T-ZJTSS 036-2025 茶树田间炭疽病抗性鉴定与评价技术规程

ZJTSS浙江省茶叶学会团体标准茶树田间炭疽病抗性鉴定与评价技术规程2025-11-10发布2025-12-10实施浙江省茶叶学会发布I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件起草单位：浙江省农业科学院、浙江农林大学、中国农业科学院茶叶研究所、浙江大本文件主要起草人：李清声、卢秦华、王玉春、李达、任苧、汪瑛琦、王新超、郑新强、叶俭慧。1茶树田间炭疽病抗性鉴定与评价技术规程本文件规定了茶炭疽病的鉴定方法、调查方法和抗性评价方法。本文件适用于浙江省茶区对茶炭疽病的抗性鉴定与评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T2943茶树种质资源描述规范3术语和定义NY/T2943中界定的及下列术语和定义适用于本文件。茶炭疽病Teaanthracnose害成熟叶片、形成红褐色大型枯斑的茶树真菌病害。茶炭疽病的症状、病原、病害循环、发病条件见附录A。4鉴定方法4.1样品采集选取树冠中上部成熟病叶叶片，对出现褐色坏死病斑叶片进行视觉表征判别。症状见附录A。4.2病原菌分离与鉴定4.2.1病原菌分离与培养采用单孢分离法分离病斑上的真菌。用灭菌刀片刮取叶片病斑上的分生孢子盘，进行显微镜镜检。后将分生孢子悬浮液涂布到马铃薯葡萄糖琼脂（PotatoDextroseAgar，PDA）培养基上，在25℃下倒置培养。待长出菌落后，挑取单个菌落到新的PDA培养基上培养，用于病原菌鉴定。4.2.2病原菌鉴定采用形态学（附录A）和分子生物学分析（附录B）相结合的方式进行鉴定。24.2.3结果判断病原菌形态特征符合附录A的描述、分子生物学分析（附录B）鉴定显示该病原菌可与模式种聚为一簇，即可判定样本中含有茶炭疽病病原菌。5.1调查时间每年5月至10月，同区域易感品种出现病症时，进行病情调查。5.2调查方法当茶园面积≤20亩时，以梅花形均匀选取5个取样点，每个取样点随机选取一米茶行的茶树树冠中上部叶片20片；当茶园面积>20亩时，每20亩设置为一个调查小区，每个小区内以梅花形均匀选取5个取样点，每个取样点随机选取一米茶行的茶树树冠中上部叶片20片，各小区独立进行抗性评价。所有取样均排除边行及行头、行尾2m~3m。重复3次。连片茶园种植不同品种茶树，应区分品种设定调查区域，并根据各品种面积按照上述方法进行调查。5.3病情分级依据茶树叶片发病程度，进行病情分级，见表1。表1茶炭疽病病情级别与症状病情级别症状描述0叶片健康无病斑1病斑面积占整片叶面积的≤10%210%<病斑面积占整片叶面积的≤25%325%<病斑面积占整片叶面积的≤50%4病斑面积占整片叶面积的>50%用病叶数占调查总叶数的百分率表示。计算公式见式1。发病率=×100%（式1）5.5病情指数3评价植物病害发生程度的综合性指标，根据调查总数、病情级别以及对应级别的发病样本数计算而来。计算公式见式2。DI=x10o（式2）DI——病情指数；i——各级发病级别叶片数；si——各级发病级数；N——调查总叶片数；4——最高发病级别。6抗性评价方法通过间隔10天的2次调查，依据茶树叶片病情指数最大值进行抗性评价。评价标准见表2。表2茶炭疽病抗性评价标准抗性评价评价标准4茶炭疽病症状、病原及发病条件A.1症状发生于当年生成熟叶上。病斑从叶缘或叶尖发生，初为浅绿色病斑，水渍状，迎光观察病斑呈半透明状，后病斑逐渐扩大，颜色逐渐转为黄褐色或红褐色，最后变为灰白色，病健分界明显。后期病斑正面散生细小的黑色颗粒，为病原菌的分生孢子盘。图A.1茶炭疽病病叶典型症状A.2病原菌形态圆形、黑色，直径71µm~143µm。分生孢子盘内有分生孢子梗，无色，单胞，顶端着分生孢子。分生孢子无色，呈纺锤状，内有1个~2个脂滴，大小为3.2~6.3×1.7~3.1µm。标引号说明：1——PDA培养基上菌落正面；2——PDA培养基上菌落背面；3——分生孢子。图A.2茶炭疽病病原菌形态特征图5A.3病害循环茶炭疽病病原菌以菌丝体或分生孢子盘在茶树病叶上越冬。来年春季，温度上升到20℃,相对湿度达80%~90%时，病原菌便可产生分生孢子。在适宜的温度和湿度条件下，分生孢子可通过叶片的毛状体侵入叶片内部，并形成菌丝在组织间蔓延，经15天~20天产生新的病斑。随后病斑经生长发育产生分生孢子盘和分生孢子，借风雨传播，进行再侵染。A.4发病条件茶炭疽病易发生在高温高湿的环境条件下。当温度在20℃~30℃范围内，相对湿度90%以上时，有利于分生孢子侵入。6茶炭疽病分子鉴定B.1真菌基因组DNA提取将分离到的病原菌接于PDA培养基上，倒置于培养箱中，25℃黑暗培养7天。使用灭菌后的玻片刮取培养基表面的菌丝，采用CTAB法或商品化的丝状真菌DNA提取试剂盒，提取菌株的基B.2分子生物学鉴定基因EFTACTTGAAGGAACCCTTACCLSUGTACCCGCTGAACTTAAGCTACTACCACCAAGAT