（正式版）DB4505∕T 0006-2023 《岛礁海参生态增殖技术规范》

4505TechnicalspecificationforecologicI 1141E鼾手JOdb孙昔韩Ia 鼎ZI Z批娄羁目I'D 9 9 9 9 9C.6海参回捕抽样样本的遗传区分及回 9 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1岛礁海参生态增殖技术规范GB/T12763.6海洋调查规范第6部分：海洋SC/T9401.11水生生物增殖放流技术规程第11部分：投放生态增殖ecologicalenhanc适应性驯化adaptivedome通过播撒底栖生物苗种到适合的海底生境中，利用天然生产力增加放流种群产量的过从环境样本中提取的所有DNA的集合，包括环境微生物以及从生物体上脱落下来的活细胞DNA和因24.1自然条件18℃~35℃规格等级g/头小规格中规格3规格合格率≥90%以上，死亡个体比例、伤残采用PCR方法对引起海参腐皮病的弧菌病原8.1苗种转运将海参苗种运输至待增殖海域后，在海域浅水区放置规格为2m×2m×2m的沉水式小型网箱，使其底部与海底接触，每个网箱可暂养小规格参苗4万头或中规格参苗3万头或大规格参苗2万头，暂养时间为3d,暂养期间每天观察参苗的摄食和存活情况。4公式(2):5增殖效果评估分级优良差B),基于环境DNA的海参生态增殖效果评估值(RE)计算见公式(3):增殖效果评估分级优良差增殖效果评估分级优良差6pH7分别针对所有用于生态增殖的海参种类的线粒体COI基因或基因组DNA特异区域设计种特异性qPCR!=6.02×10#×$%&⁄(660×&!)×10'(·········································(B.1)ST——质粒浓度，单位为拷贝/μL；6.02×1023——阿伏伽德罗常数，单位为拷贝/mol；CON——质粒检测浓度，单位为μg/μL；660——碱基对平均分子量，单位NT——质粒碱基数量，单位为bp。用本文件B.1设计的特异性引物进行qPCR扩增，以测得的扩增循环数(Ct值)为纵坐标，以质粒浓度的对使用标准采水器收集海参生态增殖海域的底层海水，每个点采集膜对底层海水进行过滤，剪碎滤膜，采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒对滤膜上的生物样本进行B.4.2环境DNA的qPCR扩增及增殖种扩增体系为20μL，测量样品Ct值，通过标准曲线，求得Ct值8在调查海域至少设置采样点6个，采集采样点海域的底层海水500mL，提取环境DNA，并按照本文件B.4.2的方法对样品中生态增殖种类海参的DNA进行定量，底层海水中生态增殖种类海参DNA丰度的计算）：=∑∑)⁄+··························································AE——调查海域底层海水中生态增殖种类海参DNA丰度，单位为拷贝/mL；AEij——调查海域第i个采样点底层海水中第j种生态增殖种类海参DNA丰度，单位为拷贝/mL。9样本采集后，用剪刀剪取一块200mg～500mg的海参体壁组织，置于10mL离心管中，加入5mL95%采用常规的海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取海参样本DNA，DNA浓度≥50ng/μL，对于每个用于生态增殖的海参种类，分别筛选具有种特异性的高度多态性SSR标记。筛选方法为：采集不同地理分布的各种海参群体，进行基因组测序并利用MISA软件分别查找具有地理差异的各种海组中分别筛选出20个～30个具有高度多态性伸6min。采用遗传分析仪对PCR扩增产物进行分型，获得所有海C.6海参回捕抽样样本的遗传区分及回捕占比利用本文件C.5的分型结果，通过GenAIEx6.51b2和原生种群间的遗传距离，如某一种类海参回捕抽样样本与该种类增殖苗种群体具有相似的分子遗传特征，且聚为一类时，可确定其为该种类增殖群统计每种海参回捕抽样样本中增殖群体的回捕个体数，计算海参增殖群体回捕占比率的方法见公）：-=∑.0∑$×100%···············································