒。6.3牙签菌种繁殖6.3.1泡煮牙签将牙签在清水中浸泡1d，然后在清水中煮20min~30min后，冲洗2~3次。6.3.2渗沾面粉DB14/T1509—20173将经过泡煮的牙签在PDA液体培养基中煮20min~30min后，捞出趁表面湿润时在含有1%琼脂粉的小麦粉中沾拌，使牙签表面沾有一层面粉，把表面沾有面粉的牙签放进菌袋（简称牙签菌袋）。6.3.3高压灭菌在三角瓶中装入麦粒，加水浸泡，待吸足水后，冲洗后淋去水分，加塞，连同牙签菌袋一同高压灭菌20min。6.3.4牙签接种灭菌冷凉后，把6.1培养的菌种先倒入三角瓶的麦粒中，混匀后，再将带菌的麦粒倒入牙签菌袋中，轻轻上下左右翻动菌袋，使带菌麦粒充分和牙签接触并均匀分散于其中。6.3.5牙签培养将接种的牙签菌袋于25℃恒温下培养7~10d，菌种长满牙签即可。7接种7.1接种时间在玉米心叶末期（或10~13片叶展开）至抽雄初期。7.2接种方法7.2.1埋根法接种时将玉米根系一侧土壤扒开，将病原菌培养物20g~30g接种在露出的根系处，接种后覆土。7.2.2打孔法在玉米茎基部紧贴地面处，用直径3mm的钻头或锥子打孔，然后将带菌牙签插入孔中。8管理鉴定接种前应先进行田间浇灌或在雨后进行接种，接种后若遇持续干旱，应及时进行浇水，满足病害发生所需的湿度条件。9调查记载在玉米进入乳熟后期进行调查。用手指捏近地表茎节，感到变软的植株即为发病植株。分别记录调查总株数、发病株数，计算并记录发病株率。10抗性评价依据鉴定材料发病率确定其病情分级，再依据病情级别确定其抗性水平，见表1。当设置的感病或高感对照材料达到其相应感病程度，该批次鉴定视为有效。重复抗性鉴定结果以记载的最高病情级别为DB14/T1509—20174表1玉米镰孢茎腐抗病鉴定病情级别划分及抗性评价标准13579DB14/T1509—20175（资料性附录）玉米镰孢茎腐病病原A.1学名禾谷镰孢：Fusariumgraminearum异名：BotryosphaeriasaubinetiiDichomerasaubinetiiDothideazeaeFusariumroseumGibberasaubinetiiGibberellaroseumGibberellasaubinetiiSphaeriasaubinetiiSphaeriazeaeA.2形态分生孢子呈镰孢形，有隔膜2-7个，顶端钝圆或略微收缩，基部有明显的足细胞，大型分生孢子，分隔明显，