2026年病理技术培训考核试题及答案

2026年病理技术培训考核试题及答案一、单项选择题1.关于组织固定的目的，下列描述最准确的是：A.使组织硬化，便于切片B.防止细胞自溶和腐败，保持细胞形态和结构C.增强组织对染料的亲和力D.杀死组织中的病原微生物E.以上都是2.常规石蜡包埋切片最常用的透明剂是：A.乙醇B.丙酮C.二甲苯D.氯仿E.苯3.用于显示糖原的最佳固定液是：A.10%中性福尔马林B.Zenker固定液C.Carnoy固定液D.Bouin固定液E.4%多聚甲醛4.HE染色中，细胞核被染成蓝色的原理是：A.苏木精带正电荷，与带负电荷的DNA磷酸基结合B.伊红带负电荷，与带正电荷的蛋白质结合C.苏木精在媒染剂（如硫酸铝钾）作用下形成带正电荷的色淀，与DNA结合D.细胞核内富含碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合E.以上都不对5.免疫组织化学染色中，用于阻断内源性过氧化物酶活性的常用试剂是：A.3%过氧化氢甲醇溶液B.正常山羊血清C.TritonX-100D.柠檬酸盐缓冲液E.DAB6.下列哪项不是冷冻切片的优点？A.快速获得诊断结果B.能较好地保存组织抗原性C.组织无需脱水、透明、浸蜡D.切片薄，染色清晰度与石蜡切片相当E.可用于术中快速病理诊断7.在特殊染色中，Masson三色染色法主要用于显示：A.网状纤维B.胶原纤维C.弹力纤维D.淀粉样物质E.黏液8.巴氏染色常用于哪种细胞学检查？A.痰液细胞学B.尿液细胞学C.宫颈脱落细胞学D.胸腔积液细胞学E.以上都是9.进行肾穿刺活检组织电镜标本处理时，常用的初固定液是：A.10%福尔马林B.2.5%戊二醛C.4%多聚甲醛D.95%乙醇E.Carnoy固定液10.原位杂交技术中，探针标记物不包括：A.地高辛B.生物素C.荧光素D.辣根过氧化物酶E.放射性同位素（如³²P）11.关于脱水剂浓度梯度设置，正确的是：A.70%乙醇→80%乙醇→90%乙醇→95%乙醇→无水乙醇B.50%乙醇→70%乙醇→90%乙醇→无水乙醇C.80%乙醇→95%乙醇→无水乙醇→无水乙醇ⅡD.60%乙醇→80%乙醇→95%乙醇→无水乙醇E.以上梯度均可，但A选项最为常用和温和12.组织芯片技术的主要优势在于：A.高通量分析B.节省试剂和样本C.保证实验条件一致性D.便于自动化操作E.以上都是13.在免疫荧光染色中，常用的封片剂是：A.中性树胶B.DPXC.甘油缓冲液D.加拿大树胶E.液体石蜡14.下列哪种酶组织化学染色可用于显示缺血缺氧早期心肌改变？A.琥珀酸脱氢酶（SDH）B.乳酸脱氢酶（LDH）C.酸性磷酸酶（ACP）D.碱性磷酸酶（ALP）E.三磷酸腺苷酶（ATPase）15.诊断淀粉样变最特异的染色方法是：A.刚果红染色B.苏丹Ⅲ染色C.普鲁士蓝染色D.PAS染色E.维多利亚蓝染色16.流式细胞术不能检测的参数是：A.细胞大小（FSC）B.细胞颗粒度（SSC）C.细胞表面和内部抗原D.细胞超微结构E.细胞周期和DNA含量17.用于显示幽门螺杆菌的常用特殊染色是：A.抗酸染色B.革兰染色C.吉姆萨染色D.Warthin-Starry银染E.六胺银染色18.在分子病理学中，提取组织DNA时，为防止DNA降解，组织样本应如何保存？A.10%福尔马林固定，石蜡包埋B.液氮速冻后-80℃保存C.4℃生理盐水保存D.70%乙醇固定E.B和D均可19.细胞蜡块制作技术主要应用于：A.提高小组织标本的切片成功率B.处理体腔积液等细胞学标本C.制作组织芯片D.保存珍贵的组织标本E.进行电镜观察20.关于自动染色机使用的注意事项，错误的是：A.定期更换试剂，防止试剂挥发或失效B.不同染色程序试剂缸可混用，以节省成本C.运行前检查染液和冲洗水是否充足D.定期清洗和维护机器，防止染料结晶堵塞管路E.严格按照操作规程进行二、多项选择题1.影响组织切片质量的关键环节包括：A.组织固定的及时性与充分性B.脱水、透明的彻底性C.浸蜡的温度与时间D.切片刀的锋利程度E.切片厚度与展片水温2.免疫组织化学染色出现假阴性的可能原因有：A.组织固定时间过长，抗原过度交联B.一抗浓度过低或失效C.抗原修复不充分D.DAB显色时间过短E.内源性过氧化物酶或生物素未完全阻断3.可用于显示真菌的特殊染色方法有：A.过碘酸雪夫（PAS）染色B.六胺银（GMS）染色C.抗酸染色D.革兰染色E.刚果红染色4.下列哪些是细胞病理学常用的标本类型？A.宫颈刮片/液基细胞学标本B.痰液C.胸腔积液、腹水D.细针穿刺吸取物E.尿液5.分子病理检测中，对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织DNA质量评估的常用指标有：A.DNA浓度B.DNA纯度（A260/A280比值）C.DNA片段化程度（如DV200值）D.RNA含量E.蛋白质含量6.关于冷冻切片操作，正确的说法是：A.组织应新鲜，避免固定后再冷冻B.冷冻温度通常为-18℃至-25℃C.为防止冰晶形成，可使用OCT包埋剂D.切片厚度通常为4-6微米E.切片后应立即固定或染色，防止抗原丢失或结构破坏7.电子显微镜标本制备过程中，与石蜡切片显著不同的步骤包括：A.使用戊二醛和锇酸双重固定B.环氧树脂包埋C.超薄切片（厚度50-100nm）D.醋酸铀和柠檬酸铅双重电子染色E.需要钻石刀或玻璃刀切片8.原位杂交技术可用于检测：A.病毒DNA/RNAB.基因突变C.基因扩增D.染色体易位E.mRNA表达定位9.下列染色组合常用于鉴别某些软组织肿瘤：A.Vimentin（波形蛋白）B.Desmin（结蛋白）C.S-100蛋白D.CD34E.SMA（平滑肌肌动蛋白）10.实验室生物安全防护中，处理疑似朊病毒（如克雅病）标本时需要：A.在生物安全柜内操作B.使用一次性器械和耗材，用后高压灭菌C.固定液需使用高浓度福尔马林或特殊固定剂D.切片刀等重复使用器械需用1MNaOH浸泡处理E.废弃物按感染性医疗废物处理三、判断题（）1.中性福尔马林固定液是指pH值为7.0的10%甲醛溶液，能更好地保存组织抗原性。（）2.伊红是酸性染料，主要使细胞质和间质中的碱性成分着红色。（）3.抗原修复技术（如热修复）可以逆转福尔马林固定引起的抗原表位遮蔽。（）4.冷冻切片完成后，剩余的冷冻组织块可以室温解冻后再次进行石蜡包埋。（）5.特殊染色“普鲁士蓝反应”用于显示含铁血黄素中的三价铁离子。（）6.液基细胞学技术（TCT/LCT）完全取代了传统的宫颈涂片巴氏染色法。（）7.PCR技术可以在福尔马林固定石蜡包埋组织中扩增长达1000bp的DNA片段。（）8.免疫组化染色中，DAB显色产物为棕黄色，不溶于水和乙醇。（）9.组织脱水不彻底会导致切片时组织碎裂或无法切成完整薄片。（）10.荧光原位杂交（FISH）结果需在普通光学显微镜下观察。四、简答题1.简述HE染色中“蓝化”或“返蓝”处理的目的和常用方法。2.列举免疫组织化学染色中常用的三种抗原修复方法，并简述其基本原理。3.简述冷冻切片在术中快速病理诊断中的应用价值及其局限性。4.什么是“封片”？简述常规石蜡切片HE染色后常用的封片剂及其作用。5.简述特殊染色“网状纤维染色”（如Gomori法）的主要原理及在病理诊断中的应用意义。五、论述/案例分析题1.请详细论述从手术切除新鲜组织到制成一张高质量HE染色石蜡切片的完整技术流程，并说明各关键步骤的注意事项。2.某患者淋巴结活检组织，临床怀疑淋巴瘤。现需进行免疫组织化学染色辅助分型。请论述：（1）为确保染色质量，在组织前处理（固定、脱水、包埋）阶段应注意什么？（2）应如何设计免疫组化检测套餐（至少列举8种常用于淋巴瘤分型的抗体）？（3）染色过程中出现背景着色过深，可能有哪些原因？如何解决？3.分子病理学检测已成为肿瘤精准诊疗的重要支撑。请论述：（1）比较福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织与新鲜冰冻组织作为分子检测样本的优缺点。（2）以非小细胞肺癌EGFR基因突变检测为例，简述一种常用检测技术（如ARMS-PCR或NGS）的基本原理和流程。（3）分析影响FFPE组织DNA/RNA提取质量的关键因素。答案与解析一、单项选择题1.E。组织固定的目的包括：防止自溶腐败、保存形态结构、硬化组织、沉淀或凝固细胞内成分便于染色、杀灭微生物等，因此E最全面。2.C。二甲苯能与脱水剂（乙醇）和包埋剂（石蜡）互溶，是石蜡切片流程中最常用的透明剂。3.C。Carnoy固定液（冰醋酸:氯仿:无水乙醇=1:3:6）能快速固定并较好地保存糖原、DNA和RNA，是显示糖原（PAS染色）的推荐固定液。4.C。苏木精本身无染色能力，需经氧化成熟，并在媒染剂（如铝、铁等金属离子）存在下形成带正电荷的蓝色色淀（苏木精-媒染剂复合物），与DNA磷酸骨架上的负电荷结合而显蓝色。5.A。3%过氧化氢（H₂O₂）甲醇溶液能有效淬灭组织和细胞（尤其是红细胞）中内源性的过氧化物酶活性，防止在DAB显色时产生非特异性背景着色。6.D。冷冻切片由于冰晶形成等因素，其细胞形态清晰度和细节保存通常不如石蜡切片，这是其主要缺点之一。7.B。Masson三色染色能将胶原纤维染成蓝色或绿色（取决于染料配方），肌纤维染成红色，常用于观察纤维化、区分肿瘤组织成分等。8.E。巴氏染色因其细胞核细节清晰、胞浆透明多彩，被广泛应用于各种脱落细胞学和细针穿刺细胞学的检查。9.B。2.5%戊二醛能较好地固定细胞超微结构，是电镜标本标准的初固定液。通常后续还需用锇酸进行后固定。10.D。辣根过氧化物酶（HRP）是免疫组织化学常用的酶标记物，但在原位杂交中，探针直接标记的通常是地高辛、生物素、荧光素或放射性同位素，HRP常作为这些标记物的检测系统组成部分（如通过抗体偶联）。11.E。组织脱水需循序渐进，从低浓度乙醇到高浓度，以避免组织剧烈收缩。A选项梯度最平缓，对组织损伤小，最为常用。12.E。组织芯片技术将数十至数百个微型组织样本排列在一张载玻片上，能同时进行同一实验，具有高通量、省时省力、条件一致等全部优势。13.C。免疫荧光染色后，为防止荧光淬灭，通常使用含有抗淬灭剂的甘油缓冲液封片，而非用于光学切片的树胶。14.A。琥珀酸脱氢酶（SDH）是线粒体标志酶，对缺氧高度敏感。心肌缺血早期，线粒体受损，SDH活性下降甚至消失，染色变浅，故可用于早期诊断。15.A。刚果红染色后，淀粉样物质呈砖红色，在偏振光显微镜下呈现独特的苹果绿色双折光，是诊断淀粉样变最经典和特异的方法。16.D。流式细胞术是在细胞悬液水平进行检测，能分析细胞物理特征、荧光标记的抗原和DNA含量等，但不能观察细胞的超微结构，后者是电镜的功能。17.D。Warthin-Starry银染是一种高灵敏度的银染法，能将幽门螺杆菌染成棕黑色至黑色，背景呈黄色，对比鲜明，是显示该菌的经典方法。18.B。液氮速冻后-80℃保存是保存DNA/RNA完整性的最佳方式。70%乙醇固定也可用于分子检测样本保存，但效果不如深低温。福尔马林固定会引起核酸交联和片段化。19.B。细胞蜡块技术是将体液、灌洗液或细针穿刺获得的细胞离心沉淀后，用琼脂或血浆凝块包裹，再进行固定、脱水、石蜡包埋，能提供组织学样的切片，利于免疫组化和分子检测。20.B。不同染色程序（如HE、特殊染色、免疫组化）的试剂成分不同，混用会导致试剂污染、交叉反应，严重影响染色质量，必须严格分开。二、多项选择题1.ABCDE。所有选项均为制片流程中的关键质量控制点，任何一个环节出问题都会影响最终切片质量。2.ABCDE。所有选项均为导致假阴性的常见原因。A属于前处理问题；B、C属于染色过程的核心步骤问题；D属于显色步骤问题；E属于非特异性阻断问题，背景过深有时也会掩盖弱阳性信号。3.AB。PAS染色能显示真菌的细胞壁多糖（呈红色），GMS染色能特异地将真菌细胞壁染成黑色，对比度极佳。抗酸染色主要用于分枝杆菌，革兰染色主要用于细菌分类，刚果红用于淀粉样物。4.ABCDE。所有选项均为细胞病理学常见的标本来源。5.ABC。评估FFPE组织DNA质量，主要关注其浓度、纯度（蛋白质污染）和完整性（片段大小）。DV200是指DNA片段大于200bp的比例，是评估片段化程度的重要指标。RNA和蛋白质含量不是DNA质量评估的直接指标。6.ACDE。B选项错误，常规冷冻切片机的冷冻温度通常设定在-20℃左右，但用于快速诊断的冷冻台（冷台）温度通常在-18℃至-25℃之间，而用于保存组织的-80℃冰箱或液氮则温度低得多。冷冻切片本身在冷冻切片机内进行，机箱温度约-20℃。A、C、D、E均为冷冻切片的正确操作要点。7.ABCDE。电镜标本制备要求更高，固定剂（戊二醛、锇酸）、包埋剂（环氧树脂）、切片厚度（超薄切片）、染色方式（重金属盐电子染色）和切片刀（钻石刀/玻璃刀）均与石蜡切片截然不同。8.ABCDE。原位杂交技术利用核酸探针，能在组织细胞原位检测特定的DNA或RNA序列，因此可用于检测外源病原体核酸、内源基因的突变、扩增、易位以及mRNA的表达位置。9.ABCDE。这些抗体是软组织肿瘤免疫组化鉴别诊断中最常用的标志物组合。Vimentin是间叶组织标志；Desmin是肌源性标志；S-100常用于神经鞘瘤、恶黑等；CD34常用于血管源性肿瘤、胃肠道间质瘤等；SMA用于平滑肌源性肿瘤。10.ABCDE。朊病毒具有极强的抵抗力和传染性，处理其标本需遵循最高级别的防范措施，所有选项均为标准操作规范要求。三、判断题1.错。中性福尔马林通常指用pH7.2-7.4的磷酸缓冲液配制的10%甲醛溶液，其缓冲环境能减少酸性福尔马林色素沉淀，并更好地保存某些抗原和核酸，但并非指pH严格为7.0。2.错。伊红是酸性染料，主要使细胞质和间质中的酸性成分（带正电荷的蛋白质，如碱性氨基酸）着红色。碱性成分（如DNA）与酸性染料结合弱。3.对。福尔马林固定会使蛋白质发生交联，遮蔽抗原表位。热修复（如高压、微波、水浴）或酶消化能部分打断这些交联，使被遮蔽的抗原表位重新暴露。4.错。冷冻切片后剩余的组织块，如果未经固定直接冷冻，其内部已形成冰晶，结构已遭破坏。解冻后细胞严重自溶，无法用于石蜡包埋制作有诊断价值的切片。应直接放入固定液，按石蜡流程处理，但切片质量会下降。5.对。普鲁士蓝反应原理是：组织中的三价铁（Fe³⁺）在酸性条件下与亚铁氰化钾反应，生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀。6.错。液基细胞学技术提高了标本满意率和异常细胞检出率，是重大进步，但由于成本、设备等原因，传统巴氏涂片法在一些地区和场景下仍在应用，并未被完全取代。7.错。福尔马林固定会导致DNA严重片段化，通常只能扩增出较短（<300bp）的片段。扩增1000bp的长片段非常困难，成功率低。8.对。DAB（3,3‘-二氨基联苯胺）在HRP催化下氧化生成不溶性的棕褐色聚合物，该产物性质稳定，不溶于水、乙醇和二甲苯，便于后续脱水、透明和封片。9.对。脱水不彻底意味着组织中残留水分，后续透明剂（二甲苯）无法完全浸入，石蜡也难以浸透，导致切片时组织软、脆、易碎，无法形成连续完整的蜡带。10.错。荧光原位杂交（FISH）使用荧光素标记的探针，其结果必须在荧光显微镜下，用特定波长的激发光观察才能看到荧光信号。普通光学显微镜无法观察。四、简答题1.蓝化目的与方法：目的：苏木精染色后，细胞核呈现的是苏木精-铝复合物的红色或紫色。在弱碱性环境下（如自来水、弱氨水、Scott促蓝液），该复合物的电离状态发生改变，颜色由红/紫转变为稳定的蓝色，使细胞核着色更鲜明、对比度更高。常用方法：①流水冲洗（自来水呈弱碱性）15-30分钟；②1%氨水返蓝数秒至一分钟（需快速，防止组织脱色）；③使用专用的促蓝液（如Scott促蓝液）浸泡。2.三种抗原修复方法及原理：热诱导表位修复（HIER）：将组织切片置于缓冲液（如柠檬酸盐、EDTA）中，通过微波、高压锅或水浴加热。高温能断裂福尔马林引起的蛋白质交联，使被遮蔽的抗原表位重新暴露。酶消化修复：使用蛋白酶（如胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K）在适宜温度下消化切片。酶能水解蛋白质间的部分连接肽键，从而暴露抗原表位。适用于某些对热敏感的抗原或固定过度的组织。组合修复：先进行酶消化，再进行热修复，结合两者优势，用于修复难度较大的抗原。3.冷冻切片应用价值与局限性：应用价值：①快速：可在15-20分钟内得出初步诊断，为外科医生决定手术方案（如肿瘤切缘、良恶性判断、淋巴结转移等）提供关键依据。②保存抗原/酶活性：未经福尔马林固定，某些抗原和酶的活性保存更好，适用于部分免疫组化、酶组化研究。局限性：①形态学局限：冰晶易造成细胞和结构变形，分辨率低于石蜡切片，对某些精细结构（如核分裂象、淋巴瘤分型）判断困难。②取材局限：组织不宜过大、过厚、含脂肪或骨组织过多。③无法长期保存：冷冻组织块和切片长期保存易失活、降解。④技术要求高：操作需熟练，制片质量易受多种因素影响。4.封片的概念、常用封片剂及作用：概念：封片是在已染色的组织切片上，滴加封片剂并覆盖盖玻片的过程，以使切片与空气隔绝，便于长期保存和显微镜观察。常用封片剂：中性树胶（或合成树脂如DPX、Entellan）。作用：①永久保存：封片剂固化后，能防止切片褪色、吸潮、霉变。②光学清晰：封片剂的折射率与玻璃相近，能减少光散射，使图像更清晰。③固定盖玻片：使盖玻片牢固附着于载玻片。5.网状纤维染色原理及应用意义：原理（以Gomori银浸染法为例）：网状纤维主要由III型胶原蛋白构成，表面覆盖有蛋白多糖和糖蛋白。氨银溶液中的银氨络离子Ag应用意义：①鉴别癌与肉瘤：癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌细胞间无；肉瘤细胞间可见散在网状纤维。②显示组织结构：清晰显示肝小叶、淋巴结、骨髓等器官的网状支架。③观察病变：观察肝硬化、纤维化、某些肿瘤（如血管肉瘤）的浸润模式等。④辅助淋巴瘤分型：观察淋巴结结构是否破坏。五、论述/案例分析题1.高质量HE切片完整流程及注意事项：流程：取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→展片与烤片→脱蜡至水→HE染色（苏木精→分化→蓝化→伊红）→脱水→透明→封片。关键步骤注意事项：取材：组织厚度不超过0.5cm，大小适宜，避免挤压。固定：使用足量（10-20倍体积）10%中性福尔马林，及时固定（离体后30分钟内）。小组织固定4-6小时，大组织需12-24小时以上，避免过度固定。脱水：梯度乙醇脱水需充分、渐进，低浓度开始，防止组织收缩变形。透明：使用新鲜二甲苯，至组织呈透明状。时间不宜过长，防止组织变脆。浸蜡与包埋：使用熔融纯净的石蜡，温度控制在58-62℃。浸蜡需彻底（更换2-3次）。包埋时组织摆放平整，方向正确（如管腔、黏膜面），无气泡。切片：切片刀锋利，切片厚度通常3-5μm。动作平稳连续，形成完整蜡带。展片与烤片：展片水温根据蜡熔点调整（通常45℃左右），无皱褶。充分烤片（60-65℃）使切片紧密粘附。染色：苏木精染色时间根据染液新旧和室温调整。分化是关键，镜下控制至细胞核清晰、背景干净。蓝化要充分。伊红染色时间宜短，分化（在脱水乙醇中）控制胞浆着色深浅。封片：中性树胶浓度适中，无气泡，盖玻片覆盖完整，无胶溢出。2.淋巴瘤免疫组化相关问题：（1）前处理注意事项：固定：淋巴结应尽快（离体后1小时内）剖开，投入足量10%中性福尔马林。固定时间12-24小时为宜，避免超过72小时导致抗原过度交联。脱水、透明、浸蜡：程序化脱水机应定期更换试剂，保证脱水透明彻底。浸蜡温度不宜过高（<65℃），时间充分。包埋：注意淋巴结的切面方向，确保最大切面能展示皮质、髓质和淋巴窦结构。（2）免疫组化检测套餐设计：一套基本的淋巴瘤分型套餐应包括：全T细胞标志（CD3,CD5），全B细胞标志（CD20,CD79a,PAX5），增殖指数（Ki-67），生发中心标志（CD10,BCL-6），生发中心外标志（MUM1），大细胞标志（CD30），鉴别诊断标志（如鉴别经典霍奇金：CD15,CD30；间变大细胞淋巴瘤：ALK；套细胞淋巴瘤：CyclinD1；Burkitt淋巴瘤：C-MYCFISH更佳）等。至少8种：如CD20,CD3,CD5,CD10,BCL-6,MUM1,Ki-67,CD30。（3）背景着色过深原因及解决：原因：①内源性过氧化物酶/碱性磷酸酶未完全阻断。②一抗浓度过高或孵育时间/温度过长。③抗原修复过度（特别是热修复）。④DAB显色时间过长或浓度过高。⑤组织干燥（脱片边缘常见）。⑥切片上有残留的固定液或色素沉淀。⑦二抗或检测系统非特异性结合（封闭血清不足或失效）。解决：①确保内源性酶阻断步骤充分。②优化一抗工作浓度和孵育条件。③