冠状病毒治疗及预防的研究进展

冠状病毒治疗及预防的研究进展摘要：冠状病毒是一类能引起人和动物呼吸道与肠道感染的病原体，在自然界广泛存在。近年来，陆续出现了多种新型人冠状病毒，病毒感染所致的呼吸道疾病与其传染性对全球公共卫生造成了巨大威胁。本文对冠状病毒的基本特点、研究历史、治疗与预防等几个方面进行综述，旨在为其研究提供基础资料和参考。关键词：冠状病毒；治疗药物；病毒预防AdvancesinthePreventionandTreatmentofCoronavirusAbstract:Coronavirusesarewidespreadinthenature.Itisapathogenwhichresultinrespiratoryandintestinalinfectionsinhumansandanimals.Inrecentyears,avarietyofnewtypesofhumancoronavirushaveemerged,andtherespiratorydiseasesandinfectiousnesscausedbyvirusinfectionhaveposedagreatthreattoglobalpublichealth.Thispaperreviewsthebasiccharacteristics,researchhistory,treatmentandpreventionofcoronavirusinordertoprovidebasicinformationandreferenceforitsresearch.Keywords:Coronavirus;Therapeuticdrug;Virusprevention1引言冠状病毒自人类1937年第一次发现来，已成为了一类严重危害人类与动物的病原体。近二十年以来，全球重大卫生安全威胁频频来自新变异的冠状病毒。目前，关于冠状病毒的研究进入蛋白质分子水平，冠状病毒的入侵与致病机制已经被揭示。迄今，冠状病毒引发的疾病主要是辅助治疗，基本没有特效药与疫苗，积极的预防措施是应对冠状病毒病的关键一步。2冠状病毒的介绍2.1冠状病毒的概念冠状病毒能造成高等脊椎动物的呼吸系统、消化系统及神级系统感染，是一类危害人类的主要病毒性病原体之一。冠状病毒是一大类广泛存在于自然界的病毒，能感染多种脊椎动物，如人、猪、犬等。2019-nCoV的出现标志着高致病性冠状病毒在近些年来的第3次流行。此前是SARS-CoV与MERS-CoV这两类冠状病毒引发的高传播性和致病性疾病，冠状病毒已经成为全球严重的呼吸道感染病原体。2.2冠状病毒的研究历史1912年，记载最早的冠状病毒感染动物是猫。1937年，博德特等对鸡的实验中完成了人类第一次分离得到冠状病毒的壮举。1956年，引发呼吸道感染的鼻病毒被发现，鼻病毒与冠状病毒感染症状非常相似，科学家发现鼻病毒感染并不是引起感冒的全部因素，对冠状病毒感染的研究开始发展。1965年，英国学者泰利尔和拜诺经多次人体试验和干扰试验，将引发人感冒的冠状病毒分离成功，后来定名为HCoV-229E。1967年，阿尔梅达等人通过电子显微镜对这些引发感冒的病毒进行了观察，发现这类病毒囊膜突起规则地排列成皇冠状，两年后因这些病毒在电镜下的王冠形态将其定名为冠状病毒。20世纪70年代后期，美国科学家从人的上呼吸道分离得到第二种感染人类的冠状病毒HCoV-OC43，这些引起人类疾病的冠状病毒主要表现为呼吸道和肠道感染。SARS爆发之前，在人体内发现的冠状病毒只有HCoV-229E与HCoV-OC43两种，这两种病毒都只能导致轻微的呼吸道疾病，所以冠状病毒的研究并未受到重视。2003年SARS开始流行，因其高致死率与严重的呼吸道感染症状，人们对冠状病毒的态度开始发生变化。SARS-CoV在当时被称为“新型冠状病毒”，极短的时间就扩散到全球各地。SARS引发肺部的血管损伤并改变其通透性，从而导致严重呼吸窘迫症，同时攻击宿主免疫系统造成免疫系统损伤。SARS的爆发，也带动了冠状病毒的相关研究发展。2003年4月，世界卫生组织（WHO）正式确认SARS病原体是一种新型冠状病毒。2004年，VanderHoek等人在一名7个月大的儿童身上分离出来第三种感染人的冠状病毒，该儿童患有患有支气管炎和结膜炎。该病毒完整的基因组序列表明它不是重组病毒，而是一种新的冠状病毒，被命名为“HCoV-NL63”。HCoV-NL63在多个国家被发现，其感染症状虽较轻微，但对免疫力低的特定人群可能存在一定的威胁性。2005年，HCoV-HKU1由香港大学Woo等人从中国深圳返回的71岁肺炎患者身上发现。HCoV-HKU1感染通常引起呼吸道感染并不严重。2012年9月，一种新型冠状病毒被发现，患者感染是一种呼吸道综合症，由于中东是早期疫情发生地，因此称为中东呼吸道综合症（Middleeastrespiratorysyndrome，MERS），MERS死亡率高于SARS，因此也受到了世界卫生组织和各国科学家的关注。MERS-CoV通过二肽基肽酶4受体入侵宿主细胞，其天然宿主是蝙蝠，单驼峰是感染人类的中间宿主。MERS-CoV是第6种能感染人的冠状病毒，MERS感染患者的临床表现为高烧、呼吸困难等呼吸道症状，严重患者出现肾功能衰竭，致死率高达40%。2019年12月，我国湖北省武汉市发现新型冠状病毒感染的肺炎患者，这种新型冠状病毒严重威胁人类生命健康，病毒快速扩散到全球。截至2020年4月21日，全球累计确诊近232万例，累计死亡近16万例。此次发现新型冠状病毒（2019-nCoV）是第7种感染人的冠状病毒，未来可能还会出现新的冠状病毒变型。2.3冠状病毒的分类冠状病毒属于亚基因簇病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属，感染宿主仅限于高等动物，可引发多种急慢性疾病。根据系统发育树，冠状病毒可分为α、β、γ、δ四个属，其中β属冠状病毒又分为A、B、C、D四个独立谱系。α与β属冠状病毒主要感染人、猪、犬等哺乳动物，γ属冠状病毒主要感染鸡、鸭等禽类，δ属冠状病毒感染哺乳动物及禽类。主要的冠状病毒系统分类如表1-1所示。2.4冠状病毒的生物学特性冠状病毒具有囊膜，在电镜下呈王冠状，大小约为60nm~200nm。冠状病毒属于单链RNA病毒，衣壳对称方式为螺旋对称，仅感染高等脊椎动物。病毒基因组编码产物有S蛋白、M蛋白、N蛋白、E蛋白、HE蛋白和非结构蛋白。2019年新型冠状病毒通过S蛋白侵入ACE2受体感染宿主，从而造成一系列呼吸道感染症状。冠状病毒的寄生宿主十分广泛，蝙蝠体内存在多种冠状病毒寄生，SARS病毒的中间宿主是果子狸，MERS病毒的中间宿主是单驼峰，而此2019年新型冠状病毒的有多种动物中间宿主。2.4.1冠状病毒的理化性质冠状病毒对酸碱度与高温较为敏感，过酸过碱都影响其活性，病毒复制的最适pH在中性左右。病毒的抵抗力随温度的升高而下降，环境中高湿度也对冠状病毒有一定的抑制作用。有机溶剂与消毒剂均对冠状病毒有一定的抑制作用，紫外线照射也是一种有效抑制病毒的方式，此次的2019-nCoV在75℃下半小时即可将其灭活。常用化学消毒剂如75%乙醇、乙醚、氯仿、含氯类过氧化物类等在一定时间作用下均可有效杀灭病毒。2.4.2冠状病毒的致病性冠状病毒主要引起高等动物的呼吸道和肠道感染，普通冠状病毒感染并不严重，仅引起轻微感冒症状，对免疫力较强的人可能不出现感染症状。严重的冠状病毒如SARS-CoV等会造成一些严重的肺炎感染症状，甚至呼吸衰竭致死。对人类的侵害主要是冠状病毒病原体的变异型，多数冠状病毒只能在人胚器官中生长增殖，引起普通感冒、咽肺炎等。病毒潜伏期平均3d，病程一般为6~7d。2.4.3冠状病毒的分子结构冠状病毒颗粒包含4种主要的结构蛋白：（1）非常大的纤突蛋白(Spike，S)；（2）一种特别的膜蛋白（Menbrane，M);（3）内部磷酸化的核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N)；（4）此外还有一个较小分子的包膜蛋白（Envelope，E），一些冠状病毒还含有一个血凝集素酶（Hemagglutinin-esterase，HE）HE蛋白。目前最大RNA病毒基因组是冠状病毒中30kb正单链RNA基因组。S蛋白具有大量N-连接糖基化，利用氨基端信号序列进入内质网，以三聚体的形式使其在病毒表面形成纤突结构。S蛋白是一种I型融合蛋白，决定病毒和细胞间的识别与吸附，是介导病毒侵入过程的必要因子。M蛋白是一种跨膜蛋白，含有3个跨膜结构域与1个保守结构域，分子大小为20~30kD,病毒颗粒的组装与出芽主要由M蛋白负责。病毒核衣壳装配的后期工作由M与N蛋白共同完成。N蛋白有3个结构域，是病毒基因组成分，分子量大小为50~60kD，能作为鉴定抗原。N蛋白与病毒基因形成核衣壳，参与病毒的转录过程，具有3个不同与病毒感染相关的结构域。E蛋白组成病毒包膜，具有离子通道活性，参与病毒的组装与出芽，病毒的增殖释放及致病性都与包膜蛋白E有密切联系。HE蛋白通过与O-乙酰唾液酸结合介导病毒的感染与释放，同时与病毒在宿主体内的致病性有关。2.4.4冠状病毒的基因组结构冠状病毒基因组大小为25~30kb，为RNA病毒中最大，属于ssRNA。冠状病毒基因组能编码核衣壳蛋白N、纤突蛋白S、膜蛋白M、包膜蛋白E四种结构蛋白和一系列参与复制、转录的非结构蛋白。冠状病毒基因组5'存在帽子结构，3'具有PolyA结构，能够直接翻译出蛋白质产物。冠状病毒基因组的5'端存在非编码区以及两个重叠的开放阅读框架（ORF），大多编码一些非结构蛋白。基因组3'端具有一些病毒结构蛋白，结构蛋白基因是冠状病毒变异的基础。不同冠状病毒非结构蛋白和HE蛋白基因一般不同，一些冠状病毒还具有特殊的编码辅助蛋白的基因，这些基因较为保守。病毒新的基因组RNA在宿主细胞的胞浆中合成，装配转运到细胞膜表面是在高尔基体上完成的，新的病毒颗粒通过出芽形成释放。对病毒基因组的了解有助于病原学鉴定、病毒溯源及对疫情防控的预判作用。2.4.5冠状病毒的入侵机制冠状病毒通过S蛋白来识别宿主细胞表面的受体，使病毒与受体结合从而进入宿主细胞。S1和S2两个亚单位构成S蛋白的胞外段，病毒入侵靶细胞时，S1与细胞表面的受体结合，S2介导二者膜融合，S蛋白帮助病毒基因组进入宿主细胞。宿主细胞表面与冠状病毒结合的受体类型决定宿主的特异性。人冠状病毒229E（HCoV-229E）与犬冠状病毒（CCoV）通过氨基肽酶N（AminopeptidaseN，APN）入侵细胞。MERS-CoV通过S蛋白上的受体结合区（Receptorbindingdomain，RBD）与细胞表面受体二肽基肽酶-4（Dipeptylpeptidase4，DPP4）相互作用，介导病毒吸附融合进入宿主细胞，开始病毒的复制。人冠状病毒NL63（HCoV-NL63）与SARS-CoV通过血管紧张素转换酶2（Angiotensinconvertingenzyme2，ACE2）感染细胞。石正丽团队证明2019-nCoV通过ACE2入侵宿主细胞。2.5冠状病毒病冠状病毒感染高等动物导致呼吸道疾病，2019-nCoV是目前发现的感染人的第七种冠状病毒。感染主要引发冠状病毒肺炎，部分存在心肌、肾脏、消化道感染症状。病毒感染轻则引发普通感冒，重则导致严重急性呼吸综合症（Severeacuterespiratorysyndrome，SARS）、中东呼吸综合征（Middleeastrespiratorysyndrome，MERS）、新型冠状病毒肺炎（Coronavirusdisease2019,COVID-19）等严重疾病。2.5.1流行病学一般的冠状病毒感染表现为流涕、发烧、咳嗽等普通感冒症状，严重可导致急性呼吸综合症甚至死亡。病毒的致病力因病毒的类别不同而有所差异，引起的临床表现也都有所不同。冠状病毒感染的发病率女性高于男性，60岁高龄老人感染症状较严重，致死率也高于青年人。不同国家与地区报道的人群阳性率也不同，我国人群中有30%~60%的人存在冠状病毒抗体。冠状病毒通过飞沫、接触与高浓度气溶胶传播，中老年人较青年人易感染冠状病毒，感染的高峰期在冬季与春季。家庭、学校、公司等小范围区域存在较大聚集性感染的风险。人类对冠状病毒缺乏持久的免疫力，存在二次感染的风险。2.5.2临床症状临床上，多数冠状病毒感染只引起轻微的感冒相似症状，并且免疫力强的患者能在短时间内自愈。少数患者仍出现严重的肺炎、神经系统并发症。此次新型冠状病毒（2019-nCoV）感染以发热、咳嗽、乏力为主要特征，部分患者有腹泻、呕吐现象。临床潜伏期一般为5～7d，出现白细胞减少，淋巴细胞减少，肝转氨酶升高，C反应蛋白（CRP）轻度升高，胸部影像可呈现胸膜下斑片影、磨玻璃样影和间质性肺炎表现。重症肺炎出现多灶、多叶段受累，甚至出现白肺表现。有基础性疾病的感染者，仅几天就能发展为重症，出现呼吸窘迫、低氧血症。部分患者出现呼吸衰竭、休克，伴随各种器官的衰竭变为危重症，甚至死亡。2.5.3病理组织学变化冠状病毒感染者的各种器官存在病变现象。病毒攻击的主要靶器官是肺部，出现间质性的肺炎，肺泡表面有坏死脱落现象，严重患者出现肺部纤维化。病毒攻击的另一主要靶器是免疫器官官，脾脏出现充血、出血、萎缩、甚至组织大片坏死，淋巴结出现高度血管扩张与组织片状坏死等。患者肺、肝、肾、心脏等器官有坏死现象，出现全身中毒反应及继发感染。病毒感染对身体骨髓粒细胞、巨核细胞系统有显著的抑制作用。2.5.4发病机理（1）超敏反应学说：冠状病毒侵入人体后引起的超敏反应不仅是引起患者死亡的主要原因,也是主要的发病机制。（2）T细胞免疫失衡学说：冠状病毒患者发病后导致CD4+T等淋巴细胞数量下降，病人的细胞免疫功能从而受到严重破坏。（3）病毒作用学说：宿主细胞内病毒进行大量繁殖,同时有大量毒性颗粒的释放,从而造成肺、肾等器官的损伤。（4）细胞因子失调学说：冠状病毒感染之后引发了许多炎性介质的释放,随着巨噬细胞的活化,机体产生过度的炎症反应，出现细胞因子失调导致免疫失衡。3冠状病毒的治疗3.1药物治疗3.1.1洛匹那韦/利托那韦洛匹那韦/利托那韦（Lopinavir/Ritonavir，LPV/r）是一类蛋白酶抑制剂，对病毒的反转录阶段有抑制作用。LPV/r通过阻断Gag-Pol聚蛋白的分裂而对病毒有抑制作用，病毒复制产生无感染力的毒粒。LPV/r主要用于人类获得性免疫缺陷病毒(HIV)的治疗，在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、严重急性呼吸综合征(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)的治疗中有一定经验。3.1.2阿比多尔阿比多尔（Arbidole，ARB）在体内外有广谱抗病毒活性，对多种呼吸道病毒包括冠状病毒都有一定的抑制作用，于1993年在俄罗斯上市。ARB通过激活体内的一种抗病毒蛋白2，5-寡聚腺苷酸合成酶（2，5-Oligoadenylatesynthetase,OAS），特异性抑制宿主细胞膜与病毒脂膜的接触、黏附及融合。病毒基因被ARB作用而无法进入宿主细胞核，从而使病毒遗传物质的合成受到抑制。阿比多尔可诱导干扰素产生，对巨噬细胞的吞噬作用有激活效应，从而增强机体的免疫功能，对冠状病毒起预防及治疗的作用。3.1.3利巴韦林利巴韦林（Ribavirin）具有广谱的抗病毒活性，属于一类合成的核苷类抗病毒剂，对多种病毒都显示出良好的抗性，在治疗病毒性感染疾病方面取得了良好效果，临床常用于疱疹病毒引发的皮肤病和流感病毒引发的病毒性肺炎、支气管炎等，联合干扰素可用于各型肝炎的治疗。利巴韦林与α-干扰素的联合治疗，具有一定对冠状病毒的抑制作用。3.1.4瑞德西韦瑞德西韦（Remdesivir）是一种核苷类似物，属于先导药物,进入人体以后需首先被细胞激活,随后病毒的RNA聚合酶被抑制,病毒核酸的复制从而被阻断,抗病毒活性发挥出来。瑞德西韦本是用于埃博拉病毒治疗的药物,体外实验中显示出很强的丝状病毒抑制作用。研究表明瑞德西韦对SARS、MERS等冠状病毒也有较好的抑制效果。3.1.5法匹拉韦法匹拉韦（Favipiravir）是一类广谱抗病毒药物,由日本富士公司开发，在治疗流感病毒引发的疾病领域取得良好的效果。法匹拉韦主要通过竞争性抑制病毒RNA聚合酶来抑制病毒的增殖，法匹拉韦已经在埃博拉病毒患者治疗中取得良好效果。法匹拉韦不仅抗流感病毒，还能对其他RNA病毒的复制有阻断作用,包括布尼亚病毒、狂犬病毒、黄病毒、沙粒病毒等。目前体外实验显示其具有抗COVID-19活性，法匹拉韦的抗冠状病毒作用还需临床试验和动物实验进一步验证。3.2免疫治疗3.2.1康复者血浆康复者血浆治疗法已成为一种冠状病毒感染潜在的治疗方法，康复者血浆中含有高效价冠状病毒特异性抗体。血浆经过病毒灭活处理，并进行病毒抗体与各种病原微生物检测后，可用于冠状病毒感染的危重患者治疗。临床反映，部分患者接受治疗后，炎症指标明显下降，临床症状好转现象明显。对于重症甲型流感及SARS-CoV感染患者康复期血浆治疗还能够降低其致死率。3.2.2干扰素治疗干扰素（Interferon,IFN）是一类有抗病毒、免疫调节、抗菌、抗肿瘤等多重作用的细胞因子，在哺乳动物宿主抵抗病原体过程中分泌。可分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型3类。Ⅰ型干扰素又称“病毒干扰素”，主要有α-IFN、β-IFN两种，由先天性免疫细胞分泌，具有广谱抗病毒作用。α-IFN是一类人类主导性抗病毒干扰素亚型，对几乎所有病毒的繁殖与复制都有一定的抑制作用。α-IFN于1980年在微生物中表达成功，现已能够进行大规模生产。α-IFN由辅助性T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞产生，通过激活巨噬细胞与细胞免疫作用，刺激细胞产生多种抗病毒蛋白，这些抗病毒蛋白能让病毒mRNA的信息传递受到抑制从而阻断病毒蛋白质的合成，最后使细胞免受病毒感染。3.2.3胸腺肽类免疫调节药物胸腺肽又称胸腺素，于1980年在意大利上市，是一组胸腺分泌的具有非特异性免疫生理活性的小分子多肽。胸腺肽具有增强T细胞的免疫功能，对免疫功能缺陷的患者有治疗效果。胸腺肽类药物能产生人工被动免疫，对免疫功能正常的健康人群意义不大，但对免疫功能低下的特殊人群预防冠状病毒感染有显著的增益作用。3.2.4疫苗冠状病毒疫苗主要有重组病毒载体疫苗、基因工程亚单位疫苗、基因疫苗等，目前新型冠状病毒的腺病毒重组疫苗已进入后期临床试验。疫苗是高效率、低成本、有效控制病毒蔓延的最好预防策略，但是疫苗的研发要经历细胞和动物实验、临床研究、批准上市和质控生产等长达数年的过程。而病毒引发的疫情通常是短期的流行，而疫苗研制是一个长期的过程疫苗往往不能及时有效的抑制疫情。3.4中草药治疗3.4.1清肺排毒汤清肺排毒汤由麻杏石甘汤、小柴胡汤、五苓散、射干麻黄汤4个经典方组成，含有麻黄、炙干草、杏仁等21味中药组分。功能祛寒利湿，又可通利三焦、调和脾胃，能平衡免疫、消除炎症，作用部位其首要是肺、其次是脾，通过对核糖体蛋白的抑制从而使病毒mRNA翻译受到抑制，阻断病毒复制而产生抗病毒作用。3.4.2连花清瘟胶囊连花清瘟以麻杏石甘汤合银翘散化裁而来，巧用大黄通腑泻热，配伍红景天清肺化瘀，具有清瘟解毒，宣肺泄热的功能。临床上连花清瘟胶囊能改善新型冠状病毒引发的细胞因子风暴造成的免疫损伤，对患者发热、咳嗽、乏力等症状有良好的改善效果。4冠状病毒的预防呼吸道感染是冠状病毒引发的主要症状，冠状病毒已经成为危害性最大的传染病原之一。疫情防控的重点在于早发现、早诊断、早隔离、早治疗。目前为止，2019-nCoV肺炎尚无特效药治疗，病毒的感染预防与控制是关键。4.1冠状病毒的检测目前，最常用的检测方法主要有核酸的检测和免疫学的检测两大类。2019年的SARS-CoV-2的遗传物质是RNA，对其特殊的核酸序列进行检测，能精准的确定该病毒。4.1.1核酸检测核酸检测法是对病毒RNA基因组进行检测，基因组测序：基因组测序是一种鉴别病毒感染精准度高的方法，在病毒的最初鉴定和病毒后续研究中起重要作用，通过基因组测序得出样本序列，与已知冠状病毒序列进行对比实验，当两者高度同源时便可确认为阳性。基因组测序的缺点是测定时间较长，对设备有较高要求，不适合大规模进行临床诊断。荧光定量PCR核酸检测：设计特异性的引物对病毒的核酸序列进行识别，将对应的病毒核酸片段进行扩增，同时对应的病毒核酸片段与高度特异性的TaqMan探针进行结合,后者在Taq酶外切酶活性作用下发生水解,由此产生荧光信号，实时扩增曲线由荧光信号与扩增循环数两者换算得出。目前荧光定量PCR成为了新型冠状病毒检测中最常用的方法，各大商业公司试剂盒中以2019-nCoV的ORF1ab基因、E基因和N基因为检测靶位点。利用荧光定量PCR对疑似新型冠状病毒感染的病人进行核酸检测,能尽早检测诊断是否感染新型冠状病毒。数字PCR（dPCR）：利用微滴化与微流控技术为基础，病毒目标基因PCR扩增反应体系被分成到数百至数万个液滴中进行。微滴分析仪逐个读取统计每个反应室的荧光信号，病毒目标基因的绝对定量从而实现。数字PCR具有灵敏度高、耐受性高、准确性高和绝对定量的优势，但对设备要求较高的劣势也制约着它的普及。基因芯片：将核苷酸固定到玻璃片或硅晶片等固相载体上，样品与其进行生化反应后通过荧光探针获取核酸序列。一般将待测样品用荧光标记，在相应的激光器激发下得到杂交图谱，最后借助特定的分析软件来获取结果。基因芯片的优点是准确、快速、高通量，并且能同时进行多种病毒的检测。环介导等温扩增（LAMP）：是通过病毒靶基因的多个区域设计4种特异的引物,短时间内利用一种DNA聚合酶的链置换作用下对病毒的靶序列进行扩增，在恒温条件下完成核酸扩增反应。LAMP核酸扩增过程中会产生一种焦磷酸镁的副产物，这种白色沉淀能用浊度仪检测沉淀浊度来判定扩增靶基因序列的有无。LAMP的优点是特异性强、恒温快速、敏感度高、设备简单，可用于冠状病毒的现场快速检测。4.1.2免疫学检测免疫学检测法是对病毒相关抗原或病毒引发免疫反应而产生的特异性抗体进行检测，其中免疫标记技术是将抗原或抗体用各种标记物如荧光素、反射性同位素、酶等加以标记，从而提高检测灵敏度，可做定性定量分析。病毒的免疫学检测比核酸检测更加方便，不要求具有专业的实验室、实验设备、实验人员，能在社区、基层医院等公共场地开展病毒的核酸检测。酶联免疫法（ELISA）：通过酶对抗体或抗原进行标记，检测酶的颜色变化对病毒等各种抗原或产生的抗体进行定性定量分析。这种方法具有准确度高、特异性强、操作简便等优点，缺点是检测时间较长，检测结果受环境影响较大，并且需要使用洗板机、酶标仪等辅助设备。胶体金免疫色谱法（GICA）：以胶体金微粒对抗体进行标记，从而进行细胞表面的标志定位。GICA试剂盒通过捕获技术能