肿瘤类器官构建规范共识2026

肿瘤类器官构建规范共识CONTENTS01020304共识背景与制定制定方法与框架样本处理规范培养与质控流程共识背景与制定010203癌症治疗面临挑战癌症具有高度异质性和复杂的分子病理机制，患者个体差异显著，这使得传统“一刀切”的治疗模式难以奏效，成为实现精准个体化治疗的首要挑战。肿瘤异质性与个体差异构成精准治疗核心障碍长期使用的二维细胞系和PDX模型无法真实模拟肿瘤三维微环境与遗传异质性，且存在构建耗时长、成本高及物种特异性进化等问题，限制了其在精准治疗方案开发中的可靠性。传统临床前模型存在固有局限性为形成有效的临床治疗方案，必须依赖能高度模拟患者肿瘤生物学特征的临床前模型。这推动了类器官等新技术的发展，以填补传统模型在真实性和预测性方面的不足。亟需能够真实反映肿瘤生物学特征的新型模型类器官技术优势高度模拟体内肿瘤生物学特征弥补传统模型的临床转化缺陷推动精准医疗与标准化发展类器官由患者干细胞体外分化形成，能长期传代并保留原发肿瘤的组织结构、遗传异质性和功能表型，克服了传统二维细胞系缺乏三维空间及肿瘤微环境的局限性，更真实反映疾病状态。相比PDX模型，类器官构建周期短、成本低，且避免了物种特异性进化偏差，能更高效地模拟患者个体差异，为药物筛选和个体化治疗提供可靠临床前模型。类器官技术已被列入中国“十四五”重点研发计划，适用于多种实体瘤及液体活检样本，有助于建立统一构建规范，提升模型可重复性，促进基础研究向临床转化。010203传统肿瘤模型的局限性催生新需求类器官技术优势显著但缺乏统一标准制定规范以推动技术标准化与临床转化传统二维细胞系缺乏三维微环境与遗传异质性，PDX模型则存在构建耗时长、成本高及物种特异性进化等问题，难以精准模拟患者肿瘤特征，因此亟需开发更可靠的临床前研究模型。类器官能长期保留原肿瘤组织学结构、遗传特征与功能表型，在个体化治疗研究中潜力巨大，但国内构建与质控尚无规范，导致模型质量参差不齐，影响结果可靠性与数据共享。为提升肿瘤类器官模型的可重复性与可比性，需建立覆盖构建、鉴定与质控全流程的通用规范，强调过程记录与可追溯性，从而促进基础研究成果向临床精准医疗的转化应用。规范制定的必要性制定方法与框架TITLEHERE多机构专家参与多学科权威机构联合发起本共识由上海市抗癌协会类器官专业委员会、中国医师协会临床精准医疗专业委员会等七家国内权威学术机构共同发起，确保了共识的专业性和行业代表性，为构建全国统一的肿瘤类器官技术规范奠定了组织基础。跨领域专家团队广泛参与共识编制汇聚了全国15个省级行政区40余家单位的73位专家，涵盖肿瘤学、病理学、细胞生物学、生物样本库及伦理学等多学科领域，通过多学科协作确保技术规范的科学性与全面性。循证与经验结合的形成方法共识基于文献检索与多轮专家论证制定，采用专家会议与函审相结合的方式，依据GRADE分级体系修订证据等级，最终形成19条推荐意见，体现了循证医学与专家经验的深度融合。010203共识由上海市抗癌协会类器官专业委员会等七家权威学术机构联合发起，汇聚全国73位多学科专家，涵盖肿瘤学、病理学、生物样本库及伦理学等领域，确保共识的科学性与全面性。专家组系统检索PubMed、中国知网等数据库，关键词包括“类器官”“肿瘤”等，时间截至2025年10月，最终纳入49篇高质量文献，排除无关或低价值研究，奠定证据基础。共识依据GRADE体系对证据分级（A、B、C级）并设定推荐级别（1、2级），通过专家会议与多轮函审收集意见，采纳45条反馈后形成19条核心推荐，确保结论严谨可靠。多学科专家团队联合制定共识系统化文献检索与证据筛选采用GRADE分级与专家审议形成推荐循证医学方法01”02”03”证据与推荐的分级框架证据等级的具体定义推荐级别的实践指导意义分级推荐体系本共识采用经修订的GRADE分级体系，将证据质量分为A、B、C三个等级，分别对应高、中、低可信度。推荐强度则分为1级（强推荐）和2级（弱推荐），确保各项建议均基于当前最佳证据，提升规范的权威性与适用性。A级证据来源于高质量研究或公认标准，B级证据基于中等质量研究或专家共识，C级证据则来自低质量研究或实践经验。这一分级明确了不同建议的证据支撑强度，帮助使用者判断其可靠性。1级推荐为强推荐，表明干预利大于弊，应普遍遵循；2级推荐为弱推荐，表明利弊接近，需结合具体情况灵活应用。分级体系为类器官构建的各环节提供了清晰的操作优先级指导。样本处理规范010203开展肿瘤类器官研究必须严格遵守《中华人民共和国生物安全法》《人类遗传资源管理条例》等法规，在研究前完成人类遗传资源的审批或备案。同时，须获得伦理委员会批准及受试者的书面知情同意，确保研究合法合规并充分尊重受试者自主权。依法履行审批与知情同意依据《涉及人的生物医学研究伦理审查办法》及《人类生物样本保藏伦理要求》，建立规范的知情同意制度。对患者临床信息与样本数据采取匿名化或去识别化处理，并安全存储，以保护个人隐私及数据安全，符合《个人信息保护法》要求。严格执行伦理审查与隐私保护从样本采集到类器官构建的全过程，均需在国家法律法规与伦理指南框架下进行。这包括遗传资源管理、伦理审查、知情同意及隐私保护等多环节，旨在全面保障研究合规性，并维护受试者的合法权益与人格尊严。确保全流程合规与受试者权益伦理合规要求123样本采集运输共识明确肿瘤类器官样本可来源于手术切除标本、内镜或穿刺活检组织、细针穿刺抽吸样本，以及胸腹水、脑脊液等恶性积液和外周血循环肿瘤细胞。采集时应优先选取肿瘤实体部位，避免坏死或纤维化区域，手术标本体积宜不小于5mm³，活检样本建议多点取材以确保细胞量。样本离体后须立即置于无菌预冷保存液中，在2~8℃低温环境下运输。关键控制点为冷缺血时间，建议手术标本在24小时内、活检或细针穿刺样本在12小时内送达处理，超时需标记为高风险样本并评估细胞活性，以保障后续培养成功率。样本送达实验室后需立即登记入库，赋予唯一可追溯编号，并详细记录样本类型、采集时间、运输条件、冷缺血时间等关键信息。对于体液或循环肿瘤细胞等低起始量样本，需尽快进行细胞富集与杂质去除操作，以提高建系稳定性。样本类型与采集要求运输条件与时间控制样本接收与信息记录010203组织样本的机械剪切与酶解消化标准细胞悬液活力与数量的评估标准低细胞量样本的优化处理策略实体组织送达后需立即进行机械剪切，将其剪切成1mm³或更小碎块以增加消化接触面积。随后根据肿瘤类型选择差异化的酶解方案，常用胶原酶与分散酶、透明质酸酶等组合，严格控制消化温度与时间以保护细胞活性，为后续培养奠定基础。消化后需通过细胞滤网获得细胞悬液，并采用锥虫蓝染色等方法评估细胞活力。存活率≥70%可直接接种；低于50%或活细胞数少于1×10⁴个则视为高风险样本，需经富集、优化后方可尝试培养，确保起始细胞质量。针对穿刺活检等细胞量极少的样本，可通过合并多次穿刺样本提高细胞总量。同时优化培养条件，如提高接种密度、调整培养基成分及基质胶比例，以提升建系成功率，避免珍贵样本的损失。样本预处理标准培养与质控流程01.02.03.样本质量是类器官构建成功的关键。共识强调需建立标准化流程，确保手术、活检或体液样本在离体后立即置于预冷保存液中，于2-8℃低温运输。手术标本建议在24小时内、活检标本在12小时内送达处理，以最大限度缩短冷缺血时间，维持细胞活性。组织送达后需迅速进行机械剪切与酶解消化。应根据肿瘤类型选择胶原酶、透明质酸酶等消化方案，严格控制温度与时间。消化后需过滤并获得细胞悬液，要求细胞活力≥70%才可直接接种，否则需优化处理或评估风险。类器官培养应采用标准化培养基框架，以AdvancedDMEM/F12为基础，添加核心生长因子如EGF、Noggin等，并可根据癌种微调。培养环境需保持温度37℃、CO2浓度5%，并分阶段规范使用抗生素，长期培养中应逐步停用并定期监测污染。样本采集与运输的标准化要求组织处理与细胞悬液制备规范培养基体系与培养环境控制原代培养条件010203传代操作规范传代操作应在类器官生长过密或过大时进行，具体标准包括数量密集、直径超过300微米，或出现中心暗色凋亡区域。囊性类器官直径达200-300微米或实心类器官密布培养孔时，即需传代，周期通常为1-3周。传代时机与判断标准传代需先将类器官从基质胶中取出，用TrypLE等消化液在37℃水浴中消化数分钟，至团块解离为直径小于50微米的小细胞簇。消化后细胞存活率应≥80%，否则需优化条件，随后低速离心并按1:2至1:5比例重新接种。传代操作流程与质量控制每次传代必须记录日期、传代比例和代次等信息，并录入信息管理系统以确保可追溯。同时需监控类器官生长状态，建立完善的过程记录制度，为后续实验提供可靠依据。过程记录与可追溯性管理全过程质量监控全过程质量监控要求建立标准化的操作流程，并对关键参数进行系统性记录。这包括样本采集时间、运输条件、冷缺血时间、细胞活力、接种密度、传代比例及代次等。所有信息需录入可追溯的管理系统，确保实验过程的一致性与可重复性，为数据比对和结果分析提供可靠基础。监控需贯穿样本处理至传代的全过程，重点评估细胞活性与培养状态。样本处理后细胞存活率需≥70%才可直接接种；传代消化后存活率应≥80%。同时定期观察类