临床基因扩增检验质控技师考试试卷及答案

临床基因扩增检验质控技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.PCR反应的三个基本步骤依次是______、退火、延伸。2.Taq酶的最适延伸温度是______℃。3.监控扩增抑制物的是______。4.防污染常用物理方法是______（如吸头带滤芯）。5.实时荧光PCR中CT值指______。6.PCR实验室核心分区：试剂准备区、______、扩增区、产物分析区。7.引物长度一般为______个核苷酸。8.校准检测系统的物质是______。9.样本需避免核酸______。10.阴性对照作用是检测______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.PCR退火温度主要取决于（）A.模板长度B.引物长度及GC含量C.延伸时间D.循环次数2.防污染关键措施是（）A.试剂反复冻融B.区域物品混用C.产物后置D.不用滤芯吸头3.CT值与模板浓度关系（）A.正相关B.负相关C.无相关D.不确定4.PCR实验室分区原则（）A.双向流动B.单向流动C.交叉流动D.无固定方向5.阴性对照阳性最可能原因（）A.模板不足B.污染C.酶失活D.引物降解6.Taq酶缺乏（）A.5’→3’聚合活性B.3’→5’外切酶活性C.解旋活性D.RNase活性7.检测扩增产物特异性的方法（）A.电泳B.分光光度法C.荧光定量D.内标检测8.校准品核心要求（）A.浓度高B.溯源性C.价格低D.易保存9.扩增曲线呈“S”形说明（）A.扩增正常B.无扩增C.污染D.抑制物存在10.引物设计应避免（）A.引物互补B.GC40%-60%C.3’端G/CD.长度18-25nt三、多项选择题（每题2分，共20分）1.PCR实验室分区包括（）A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区E.办公区2.防污染措施包括（）A.试剂分装B.滤芯吸头C.紫外线照射D.产物后置E.酶失活处理3.室内质控品包括（）A.阴性质控品B.阳性质控品C.临界值质控品D.校准品E.标准品4.引物设计原则（）A.长度18-25ntB.GC40%-60%C.3’端无互补D.无发夹结构E.特异性结合5.实时荧光PCR荧光基团（）A.FAMB.VICC.ROXD.Cy5E.EB6.扩增失败原因（）A.模板降解B.酶失活C.引物降解D.抑制物E.循环数不足7.室内质控指标（）A.CT值B.扩增效率C.线性范围D.特异性E.重复性8.样本处理注意事项（）A.防核酸降解B.去抑制物C.防污染D.快速处理E.统一保存9.校准目的（）A.结果准确B.量值溯源C.仪器验证D.试剂监控E.方法一致10.质量保证内容（）A.人员培训B.仪器校准C.试剂质控D.室内质控E.室间质评四、判断题（每题2分，共20分）1.退火温度越高，特异性越好（）2.内标可替代样本DNA（）3.阴性对照阳性提示污染（）4.Taq酶95℃稳定30分钟（）5.实时荧光PCR无需电泳（）6.实验室分区单向流动（）7.校准品需溯源（）8.阳性对照可用重组质粒（）9.样本避免反复冻融（）10.扩增产物可在试剂区处理（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述PCR实验室核心分区及功能。2.简述室内质控主要内容。3.简述引物设计关键原则。4.简述防污染核心措施。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论扩增曲线异常类型及处理措施。2.讨论室内质控失控后的处理流程。---答案部分一、填空题答案1.变性2.723.内标4.物理隔离（或滤芯吸头）5.循环阈值（荧光达阈值的循环数）6.样本处理区7.18-258.校准品9.降解10.扩增污染二、单项选择题答案1.B2.C3.B4.B5.B6.B7.A8.B9.A10.A三、多项选择题答案1.ABCD2.ABCD3.ABC4.ABCDE5.ABCD6.ABCDE7.ABE8.ABCDE9.AB10.ABCDE四、判断题答案1.√2.×3.√4.√5.√6.√7.√8.√9.√10.×五、简答题答案1.核心分区及功能：①试剂准备区：配反应液（防污染）；②样本处理区：提核酸（防交叉污染）；③扩增区：PCR扩增（防产物污染前区）；④产物分析区：检测产物（污染风险最高）。各区域单向流动，物品专用。2.室内质控内容：①设置质控品（阴、阳、临界值）；②监控CT值、扩增效率、重复性；③绘制Levey-Jennings质控图；④失控时分析原因（试剂、仪器、操作）并纠正，重新检测。3.引物设计关键：①长度18-25nt；②GC40%-60%；③3’端为G/C（稳结合）；④无互补（避二聚体）；⑤无发夹结构；⑥特异性结合（BLAST验证）；⑦Tm差≤2℃。4.防污染核心：①分区单向流动（试剂→样本→扩增→产物）；②物理隔离（滤芯吸头、试剂分装）；③化学灭活（UNG酶处理dUTP标记产物）；④紫外线照射（各区域定时）；⑤操作规范（避产物前置、戴手套）。六、讨论题答案1.异常类型及处理：①无S形曲线：查模板/酶/引物是否降解，重新提取或换试剂；②CT值过高：可能有抑制物，重新提模板或稀释样本；③阴性对照阳性：排查污染（试剂、吸头、分区），换试剂、清洁分区；④双峰曲线：引物设计不佳（二聚体），重新设计或优化退火温度。2.失控处理流程：①停检