CN119736264A 非血红素铁酶突变体、截短体、dna分子、表达载体、宿主细胞以及在合成手性伯胺化合物中的应用

(12)发明专利申请(21)申请号202510245849.3(22)申请日2025.03.04合伙)51215权利要求书2页说明书17页序列表(电子公布)附图4页(54)发明名称239X=SorO4以及在合成手性伯胺化合物中的应用难以兼容对酸不稳定或易于发生酸催化外消旋化的底物(JournalofFluorine2016,55,2248-2251)和叠氮(JournaloftheAmericanChem5[0010]本发明提供了一种非血红素铁[0011]本发明还提供了所述的非血红素铁酶截短体突变体，它是以非血红素铁酶截短体将亲本第71位异亮氨酸突变为缬氨酸，得到突变体BsQueD¹74pt-I71V;67[0020]本发明的有益效果是：附图说明谱);针对来源于枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis的野生型非血红素铁酶BsQueD8分析收率(%)构型SSS9酶构型S沉默Site2S酶构型SSSSSS122温度(℃)时间1延伸终延伸1体积(μL)2重组酶(ExnaseⅡ)125[0039]表7.第一轮定向进化验证结果构型SSSSSSS[0041]表8.第二轮定向进化验证结果构型SSSS[0043]表9.第三轮定向进化验证结果构型SBsQueD174p-S116R-T118ASSBsQueD174p-S116R-T118AS构型BsQueD174p-S116R-T118ASBsQueD174p-S116R-T118A-I71LSBsQueD174p-S116R-T118A-I71LSBsQueD174p-S116R-T118A-I71L-SBsQueD174p-S116R-T118A-I71L-SBsQueD¹74p-S116R-T118A-I71L-SBSQueD174p-S116R-T118A-I71L-SBsQueD174p-S116R-T118A-I71L-SBsQueD174p-S116R-T118A-I71L-S底物浓度铁浓度(μM)缓冲液构型S5SS1SSSKPi(pH6.5)SSM9-N(pH6.0)SM9-N(pH6.5)SSS[0050]表12.模式反应1条件优化的考察结果度当量比(阴离子：度(℃)性构型5SVc(0.1mM)5S5S5S5S5S5S5S5S5S5S5S5S5S85S8S8S8S8S[0051]表13.模式反应1条件优化前后的考察结果 反应条件分析收率(%)ee(%)构型 [0052]产物的手性分离结果如图4所示。手性检测色谱柱采用手性IG柱-大赛璐底物浓度铁浓度(μM)缓冲液构型S5SS1SSSSSM9-N(pH6.0)SSS[0057]表15.模式反应2条件优化的考察结果当量比(阴离子：苯乙烯：氮源)积(v/v%)构型5S5S5S5SVc(0.1mM)5S5S5S5S5SVe(0.1mM)5SVe(0.1mM)5SVc(0.1mM)5SVe(0.1mM)5SVe(0.1mM)5SVc(0.1mM)5SVc(0.1mM)5SVe(0.1mM)85SVe(0.1mM)5SVc(0.1mM)8SVe(0.1mM)8S8S分析收率(%)构型7S优化后S[0060]产物的手性分离结构如图5所示。手性检测色谱柱采用手性IG柱-大赛璐产物编号构型SSSSSS一S一SSSS6SSSS[0064]表18.路线2底物适用性的考察结果编号编号构型SSSSSSSSNNS3S1S5S6250碱基对864200