二轮复习-动物细胞培养与单克隆抗体-高三-生物学-课件

张瑞云南省普洱市民族中学动物细胞培养与单克隆抗体1、抗体的本质是什么？其功能是？由什么细胞产生？2、免疫系统主要由哪几部分组成？免疫系统的主要功能是什么？3、传统方法从动物血清中分离出来的抗体有什么特点？二、免疫系统的组成及其功能免疫系统的组成T淋巴细胞B淋巴细胞淋巴细胞免疫器官免疫细胞免疫活性物质树突状细胞、巨噬细胞等迁移到胸腺成熟在骨髓中成熟（免疫细胞生成、成熟或集中分布的地方）（由免疫细胞或其它细胞产生的发挥免疫作用的物质）（发挥免疫作用的细胞）（位于淋巴液、血液和淋巴结中）——骨髓、胸腺

脾、淋巴结、扁桃体等——抗体、细胞因子、溶菌酶等考点一

免疫系统的组成一、免疫系统的组成及其功能免疫系统的功能免疫防御外来抗原性异物(病原体或异体器官移植)免疫自稳免疫监视对象对象异常对象异常异常过强:组织损伤(过敏反应)过弱或缺失:易被病原体感染肿瘤发生或持续的病毒感染自身衰老或损伤的细胞自身免疫病突变的细胞最基本的功能考点二

免疫系统的功能一、免疫系统的组成及其功能动物细胞培养概念：原理：过程：细胞的增殖条件：取动物组织单个细胞细胞悬液原代培养传代培养二、动物细胞培养营养条件无菌、无毒的环境温度、pH和渗透压气体环境无菌技术、抗生素、定期更换培养液清除代谢产物，防止代谢产物积累对细胞造成危害36.5±0.5℃，7.2~7.495%空气＋5%CO2的混合气体维持培养液的pH细胞代谢所必需的从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适当的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）1.取材？原因？2.如何分散？3.分散成单个细胞的原因？4.胃蛋白酶行吗？5.在用胰蛋白酶处理时间是否越久越好？6.

细胞培养一段时间后，分裂会受阻的原因？7.动物细胞生长的特点？8.怎样进行传代培养？9.区分：胰蛋白酶两次处理的目的？用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等，将组织分散成单个细胞细胞分裂能力强，分化程度低

胃蛋白酶的适宜pH约为2，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，在此环境中胃蛋白酶会失活悬浮培养的细胞分裂受阻的原因：细胞密度过大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏等贴壁细胞分裂受阻的原因：①细胞密度过大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏等

②发生接触抑制细胞贴壁、接触抑制①悬浮培养的细胞：直接用离心法收集②贴壁细胞：重新用胰蛋白酶等处理，分散成单个细胞，再用离心法收集动物胚胎或幼龄动物组织使细胞与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出将组织分散成单个细胞贴满瓶壁的细胞分散成单个细胞细胞膜含有蛋白质，长时间处理会损伤细胞，要控制好时间。1、定义：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2、原理：细胞膜的流动性3、结果：融合形成杂交细胞（具有原来两个细胞的遗传信息）4、融合方法：与植物原生质体融合相同电融合法、离心法聚乙二醇（PEG）融合法灭活病毒诱导法（动物细胞融合特有）5、意义：①突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能；②研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。③利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。三、动物细胞融合技术某生物科技小组同学获得新型冠状病毒抗体的实验思路为“用新型冠状病毒S蛋白多次免疫，然后从脾脏中获取的B细胞进行筛选，得到特定的B细胞在体外培养获得大量浆细胞，进而通过体外培养获得抗新冠病毒的单克隆抗体。”请评价这一实验思路是否合理，若不合理请说出不合理之处并进行修正。三、动物细胞融合技术评一评3.单克隆抗体制备的过程：思考：1.包括的阶段及原理：2.注射特定抗原的目的：3.诱导融合的方法？培养液中细胞类型？（融合只考虑两两融合的情况）：4.第一次筛选和第二次筛选的目的和方法？5.杂交瘤细胞的特点？6.如何获取大量所需杂交瘤细胞？如何获取单克隆抗体？7.单克隆抗体的优点8.单克隆抗体的应用动物细胞融合（细胞膜的流动性）动物细胞培养（细胞增殖）获得产生特定抗体的B淋巴细胞灭活病毒诱导法B淋巴细胞；骨髓瘤细胞；杂交瘤细胞；B—B；瘤—瘤第一次筛选：获得杂交瘤细胞，方法——选择培养基第二次筛选：获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，方法——克隆化培养、抗体检测既能迅速大量增殖，又能产生特异性抗体体外培养→从细胞培养液中提取、注射到小鼠腹腔内增殖→从小鼠腹水中提取能准确识别抗原的细微差异，与特定的抗原发生特异性结合，可大量制备。①作为诊断试剂（早早孕诊断试剂盒；用同位素或荧光标记的单克隆抗体定位肿瘤等）②运载药物③治疗疾病体内培养的优点：不需再提供营养物质以及无菌环境比较植物细胞工程和动物细胞工程的异同点

(1)灭活的病毒可用于诱导动物细胞融合。[2021·辽宁卷](

)(2)用特定的病毒免疫小鼠可制备单克隆抗体。[2021·辽宁卷](

)(3)动物细胞培养中用盐酸溶解细胞间物质使细胞分离。[2021·浙江卷](

)(4)单抗制备过程中通常将分离出的浆细胞与骨髓瘤细胞融合。[2021·山东卷]()√√××课堂练习（5）动物细胞培养选用的材料大多为动物的受精卵（）（6）营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制[2023·海南卷]（）××（2020·全国Ⅰ）为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。回答下列问题：(1)上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是_____________________________________________________。(2)写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：___________________________________________________________________________________________________。诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞取小鼠甲的脾脏用物理方法或胰蛋白酶处理使其分散成单个细胞，加入培养液制成单细胞悬液(3)为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于________________，使用该培养基进行细胞培养的结果是_________________________。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是________________________________。选择培养基只有杂交瘤细胞能够生存抗原与抗体的反应具有特异性课堂练习(2023·湖北卷)某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体,以期快速检测该病毒,其主要技术路线如图所示。回答下列问题。(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前,已免疫的脾细胞(含浆细胞)

(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量;添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合,该过程中PEG对细胞膜的作用是

使细胞接触处的脂质分子重新排布,打开细胞膜,使细胞发生融合

不需要课堂练习(2)在杂交瘤细胞筛选过程中,常使用特定的选择培养基(如HAT培养基),该培养基对

和

生长具有抑制作用。(3)单克隆抗体筛选中