（正式版）DB43∕T 1825-2020 《茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程》

茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程2020-08-25发布2020-11-25实施前言 Ⅲ1范围 12规范性引用文件 3术语和定义 4发生规律 5病害诊断 15.1田间诊断 5.2室内检测 26防治方法 26.1防治原则 26.2农业防治 26.3物理防治 26.4生物防治 36.5化学防治 37档案管理 3附录A(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病症状 4附录B(规范性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒分子生物学鉴定 5附录C(规范性附录)药剂防治病毒病及传毒害虫一览表 附录D(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病田间调查 8附录E(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病防控效果评估 9工本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省农业农村厅提出。本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：湖南省植物保护研究所、湖南省蔬菜研究所、东北农业大学、澧县农业农村局、新化县植保植检站、保靖县农业农村局、江华瑶族自治县农业农村局、永州市农业科学研究所、安乡县植保植检站、武冈市农业农村局植保植检站、泸溪县农业农村局。本标准主要起草人：刘勇、张德咏、彭静、张战泓、程晓非、张强鑫、廖基常、王俊华、赵明平、周涛、潘求一、廖用信、陈湘云、高阳、张卓、张松柏、朱春晖、谢钢、彭谦泽。本标准适用于茄果类蔬菜由黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)侵染引起的花叶病毒病件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。由黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)引起的可在叶病毒通过蚜虫以非持久型传毒方式传播，有60多种蚜虫可传播该病毒。黄瓜花叶病毒病最适发病温度为20℃,病毒主要在越冬蔬菜、多年生树木及农田杂草上越冬，不能在病残体上越冬。冬季及早春风，可导致CMV大流行。此外，如果阴雨天较多，环境相对湿度大，蚜虫发生少，则CMV发病较轻。工2簇生小叶，植株矮化甚至萎缩枯死。症状特征详见附录A。采用TRIzol法提取植株叶片总RNA,反转录合成cDNA,通过特异性PCR扩增获带该病毒，具体方法和检测结果见附录B。茄果类蔬菜种子播种前用55℃温开水浸种15min,去除种子表明的病原菌和黏液，用10%的磷酸三钠溶液浸种0.5h左右，捞出后用清水冲洗3次后播种；或采用包衣种子。科学进行肥水管理，控制化学肥料的使用。在作物的不同生育期喷施300倍光合细菌菌剂，增强其使用40目以上的防虫网隔离传毒介体。定植后在田间悬挂30cm×40cm的诱虫黄板，黄板密度为每亩20-30块，黄板底部略高于植株顶端3cm-5cm,粘满害虫或失去粘性后及时更换。36.4生物防治可选用农用微生物生防菌剂或氨基寡糖素等防治茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病。一般零星发病田块连续喷施2次，轻病症田块连续喷施3-4次，中度以上发病田块连续喷施5-6次，每次喷施间隔5d-7d。药剂及用法见附录C。6.5化学防治6.5.1黄瓜花叶病毒病以预防为主，定期喷施高效低毒农药进行防治，严禁使用国家明令禁止使用的高毒、高残留化学农药，化学农药交替使用。通常在苗期开始喷施药剂，之后连续喷施3-4次，每次喷施间隔7-10d,进行病毒病预防与防治。农药的安全隔离期要符合GB4285的规定，常用药剂及用法见6.5.2防治传毒介体昆虫。田间蚜株率≥5时，选择使用高效、低毒、易降解农药进行防治。一般零星发病田块连续喷施2次，轻病症田块连续喷施3-4次，中度以上发病田块连续喷施5-6次，每次喷施间隔7-10d。农药的安全隔离期要符合GB4285的规定，常用药剂及用法见附录C。6.5.3根据田间定点系统调查和普查调查情况，结合气象因素分析，及时对病虫害进行预测预报，当病虫害达到影响经济阈值时，对整片作物进行科学的病虫害防治。7档案管理田间防治黄瓜花叶病毒病防治方法应如实做好记载，及时检查药剂使用情况及效果，建立防控档案。具体调查内容及评估方法参见附录D和E。4附录A(资料性附录)见图A1,辣椒植株感染黄瓜花叶病毒的典型症状见图A2。5附录B(规范性附录)1.叶片总RNA的提取(1)取约0.1g叶片于2mLRNase-free离心管，液氮速冻后研磨至样品为均匀粉末。(2)在样品解冻前，加入1mLTrizol,充分混匀，室温静置5min,加入0.2mL三氯甲烷，涡旋震荡15s,静置1-2min,至出现明显分层，4℃12000g离心15min。(3)小心吸取离心后上清液于1.5mLRNase-free离心管，加入等体积75%乙醇，-20℃沉淀1-2h,(4)1mL75%乙醇重悬沉淀，-80℃长时间保存或4(5)重复操作(4),弃上清后瞬离离心管，使管壁上的液体集中于离心管底部。(6)移液枪小心吸出多余液体，风干5-10min。加入50-100μL去RNase水溶解。2.RT-PCR扩增目的片段(1)使用HiScriptⅡ1stStrandcDNASynthesisKit试剂盒逆转录，反应体系见下表：试剂体积(μL)定容至20反应程序：25℃:5min,50℃:45min,85℃:2min。cDNA产物直接使用或-20℃保存；(2)引物序列表B2引物序列引物名称引物序列片段长度(bp)体积(μL)TransStartTopDNAPolcDNA模板定容至50反应程序：94℃预变性10min,94℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸2min30s,循环30次；最后72℃延伸20min,4℃保存。2.PCR产物凝胶电泳检测1%琼脂糖凝胶电泳检测，取5μL扩增产物与2μLSYBRGreenI染料、3μLloadi混匀，点入点样孔，加入电泳缓冲液，100V,电泳30min。电泳结束后，凝胶成像系统观察并拍照记录。扩增片段与阳性样品大小一致，则说明植株被CMV侵染，结果见附图B1植株叶片携带CMV检测M:M7附录C(规范性附录)防治防治药剂使用施用安全间隔期(天)使用次数防治时期病剂喷雾53病情指数≥55%氨基寡糖素可溶性水剂100mL/亩喷雾13病情指数≥5喷雾收获期收获3病情指数≥5喷雾53病情指数≥5喷雾收获期收获3病情指数≥515mL/亩喷雾52病情指数≥510%溴氰虫酰胺可分散油悬浮剂喷雾33病情指数≥51.5%苦参碱可溶液剂喷雾1病情指数≥5喷雾72病情指数≥58附录D(资料性附录)日期前茬曾使用过防治方法防治病当茬当前使用防治方法防治效果9附录E(资料性附录)E1植株病情分级标准(以株为单位)每块田，5点取样法，每个点选择20株以上的植株——0级：全株无病毒病症；——1级：心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化；——3级：1/3片花叶但不变形，或病株矮化为正常株高的3/4以上；——7级：1/2～2/3叶片花叶，或变形或主侧脉坏死，或