分子病理检测操作技师考试试卷及答案

分子病理检测操作技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.PCR反应的三个基本步骤是______、退火、延伸。2.DNA提取中常用的蛋白降解试剂是______。3.荧光定量PCR中，荧光信号达到阈值时的循环数称为______值。4.石蜡包埋组织RNA提取时，需加入______以抑制RNA酶活性。5.Sanger测序的核心原理是利用______终止DNA链延伸。6.原位杂交技术中，荧光标记的探针称为______探针。7.检测基因扩增的常用方法除FISH外，还有______（举1例）。8.核酸电泳中常用的指示剂是______。9.实时荧光定量PCR中，常用的内参基因是______（举1例）。10.免疫组化的英文缩写是______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.以下哪种不是DNA提取常用试剂？A.蛋白酶KB.酚氯仿C.乙醇D.蔗糖2.PCR反应中延伸步骤的温度一般为？A.94℃B.55℃C.72℃D.37℃3.原位杂交（ISH）检测的靶标是？A.蛋白B.DNA/RNAC.多糖D.脂类4.荧光定量PCR的定量类型不包括？A.绝对定量B.相对定量C.半定量D.全定量5.石蜡包埋组织脱蜡的常用试剂是？A.无水乙醇B.二甲苯C.丙酮D.异丙醇6.以下哪种方法可检测点突变？A.Sanger测序B.普通PCRC.琼脂糖电泳D.免疫组化7.FISH检测中，计数细胞数一般需至少？A.20个B.50个C.100个D.200个8.RNA提取时，需避免的污染是？A.DNA酶B.RNA酶C.蛋白酶D.脂酶9.实时荧光定量PCR中，阈值设定在？A.荧光信号基线期B.指数增长期C.平台期D.任意期10.以下哪种属于核酸探针的类型？A.DNA探针B.抗体探针C.酶探针D.蛋白探针三、多项选择题（每题2分，共20分）1.影响PCR扩增效率的因素包括？A.引物浓度B.退火温度C.模板纯度D.镁离子浓度2.原位杂交技术包括？A.FISHB.CISHC.PCRD.IHC3.DNA提取的常用方法有？A.酚氯仿抽提法B.离心柱法C.磁珠法D.煮沸法4.荧光定量PCR的荧光报告系统包括？A.SYBRGreenB.TaqMan探针C.分子信标D.抗体标记5.石蜡包埋组织样本的特点是？A.RNA易降解B.DNA相对稳定C.蛋白易变性D.无需特殊处理6.分子病理检测中常见的基因异常包括？A.点突变B.基因扩增C.融合基因D.缺失7.核酸电泳的影响因素有？A.凝胶浓度B.电压C.电泳时间D.核酸分子量8.原位杂交的操作步骤包括？A.探针制备B.样本预处理C.杂交D.信号检测9.以下属于内参基因的是？A.GAPDHB.β-actinC.HER2D.EGFR10.PCR反应中可能出现的问题有？A.非特异性扩增B.无扩增产物C.条带模糊D.扩增效率低四、判断题（每题2分，共20分）1.石蜡包埋组织中RNA易降解，需全程避免RNA酶污染。（）2.Sanger测序可同时检测多个位点的突变。（）3.FISH检测需使用荧光显微镜观察信号。（）4.实时荧光定量PCR可实现对初始模板的绝对定量。（）5.DNA提取中，乙醇沉淀后需用70%乙醇洗涤。（）6.免疫组化（IHC）可检测基因的转录本。（）7.PCR反应中，退火温度越高，特异性越强。（）8.磁珠法提取核酸具有自动化程度高的特点。（）9.原位杂交的探针与靶序列需完全互补才能杂交。（）10.荧光定量PCR的Ct值越大，初始模板浓度越高。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述DNA提取的基本步骤。2.简述荧光定量PCR中Ct值的定义及意义。3.简述原位杂交（ISH）与免疫组化（IHC）的主要区别。4.简述石蜡包埋组织RNA提取的关键注意事项。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论PCR扩增失败的常见原因及解决方法。2.讨论FISH检测在肿瘤分子病理中的临床应用及注意事项。---答案部分一、填空题1.变性2.蛋白酶K3.Ct4.RNA酶抑制剂（或RNasin、DEPC）5.双脱氧核苷酸（ddNTP）6.荧光原位杂交（或FISH）7.荧光定量PCR（或数字PCR、免疫组化）8.溴化乙锭（EB）（或SYBRGreen）9.GAPDH（或β-actin、18SrRNA）10.IHC二、单项选择题1.D2.C3.B4.D5.B6.A7.D8.B9.B10.A三、多项选择题1.ABCD2.AB3.ABC4.ABC5.ABC6.ABCD7.ABCD8.ABCD9.AB10.ABCD四、判断题1.√2.×3.√4.√5.√6.×7.√8.√9.×10.×五、简答题1.答：DNA提取基本步骤为：①样本裂解：加蛋白酶K、SDS等破坏细胞膜/核膜，降解结合蛋白；②去除杂质：酚氯仿抽提或离心柱法去除蛋白、多糖等；③核酸沉淀：加乙醇/异丙醇使DNA沉淀；④洗涤：70%乙醇洗去盐离子；⑤溶解：TE缓冲液或无酶水溶解。需注意避免核酸酶污染。2.答：Ct值是荧光信号达到阈值（基线标准差3倍）时的循环数。意义：与初始模板浓度成反比（模板越高，Ct越小），可通过标准曲线实现绝对/相对定量，是荧光定量PCR定量的核心参数。3.答：①靶标不同：ISH检测DNA/RNA，IHC检测蛋白；②试剂不同：ISH用核酸探针，IHC用特异性抗体；③操作不同：ISH需核酸变性，IHC需抗原修复；④结果不同：ISH定位基因/转录本，IHC定位蛋白表达。4.答：①脱蜡充分：二甲苯+梯度乙醇去除石蜡；②抑制RNA酶：加RNasin或用DEPC处理试剂；③延长消化：55℃蛋白酶K过夜；④选专用试剂盒：如硅胶膜柱提取；⑤及时保存：提取后-80℃冻存，避免反复冻融。六、讨论题1.答：常见原因及解决：①模板问题：降解（换新鲜样本）、纯度低（重提取）；②引物问题：设计不佳（重设计）、浓度不当（优化）；③反应条件：退火温度不适（梯度PCR）、Mg²+浓度低（调整）；④酶问题：Taq酶失活（换新鲜酶）；⑤污染：气溶胶（分装试剂、无酶耗材）。需逐一排查，先确认模板/酶，再优化条件。2.答：临床应用：①肿瘤靶向治疗指导（如