人卫1类题库（病理学.分章节版）：19疾病的病理学诊断和研究方法

1.在免疫组化染色过程中，“血清封闭”的目的是A.抗原修复作用B.增加反应敏感性C.消除非特异性反应，降低背景染色D.防止脱片E.加强特异性反应，提高阳性率答案:C解析:正确答案是C。###选项分析：-**A.抗原修复作用**：抗原修复主要是为了暴露被掩盖的抗原决定簇，与血清封闭的目的不同，所以该选项不符合。-**B.增加反应敏感性**：血清封闭并不能直接增加反应的敏感性，其主要作用并非在此，故该选项错误。-**C.消除非特异性反应，降低背景染色**：血清封闭是利用血清中的蛋白质占据组织切片上可能与抗体非特异性结合的位点，从而消除非特异性反应，降低背景染色，该选项正确。-**D.防止脱片**：防止脱片通常需要使用特殊的载玻片处理或合适的固定方法，血清封闭的目的不是防止脱片，所以该选项不正确。-**E.加强特异性反应，提高阳性率**：血清封闭主要是减少非特异性结合，而不是直接加强特异性反应和提高阳性率，该选项不合适。-------------------------------------------2.组织固定后脱水的顺序依次是A.70%乙醇，80%乙醇，95%乙醇，100%乙醇B.70%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，100%乙醇C.100%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，70%乙醇D.95%乙醇，100%乙醇，70%乙醇，80%乙醇E.80%乙醇，100%乙醇，70%乙醇，95%乙醇答案:A解析:正确答案是A。###选项分析：-**A.70%乙醇，80%乙醇，95%乙醇，100%乙醇**：组织固定后脱水应从低浓度乙醇开始，逐步过渡到高浓度乙醇，这样可以使组织中的水分逐渐被乙醇取代，避免组织因脱水过快而收缩变形，该顺序符合脱水的要求，是正确的。-**B.70%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，100%乙醇**：该顺序中80%乙醇在95%乙醇之后，不符合脱水应从低到高浓度的顺序，会影响脱水效果，所以该选项错误。-**C.100%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，70%乙醇**：从高浓度乙醇开始脱水会导致组织迅速失水，引起组织收缩、变硬，影响后续的处理和观察，该选项不正确。-**D.95%乙醇，100%乙醇，70%乙醇，80%乙醇**：同样不符合从低到高的脱水顺序，会对组织造成不良影响，该选项错误。-**E.80%乙醇，100%乙醇，70%乙醇，95%乙醇**：此顺序混乱，没有遵循脱水的原则，不利于组织的脱水处理，该选项不合适。-------------------------------------------3.脱落细胞涂片最常用的固定液是A.95%的乙醇B.乙醚-乙醇混合液C.Carnoy氏液D.甲醇E.甲醛答案:A解析:正确答案是A。###选项分析：-**A.95%的乙醇**：95%的乙醇是脱落细胞涂片最常用的固定液，它能快速固定细胞，保持细胞形态，操作方便且成本较低，故该选项正确。-**B.乙醚-乙醇混合液**：乙醚-乙醇混合液也可用于固定，但不是最常用的，其使用相对较少，故该选项错误。-**C.Carnoy氏液**：Carnoy氏液主要用于某些特殊组织的固定，并非脱落细胞涂片的常用固定液，故该选项错误。-**D.甲醇**：甲醇一般不用于脱落细胞涂片的固定，故该选项错误。-**E.甲醛**：甲醛常用于组织的固定，但在脱落细胞涂片方面不如95%乙醇常用，故该选项错误。-------------------------------------------4.流式细胞技术样本单细胞悬液的细胞数不应少于A.5个B.10个C.25个D.20个E.15个答案:B解析:正确答案是B。###选项分析：-**A.5个**：流式细胞技术样本单细胞悬液的细胞数少于10个时，可能无法获得准确的检测结果，5个细胞数量过少，故该选项错误。-**B.10个**：为保证流式细胞技术检测的准确性和可靠性，样本单细胞悬液的细胞数不应少于10个，故该选项正确。-**C.25个**：虽然25个细胞能满足检测要求，但不是最低标准，故该选项错误。-**D.20个**：20个细胞也能进行检测，但不是最低的细胞数量要求，故该选项错误。-**E.15个**：15个细胞同样能满足检测，但不是最低限度，故该选项错误。-------------------------------------------5.HE制片中最常用的脱水剂是A.丙酮B.正丁醇C.乙醇D.环己酮E.叔丁醇答案:C解析:正确答案是C。###选项分析：-**A.丙酮**：丙酮虽然有脱水作用，但在HE制片中不是最常用的脱水剂，且其挥发性强，对人体有一定危害，故该选项错误。-**B.正丁醇**：正丁醇常用于脱水过程的后期，但不是最常用的脱水剂，故该选项错误。-**C.乙醇**：乙醇是HE制片中最常用的脱水剂，它具有良好的脱水性能，能与水和透明剂互溶，且价格相对较低，故该选项正确。-**D.环己酮**：环己酮一般不用于HE制片的脱水，故该选项错误。-**E.叔丁醇**：叔丁醇也可用于脱水，但不如乙醇常用，故该选项错误。-------------------------------------------6.FISH主要检测细胞内哪项指标的变化A.基因拷贝数B.DNA含量C.mRNA含量D.蛋白质含量E.基因突变位点答案:A解析:正确答案是A。###选项分析：-**A.基因拷贝数**：FISH（荧光原位杂交）技术主要用于检测细胞内基因拷贝数的变化，通过荧光标记的探针与特定的DNA序列杂交，可直观地观察到基因的数量和位置，故该选项正确。-**B.DNA含量**：检测DNA含量通常使用其他方法，如流式细胞术等，FISH主要不是用于检测DNA含量，故该选项错误。-**C.mRNA含量**：检测mRNA含量常用的方法有RT-PCR等，FISH一般不用于检测mRNA含量，故该选项错误。-**D.蛋白质含量**：检测蛋白质含量通常采用免疫印迹等方法，FISH不能直接检测蛋白质含量，故该选项错误。-**E.基因突变位点**：检测基因突变位点常用测序等方法，FISH对于检测基因突变位点不是其主要应用，故该选项错误。-------------------------------------------7.迄今为止，病理诊断中最常用的方法是A.特殊染色B.电子显微镜技术C.免疫组织化学技术D.HE染色E.原位杂交答案:D解析:正确答案是D。###选项分析：-**A.特殊染色**：特殊染色是在HE染色基础上的进一步补充，用于显示特定的组织成分或病原体等，但不是最常用的病理诊断方法，故该选项错误。-**B.电子显微镜技术**：电子显微镜技术能观察到细胞和组织的超微结构，但操作复杂、成本高，不是最常用的诊断方法，故该选项错误。-**C.免疫组织化学技术**：免疫组织化学技术可用于检测特定抗原或抗体，但它是在HE染色基础上的辅助诊断方法，不是最常用的，故该选项错误。-**D.HE染色**：HE染色是病理诊断中最常用的方法，它能清晰地显示组织和细胞的形态结构，操作简单、成本低，故该选项正确。-**E.原位杂交**：原位杂交主要用于检测核酸序列，不是病理诊断中最常用的方法，故该选项错误。-------------------------------------------8.乳腺癌患者中，常选择哪组抗原检测对临床指导治疗和判断肿瘤预后有积极意义A.ER、PR、CK-L37CK-H、P53B.ER、PR、P53、K-P、nm23C.ER、PR、nm23、S-100、EMAD.ER、PR、nm23、c-erbB-2、P53E.ER、PR、c-erbB-2、Ck-P，EM答案:D解析:正确答案是D。###选项分析：-**A.ER、PR、CK-L37CK-H、P53**：该组合中CK-L37CK-H不是乳腺癌患者临床指导治疗和判断预后的关键指标，故该选项错误。-**B.ER、PR、P53、K-P、nm23**：K-P不是乳腺癌患者常用的检测抗原，故该选项错误。-**C.ER、PR、nm23、S-100、EMA**：S-100和EMA不是乳腺癌患者判断预后和指导治疗的关键指标，故该选项错误。-**D.ER、PR、nm23、c-erbB-2、P53**：ER（雌激素受体）、PR（孕激素受体）、nm23（肿瘤转移抑制基因）、c-erbB-2（原癌基因）、P53（抑癌基因）对乳腺癌患者的临床治疗和预后判断有重要意义，故该选项正确。-**E.ER、PR、c-erbB-2、Ck-P，EM**：Ck-P和EM不是乳腺癌患者常用的检测指标，故该选项错误。-------------------------------------------9.为提高阳性率，胸腹腔积液标本离心后取哪一层细胞涂片最好A.试管上层B.红细胞层C.交界层D.红细胞之上的白膜层E.底层答案:D解析:正确答案是D。###选项分析：-**A.试管上层**：试管上层主要是澄清的液体，细胞含量极少，涂片阳性率低，故该选项错误。-**B.红细胞层**：红细胞层主要是红细胞，其中的病理细胞很少，不利于阳性结果的检测，故该选项错误。-**C.交界层**：交界层细胞成分不具有特异性，不是取细胞涂片的最佳部位，故该选项错误。-**D.红细胞之上的白膜层**：该层含有较多的白细胞和可能存在的病理细胞，取此层细胞涂片可提高阳性率，故该选项正确。-**E.底层**：底层主要是一些杂质和沉淀，细胞成分不利于检测，故该选项错误。-------------------------------------------10.冰冻切片时下列哪种组织需要厚切片A.骨髓B.淋巴C.肌肉D.脂肪E.纤维答案:D解析:正确答案是D。###选项分析：-**A.骨髓**：骨髓组织质地相对较软且细胞成分丰富，一般不需要厚切片。-**B.淋巴**：淋巴组织的细胞结构较为紧密，也不需要厚切片来观察。-**C.肌肉**：肌肉组织有一定的纹理和结构，通常也不需要厚切片。-**D.脂肪**：脂肪组织由大量的脂肪细胞组成，细胞较大且含有大量脂滴，在冰冻切片时需要较厚的切片才能完整地展现其结构和形态。-------------------------------------------11.常规(HE)制片的主要程序是什么?答案:HE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的部分。它包括组织固定、

脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。解析:HE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的部分。它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。-------------------------------------------12.简述超薄切片的制作流程。答案:固定。固定后的组织一定要进行脱水，特别是采取不溶于水的树脂包埋时，在室温低于4℃时，丙酮或乙醇脱水效果都很好。(2)包埋。组织需在包埋介质中充分渗透。(3)切片。

切片厚度以能达到浮于液面的切片呈灰色为最好。切片可用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色。解析:固定。固定后的组织一定要进行脱水，特别是采取不溶于水的树脂包埋时，在室温低于4℃时，丙酮或乙醇脱水效果都很好。(2)包埋。组织需在包埋介质中充分渗透。(3)切片。切片厚度以能达到浮于液面的切片呈灰色为最好。切片可用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色。-------------------------------------------13.HE染色的目的是什么?答案:苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。解析:苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。-------------------------------------------14.特殊染色在临床病理诊断中有何用途和意义?常分成哪几类?答案:自前特殊染色技术在病理诊断中主要体现在以下几方面的应用，如鉴别或确认各种组织

(胶原纤维、弹性纤维、网状纤维等),鉴定或区别各种异常物质或正常物质(糖原、黏液、脂肪、淀粉样物质等),某些病原体或者微生物的诊断和鉴别(结核分枝杆菌、念珠菌、隐球菌、曲霉菌等),某些特殊类型肿瘤的鉴别等。分成胶原纤维染色、弹性纤维染色、网状纤维染色、镀银染色、淀粉样物质染色、抗酸染色等。解析:目前特殊染色技术在病理诊断中主要体现在以下几方面的应用，如鉴别或确认各种组织(胶原纤维、弹性纤维、网状纤维等)，鉴定或区别各种异常物质或正常物质(糖原、黏液、脂肪、淀粉样物质等)，某些病原体或者微生物的诊断和鉴别(结核分枝杆菌、念珠菌、隐球菌、曲霉菌等)，某些特殊类型肿瘤的鉴别等。分成胶原纤维染色、弹性纤维染色、网状纤维染色、镀银染色、淀粉样物质染色、抗酸染色等。-------------------------------------------15.取材后剩余标本为什么需要继续保存一段时间?答案:取材剩余组织保存在标准固定液中，并始终保持充分的固定液量和甲醛浓度，避免标本干枯或因固定液量不足或浓度降低而致组织腐变，以备根据镜下观察诊断需求而随时补充取材，以备在病理诊断报告签发后接到临床反馈信息时复查大体标本或补充取材。解析:正确答案是：取材剩余组织保存在标准固定液中，并始终保持充分的固定液量和甲醛浓度，避免标本干枯或因固定液量不足或浓度降低而致组织腐变，以备根据镜下观察诊断需求而随时补充取材，以备在病理诊断报告签发后接到临床反馈信息时复查大体标本或补充取材。-------------------------------------------16.组织切片产生非特异性染色的原因有哪些?如何解决?答案:(1)抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色。(4)非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果。(5)DAB孵育时间过长或浓度过高。(6)PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要。(7)标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。解析:正确答案是：(1)抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色。(4)非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果。(5)DAB孵育时间过长或浓度过高。(6)PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要。(7)标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。-------------------------------------------17.简述细胞涂片染色的常用方法及其优缺点。答案:常用的细胞染色方法有：(1)简单染色法，常用碱性染料如亚甲蓝等进行简单染色；(2)革兰氏

染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；

(3)瑞特染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红、亚甲蓝组成；(4)吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；(5)细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。解析:正确答案是：常用的细胞染色方法有：(1)简单染色法，常用碱性染料如亚甲蓝等进行简单染色；(2)革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；(3)瑞特染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红、亚甲蓝组成；(4)吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；(5)细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。-------------------------------------------18.Masson三色法主要用途是什么?答案:Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。解析:正确答案是：Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。-------------------------------------------19.常规病理切片(HE)在显微镜下细胞核、细胞质分别呈什么颜色?答案:细胞核着紫蓝色，细胞质着红色。解析:正确答案是：细胞核着紫蓝色，细胞质着红色。-------------------------------------------20.免疫组化实验中常见问题有哪些?如何解决?答案:1切片染色后背景太深，如何区分特异性与非特异性着色?(1)抗体浓度过高：一抗浓度过

高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每

一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不

能只简单的按说明书进行染色。(2)抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执

行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。

(3)DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长。(4)组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAPPen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。(5)切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长(大于24小时)。(6)一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。2.脱片产生的原因有哪些?(1)多聚赖氨酸玻片质量的问题。(2)组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。(3)没烤好，时间短，温度不够之类。(4)操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。

(5)修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。(6)一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎，用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。基本上把这些方面都注意到了，能改善的尽量改善，脱片可以减少很多。(7)组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。解析:正确答案即为表格中该题解析部分内容。由于本题为简答题，不做选项分析。解析内容如下：1切片染色后背景太深，如何区分特异性与非特异性着色?(1)抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。(2)抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。(3)DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长。(4)组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAPPen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。(5)切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长(大于24小时)。(6)一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。2.脱片产生的原因有哪些?(1)多聚赖氨酸玻片质量的问题。(2)组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。(3)没烤好，时间短，温度不够之类。(4)操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。(5)修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。(6)一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎，用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。基本上把这些方面都注意到了，能改善的尽量改善，脱片可以减少很多。(7)组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。-------------------------------------------21.简述抗原修复的目的、方法和注意事项?答案:(1)抗原修复目的利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。(2)方法：真空负压抗原修复法、微波辐射抗原修复法、高压抗原修复法、隔水热抗原修复法、电炉加热抗原修复法。(3)注意事项：①PH的应用范围及选择；②抗原修复时应选择最佳温度；③抗原修复时有效温度所需持续时间根据各单位的设备条件以及使用的仪器不同，抗原修复时在有效的温度范围内所持续的时间也不一样；④抗原修复液必须遵循自然降温规律，否则效果不好或达不到抗原修复的目的；⑤尽量使用足量的抗原修复液；⑥切片必须附贴牢固。解析:正确答案是：(1)抗原修复目的利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。(2)方法：真空负压抗原修复法、微波辐射抗原修复法、高压抗原修复法、隔水热抗原修复法、电炉加热抗原修复法。(3)注意事项：①PH的应用范围及选择；②抗原修复时应选择最佳温度；③抗原修复时有效温度所需持续时间根据