白蛾黑棒啮小蜂人工繁育与释放技术规程

1白蛾黑棒啮小蜂人工繁育与释放技术规程本标准规定了白蛾黑棒啮小蜂（TetrastichusseptentrionalisYang）人工繁育的术语和定义、工艺流程，基本设施和设备，替代寄主、种蜂、繁育、释放。本标准适用于以黄粉甲（Tenebriomolitor）蛹为替代寄主的白蛾黑棒啮小蜂人工繁育与释放。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1374美国白蛾检疫鉴定方法LY/T1704-2007白蛾周氏啮小蜂人工繁育及应用技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1美国白蛾Hyphantriacunea（Drury）属鳞翅目Lepidoptera，目夜蛾科Erebidae。为食叶害虫，是我国进出境检疫性有害生物和林业检疫性有害生物。寄主广泛，主要危害阔叶树，包括林木、果树、农作物及野生植物等。卵多产于寄主树冠周缘叶片背面。幼虫孵出即吐丝做网幕并在内群集取食危害树叶。老熟幼虫多在树皮裂缝、树下土块、瓦砾、枯枝落叶、包装物及建筑物缝隙等隐蔽处化蛹越冬。成虫有一定飞翔能力和趋光性。各虫态鉴定执行SN/T1374。3.2白蛾黑棒啮小蜂TetrastichusseptentrionalisYang属膜翅目Hymenoptera，姬小蜂科Eulophidae，黑棒啮小蜂种团（hawardispeciesgroup）。该蜂具有繁殖能力强和寄生能力强等优良寄生性天敌的特性，在森林害虫生物防治方面开发利用前景广阔。成虫形态特征参见附录A。3.3黄粉甲蛹Tenebriomolitor为拟步甲科Tenebrionidae粉甲属Tenebrio昆虫，亦称面包虫、面条虫等。黄粉虫经历完全变态发育，分为卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。黄粉甲富含多种营养成分，是重要的资源昆虫，在食品、保健品、医药和饲料等领域广泛应用。其适应能力强，生长快速且成本低，已成为继养蚕、养蜂业之后，发展迅速的养虫业之一。3.4人工繁育massrearing2根据白蛾黑棒啮小蜂的生物学特性（参见附录B），将其成蜂接入美国白蛾蛹或其他合适的替代寄主，通过人为控制温度、湿度，使其在寄主体内完成世代发育，增加发育代数，扩大个体数量，用于美国白蛾等食叶害虫的生物防治。3.5种蜂seedwasps自然环境条件下生长发育或室内人工繁育的第1~2代，个体健壮、适应性和繁殖力强，用于人工繁殖的白蛾黑棒啮小蜂。3.6滞育诱导diapauseinduction利用全暗光周期配合持续低温诱导白蛾黑棒啮小蜂稳定进入滞育状态的一个过程。3.7滞育解除diapausetermination通过条件控制，使白蛾黑棒啮小蜂结束滞育期，继续发育至羽化出蜂的过程。3.8复壮rejuvenation通过一定方法和技术（更换寄主、变温等使人工繁育数代后发生退化的白蛾周氏啮小蜂的各项指标恢复到正常水平的过程。一般应在人工繁殖5代~6代后进行蜂种复壮。4人工繁育技术4.1基本设施和设备接种室、操作台、冷藏箱、恒温培养箱（HWS-380型）、10目尼龙纱网、10mL离心管、脱脂棉、养虫盒、小号毛笔、记号笔、消毒设备、解剖镜、显微镜、指形玻璃试管、玻璃广口瓶、培养皿、镊子、剪刀、软毛刷、遮光黑盒、皮筋、棉塞、消毒药液等。4.2替代寄主4.2.1黄粉甲蛹挑选化蛹2d以内的新鲜虫体作为寄主，储藏温度控制在（5±5）℃,相对湿度保持在70~80%。4.3蜂种4.3.1种蜂采集4.3.1.1直接采集法美国白蛾蛹期，人工野外采集美国白蛾蛹，挑选出节间拉长不能活动、蛹壳光亮而薄的被寄生蛹，以单蛹放入指形管，在20℃的条件下保存。4.3.1.2诱集法美国白蛾蛹期，在林间挂美国白蛾蛹诱集，待自然界中美国白蛾羽化前取回，以单蛹放入指形管，在20℃的冰箱中保存。4.3.2种蜂选择从采集羽化的成蜂中选择体壮、个体大、活动能力强的做种蜂，淘汰弱蜂。34.3.3种蜂扩繁野外采集的种蜂数量有限时，可根据防治需要再进行1~2次扩繁，以扩繁的种蜂作为初级种蜂。4.4防治用蜂的大量繁育4.4.1接蜂方法每个10mL塑料离心管中放入1头刚化蛹1~2d的黄粉甲蛹，将羽化48h内已经完全交配的白蛾黑棒啮小蜂雌蜂用软毛刷接入管中，将蘸有10%蜂蜜水的脱脂棉片放于管口1/3处，供寄生蜂补充营养，然后脱脂棉封口。24h后转入恒温培养箱继续培养，温度控制在（24±2）℃,湿度控制在70~80%。4.4.2接蜂量1头黄粉甲蛹接3~5头雌蜂。4.4.3滞育诱导将已接蜂的黄粉甲蛹放置在18℃的恒温箱，采用全暗光周期培养，使其进入滞育状态。4.4.4进入滞育的标志滞育的白蛾黑棒啮小蜂老熟幼虫体色变为灰褐色，较粗壮，皮下脂肪颗粒明显。4.4.5储存条件将带有滞育幼虫的寄主蛹体在4℃避光储存。4.4.6解除滞育将滞育的白蛾黑棒啮小蜂老熟幼虫的温度逐渐升高到18~24℃,在湿度（65±5）%，光周期14h长光照10h短光照的条件下培养解除滞育。4.4.7出蜂出蜂时间应与美国白蛾老熟幼虫期和化蛹初期吻合。4.5蜂种复壮4.5.1诱蛹收集美国白蛾化蛹前，在树干基部绑草把诱集美国白蛾化蛹，然后集中收回、挑选、培育。4.5.2挂蛹采集将美国白蛾蛹放入能防雨的10目尼龙纱网内，挂于林间，6d后收回、挑选、培育。4.5.3罩虫收集用纱网罩住美国白蛾喜食的寄主植物，内投放多头美国白蛾幼虫，待其化蛹时被自然界中的白蛾黑棒啮小蜂寄生后收回、挑选、培育。4.5.4美国白蛾蛹复壮利用刚化蛹1~3d的美国白蛾蛹，按蜂蛹比3：1接蜂进行复壮。45释放技术5.1放蜂期与当地美国白蛾老熟幼虫期和化蛹初期吻合。一般在美国白蛾越冬代和第一代化蛹始盛期开始放蜂。5.2释放时间应根据各地气候和美国白蛾发育进度决定。放蜂应选择气温25℃以上、晴朗、风力小于3级的天气，最好于10：00～16：00之间进行。5.3释放比5.3.1蜂虫比一个防治区内总放蜂量根据美国白蛾网幕中幼虫的数量和放蜂方式决定。接种式释放蜂虫比1：1为宜，淹没式释放蜂虫比3：1为宜。5.3.2计算公式总放蜂量按式（1）计算:TN=W×EN×n式中:TN——总放蜂量，单位为头；W——美国白蛾网幕数，单位为个；EN——每个网幕中美国白蛾幼虫平均数，单位为头；n——释放量常数，接种式释放时取1、淹没式释放时取3。5.3.3计算方法在美国白蛾网幕幼虫期，随机剪取网幕20个，调查每个网幕中的幼虫数量，求出每个网幕中的幼虫平均数（EN）。再随机抽样调査每株树上的平均网幕数，根据防治区的林木总株数算出总网幕数（W）。根据总网幕数和每个网幕内的幼虫平均数，计算出防治所需要的总放蜂量（TN）。5.4释放方法5.4.1重点防治区应进行淹没式放蜂防治，再连续进行接种式放蜂防治。预防区应采取连续接种式放蜂防治。5.4.2采用实用新型的释放器时，在需要防治区域按照规定标准设释放点，即将其悬挂于高度合适的树枝或用大头针钉在树干上。5.4.3释放器放置完成后，应拖动红色纸套以露出出蜂口，让白蛾黑棒啮小蜂自然羽化飞出。白蛾黑棒啮小蜂施放完成后及时收回器具，以备再用。5.4.41个世代应放蜂2次，第1次宜在美国白蛾老熟幼虫期，第2次宜在第1次放蜂后7～10d（即美国白蛾化蛹初期）内进行。5.4.5释放点可按规定标准随机设置，但应均匀有序。6放蜂效果检查56.1检查内容检查白蛾黑棒啮小蜂寄生率和美国白蛾有虫株（网）率。6.2检查方法放蜂后10~12d，采集放蜂区美国白蛾蛹，统计被寄生情况。把认定为被寄生的蛹装入试管中，每管1头放入25℃的培养箱培养，待成虫羽化或出蜂后进一步认定具体种类，分别统计白蛾黑棒啮小蜂和其他天敌的寄生率。有虫株（网）率在下一代美国白蛾幼虫网幕期调查。6.3计算公式寄生率按式（2）计算，有虫（网）株率按式（3）计算：调查总蛹数寄生率%=被白蛾黑棒啮小蜂寄生的蛹数×100%（2）调查总蛹数有虫网株率%=调查发现网)株数×100%…………（3）7注意事项7.1接蜂前应对繁蜂器具用3%石碳酸或70%酒精消毒，防止病毒、真菌等污染。7.2放蜂区不应同时进行化学药剂防治，宜与美国白蛾病毒、苏云金杆菌制剂等配合使用。7.3放蜂防治应连续进行3~5代。7.4应做好美国白蛾预测预报和林间调查，准确掌握美国白蛾发育进度。放蜂应尽力避开阴雨、大风等不利天气，若遇此类天气，应及时补放。8建立技术档案8.1档案管理科研档案应包括白蛾黑棒啮小蜂滞育相关图片及数据资料等。同步建立电子档案和纸质档案，做到资料收集完整、记录准确、归档及时、使用方便。DB××/T××××—××××6（资料性附录）白蛾黑棒啮小蜂成虫形态特征雌成虫（见图A1-a体长1.6~2.5mm，正模体长2.1mm。除触角和足外，全体黑色，具深绿色金属光泽。触角柄节和梗节基部浅黄色，梗节端部黄褐色，鞭节均呈深褐色。足各节均为黄色。前翅中部带浅烟色，翅脉与足同色。复眼酱紫色。头部背面观宽为长的2倍；颜面与后头相向强烈凹入，凹入程度几乎相同，因而背面观头部呈哑铃形；颜面中部凹入达中单眼前缘，后头前凹的中点与中单眼的距离与中单眼横径相等，与侧单眼的距离为侧单眼长径之半；上颊短，仅为复眼长度的1/10；复眼上具稀疏的短纤毛；二复眼间距为复眼长的2.4倍；头顶散生稀疏的短毛。头部侧后观以后头上部的毛较密。头部前面观触角洼深陷，洼底平坦，略光滑，呈三角形，但洼顶部略加宽，呈一小倒三角形：洼中部具1不甚显著的纵隆线；洼侧区均匀膨起表面具细密但明显的网状刻纹上生密毛触角窝中部位于复眼下缘连线上；颚眼距为复眼高的7/10；脸区上半部由触角洼下延形成一半圆形区域，脸区下半部折向下后方；脸区散生稀疏刚毛；口宽略大于颚眼距（1.1倍）；唇基端部双齿状显著突出。触角柄节刚伸达中单眼；柄节、梗节上生稀疏感觉毛；鞭节上感觉毛粗而长，条形感觉器凸出；索节及棒节每节上的条形感觉器大致呈2排排列。柄节长度稍小于环状节与索节长度之和（21：23）；梗节短于索节1（14：18）；环状节很短，3个索节向端部渐短（索节1、2、3长度之比为18：14：12），但渐加宽，以致索节3长宽相等；索节各节之间与索节与棒节之间的连接环十分显著；触角在棒节1处达最宽，棒节长（不包括端针）为宽的2.2倍，长仅略小于索节1+2（26：28）；棒节1、2、3长度之比为10：10：6，棒节具端针，十分突出，长度为棒节3的2/3。胸部长为宽的1.5倍，宽度稍小于头部（68：78），前胸背板短，圆滑地向前方跌下，后缘具1排粗刚毛，每侧6根，在中部没有连接。中胸盾片上的盾纵沟深，中纵沟显著，但不完整，前部1/4消失。邻盾纵沟刚毛每侧有4~6根。中胸小盾片圆隆，其上的2个亚中沟深，二亚中沟之间的中区长为宽的2.5倍：二侧区上各具1对刚毛，前部的1对刚毛位于小盾片中部。中胸盾片、小盾片表面具细密网状刻纹，刻纹脊凹入，因而基本光滑，具丝绢状光泽。后胸盾片小，矩形，表面具不规则的网状刻纹，中部具一显著纵脊，较粗，中脊后部1/3消失。并胸腹节长为中胸小盾片的1/2，中纵脊十分凸出，侧褶脊及后缘脊显著，侧褶脊与中纵脊间的中区深陷，内有不规则斜脊纹3~5条，中区底面具网状刻纹；气门位于本节前部1/3处，侧褶脊在气门后缘处生出一弱斜脊，伸达并胸腹节后侧角处，由此与本节后缘形成一呈三角形的区域。该区表面凹凸不平，但网状刻纹显著；并胸腹节后侧角呈锐角状突出；侧胝上有刚毛7根左右，表面具网状刻纹。前翅较狭长，长为宽的2.6倍；亚缘脉上只有1根刚毛，亚缘室背面无毛，腹面具1行纤毛；亚缘室长度稍小于缘脉（60：64），室长为宽的6倍；缘脉长为痣脉的3.5倍；具狭窄的缘前脉下无毛区；基室闭式，基脉及基室端部下方的肘脉上具纤毛；翅面上纤毛较密而长；翅端缘毛长为痣脉的1/4。侧观胸腹侧片较大，下延至腹面，上具均匀一致的显著网状刻纹；中胸前侧片中部形成1略呈半圆形的凹陷区，表面具鱼鳞状密刻纹；中胸后侧片上区呈三角形，稍膨起且光滑；后胸侧板表面具网状刻纹。中胸侧板后下角、中足基节前方处具1显著的刚毛。足纤细；后足基节背面粗糙，具不规则皱脊，侧面具细密的网状刻纹；后足胫节细长，稍弯，长为跗节的1.5倍。腹柄短圆锥形，背面可见，表面上有不规则刻纹，后缘呈脊状。腹部椭圆形，向腹末渐尖，背面浅凹，宽度大于胸部和头部（78：56：66），长为宽的近1.5倍。产卵器微露出。尾须上有1根刚毛突出，伸出于腹末之外，长度为其余几根刚毛的2.5倍。7雄成虫（见图A1-b）：体长1.5~1.8mm，小于雌性。体色比雌性稍浅；胸部背面具铜绿色金属光泽；触角棒节黑色，其余各节污黄色。足污黄色，但后足基节及各足的爪带褐色。触角柄节显著膨大，侧扁，长约为宽的3.0~3.2倍；内侧表面有密毛，外侧表面光裸；下方边缘形成褐色的片胝（plaque），内侧片胝近完整（基部缺如）：外侧片胝短，略呈弧形，位于柄节下缘中部，上有长刚毛8根左右，其中的3根长而端部折弯，其长度甚至大于柄节宽度。梗节长度稍大于索节1（14：12）；索节4节，由索节1向索节4变短；棒节3节紧凑，显著宽于索节长度与末索节相等端针很短腹部椭圆形长为宽的倍宽度稍大于胸部（52：48），略小于头部（52：54）。其余特征与雌相似。图A1白蛾黑棒啮小蜂成虫形态特征图a.雌性b.雄性（资料性附录）白蛾黑棒啮小蜂的生物学特性白蛾黑棒啮小蜂是美国白蛾及其他鳞翅目食叶害虫蛹期比较常见的天敌寄生蜂，1头美国白蛾蛹可羽化86-349头小蜂，平均160头，雌雄性比约为7：1。该小蜂生命力强，体型较大且具有较强的飞翔能力，在实验室自然环境下可存活15d或更长。用最小二乘法按照有效积温法则中温度和发育速率的回归方程，以此计算白蛾黑棒啮小蜂滞育后发育的起点温度（C）和有效积温（K），并依公式计算其标准差Sc和Sk具体公式如下：T=C+KV式中：K——有效积温常数，n——样本量，T——环境温度，V——发育速率，C——发育起点温度白蛾黑棒啮小蜂的生长发育与温度密切相关，在18-30℃的温度范围内，小蜂均能顺利完成生长发育。幼虫阶段发育历期最长，蛹期其次。不同温度处理之间白蛾黑棒啮小蜂各虫态及全世代的发育历期均存在极显著差异（P<0.01）（表B1）。表B1不同温度下白蛾黑棒啮小蜂各虫态发育历期蛹bd9注：表中数据为平均值±标准差，表中同一列数据后标有不同小写字母表示差异显著水平（P<白蛾黑棒啮小蜂在不同温度下全世代发育历期如表B2，其完成一个世代所需要的发育起点温度为表B2白蛾黑棒啮小蜂发育起点温度和有效积温²37（资料性附录）人工滞育诱导的白蛾黑棒啮小蜂蜂种长期保存方法试验时，每个10mL塑料离心管中放入1头刚化蛹1～2d的黄粉甲蛹，将羽化48h内的白蛾黑棒啮小蜂按蜂蛹比3∶1进行接蜂，将蘸有10％蜂蜜水的脱脂棉球放于管口1/3处，供寄生蜂补充营养，然后脱脂棉封口，待雌蜂产卵48h后清除试管内的小蜂，使用（23cm×10cm×5cm）的全黑色不透光纸盒模拟黑暗环境，将已被小蜂寄生的黄粉甲蛹按照上述温、光组合放入恒温光照培养箱中。在三个温度条件培养下，从开始羽化出蜂时起，向后延长观察两周，对黄粉甲蛹进行解剖，观察并统计三个温度不同光周期处理条件下小蜂的发育情况、化蛹率和滞育率等情况。实验结果如表C1。进入滞育的标志为滞育的白蛾黑棒啮小蜂老熟幼虫体色变为灰褐色，较粗壮，皮下脂肪颗粒明显如图C1所示。表C1温度和光周期对白蛾黑棒啮小蜂滞育的影响42.72±8.95bC4.55±3.72bA0.00±0.00cA注：表中数据为平均数±标准误。同列数据后不同小写字母、同行数据后不同大写字母表示经Duncan氏新复极差法检验后差异显著（P<0.05）。初始样本数均为90个，实测样本数为去除未图C1白蛾黑棒啮小蜂滞育与非滞育幼虫形态特征对比D滞育ND非滞育图C218℃,21℃和24℃条件下白蛾黑棒啮小蜂滞育诱导的光周期反应从上述结果可知，在18℃时，诱导小蜂滞育的临界光照处于13～14h之间；在21℃和24℃时，诱导滞育的临界光照时长较18℃变短，处于12～13h之间，并且随着温度的降低，临界光周期延长。此外，白蛾黑棒啮小蜂在光照时长为14～16h的培养条件下，几乎都能正常发育；在18℃和21℃条件下，当光照时长小于或等于12h时可以诱导100％的个体进入滞育；在24℃条件下，光照时长小于或等于12h时可以诱导大部分个体滞育，但滞育率略低于其他两组。解除滞育及滞育后发育：在温度21℃,长光10h，短光14h条件下将滞育的白蛾黑棒啮小蜂老熟幼虫放入黑色不透光纸盒进行全暗处理，于4℃低温冰箱中配合全暗条件处理30d后，再将其拿出并转移至18℃,在14h长光照10h短光照的恒温光照培养箱中进行饲养35天左右（35.42±0.20d发育速率（1/d）为0.03±0.02，即可获得滞育后发育白蛾黑棒啮小蜂蜂种。（资料性附录）一种以黄粉甲蛹为寄主的白蛾黑棒啮小蜂高效释放器鉴于现有小蜂释放器普遍存在易受自然环境影响，进而导致野外释放过程中小蜂出蜂量较低、释放效果不够理想，以黄粉甲蛹为寄主的白蛾黑棒啮小蜂高效释放器（实用新型可达到高效释放白蛾黑棒啮小蜂的目的。一种以黄粉甲蛹为寄主的白蛾黑棒啮小蜂高效释放器（图D1），所述装置在主体是离心管型管本体（图D1-7），与管本体连接的管盖，其用于封闭管本体上的管口（图D1-2、3），在所述管本体上部侧面管壁开有出蜂口（图D1-4所述管本体的内部放置长度为管内壁周长的尼龙筛网图（D1-5以完全遮挡出蜂孔；管口与管盖的连接处有连接绳（图D1-8），用于悬挂所述高效释放器，所述管本体的外