2026年高考生物临考冲刺：猜押09 生物技术与工程(原卷版)

/猜押09生物技术与工程题型考情分析考向预测发酵工程2023年广东卷：结合堆肥温度变化曲线与选择培养基筛选原理，考查从堆肥中筛选嗜热角蛋白降解菌的条件。1.结合基因表达载体构建流程图、PCR扩增电泳图等，考查基因工程操作中的限制酶选择、引物设计、标记基因作用、目的基因检测与鉴定等图文信息转化能力2.结合微生物发酵生产特定产物的菌株改造方案或动植物良种繁育中的细胞工程/胚胎工程技术，考查实验设计、变量控制、结果预测及工艺优化能力。细胞工程与胚胎工程2023年广东卷：聚焦人参根与胡萝卜根愈伤组织融合以提高人参皂苷产率，考查植物体细胞杂交技术。2023年广东卷：聚焦紫羚羊体外受精与胚胎移植，考查动物胚胎工程操作。2024年广东卷：聚焦人参根与胡萝卜根愈伤组织融合以提高人参皂苷产率，考查植物体细胞杂交技术。基因工程2023年广东卷：聚焦“DNA粗提取与鉴定”实验基本过程（裂解、分离、沉淀、鉴定），考查各步骤目的及鉴定条件。2024年广东卷：聚焦驹形杆菌光控染色BC膜合成，考查培养基营养条件优化、启动子选择。2025年广东卷：结合Solexa测序技术中DNA聚合酶延伸阻断原理，考查PCR技术中脱氧核糖3’-羟基的保护作用。押题1发酵工程1．（2026·广东茂名·二模）为将尾菜（蔬菜废弃物）转化为优质饲料，研究人员常使用乳酸菌、酵母菌等进行混合发酵。下列叙述正确的是（）A．发酵前对尾菜进行高温处理，为发酵提供了合适的温度B．发酵过程中控制pH稳定，有利于维持酶的空间结构和活性C．为获得优质乳酸菌，需用以纤维素为唯一碳源的选择培养基D．采用平板划线法计数，可有效监测发酵液中菌种数量的变化2.（2026·广东韶关·二模）研究发现，根瘤菌只有在形成根瘤后，其固氮酶基因才会高效表达。缺乏氮素时，豆科植物释放的类黄酮信号可激活根瘤菌产生结瘤因子，结瘤因子激活根表皮细胞的有关信号通路，促进根瘤形成。下列叙述错误的是（

）A．培养根瘤菌时，培养基无需加入氮源但需加入碳源B．类黄酮属于豆科植物产生的一种次生代谢物C．二者的结瘤过程体现了信息传递可调节种间关系D．豆科植物与根瘤菌的种间关系属于互利共生1.传统食品的制作技术。押题2细胞工程与胚胎工程1．（2026·广东中山·一模）世界上第一只用体细胞克隆的哺乳动物多莉羊寿命仅有7年，而普通绵羊的平均寿命在12岁左右。下列分析错误的是（）A．获取的卵母细胞可立即用于核移植B．通过电融合法使去核的卵母细胞与供体细胞核融合C．克隆羊的端粒比较短，基因表达异常可能导致其早衰D．克隆羊的性状与供体、受体和培养环境均有关2．（2026·广东佛山·二模）“胚泡类器官”是利用动物胚胎干细胞或诱导多能干细胞分化得到的胚胎模型。虽不是完整胚胎但具备囊胚的细胞结构。下列叙述错误的是（）A．胚胎干细胞和诱导多能干细胞均具有发育成多种器官的潜能B．体外培养“胚泡类器官”时，可使用加入血清的合成培养基C．“胚泡类器官”的结构外部为滋养层细胞，内部为内细胞团D．继续培养“胚泡类器官”可观察到其孵化并进入原肠胚阶段1.诱导动物细胞融合的常用方法方法类别常用诱导手段作用原理生物法灭活病毒（如仙台病毒、腮腺炎病毒）病毒表面糖蛋白与细胞膜受体结合，使多个细胞膜黏连并发生融合。化学法聚乙二醇（PEG）高浓度PEG可破坏细胞膜磷脂双分子层结构，改变膜通透性，促使相邻细胞质膜融合。物理法电激法（电融合）利用短促高压电脉冲使细胞膜发生可逆性电击穿，形成微小孔洞，细胞接触后恢复时融合。押题3基因工程1．（2026·广东茂名·二模）研究人员将MP水解酶基因（mpd）和报告基因导入大肠杆菌构建了一种检测土壤农药甲基对硫磷（MP）的“细菌传感器”（部分结构如图）。MP被酶解为对硝基酚（PNP）后，可诱导报告基因表达并产生荧光信号。实验发现，在黑土中，携带rfp（红色荧光蛋白）报告基因的工程菌检测灵敏度明显低于携带amilCP（紫色荧光蛋白）报告基因的工程菌；而在含有MP的细菌液体培养基中，两者检测灵敏度相当。rfp工程菌在黑土检测中灵敏度低，最合理的解释是因为黑土（）A．某些成分抑制lacI启动子的活性，导致mpd基因表达量不足B．改变了重组质粒的拷贝数，导致rfp工程菌中的质粒数量降低C．某些物质在红光波段有自发荧光，干扰了信号的特异性检测D．降低了MP水解酶的活性，导致MP无法被有效降解为PNP1.基因工程的基本操作程序一、单选题1．（2026·广东广州·一模）表皮生长因子受体（EGFR）在肿瘤发生中起重要作用，其过表达常见于多种恶性肿瘤。研究人员利用杂交瘤技术制备抗EGFR单克隆抗体。下列叙述错误的是（）A．用被其他抗原污染的EGFR免疫小鼠后，所得的每个B细胞也只能产生一种抗体B．经过多次克隆化培养和抗体检测，能获得足够数量的特定杂交瘤细胞C．杂交瘤细胞在小鼠腹腔内能快速增殖，与腹腔内具有充足的营养物质等适宜条件有关D．细胞毒素与抗EGFR单克隆抗体偶联可使抗体更好地杀死肿瘤细胞2．（2026·广东韶关·二模）惠州客家糯米酒酿造技艺是广东省非物质文化遗产，其制作流程主要包括浸米、蒸饭、摊凉、拌曲、落缸发酵、压榨、炙烤等步骤。下列叙述正确的是（

）A．蒸饭后摊凉，目的是防止高温导致微生物中的蛋白质肽键断裂B．拌曲时，加入的酒曲含有的糖化菌能将淀粉分解为葡萄糖C．落缸发酵后期，缸内酒精浓度升高促进了酵母菌的种群数量增加D．炙烤时，使酒液保持90℃1～2小时，可彻底杀灭其中的微生物3．（2026·广东韶关·二模）关于“DNA的粗提取与鉴定”和“DNA片段的扩增及电泳鉴定”的实验原理及操作步骤。下列叙述错误的是（

）A．DNA溶于酒精，加入冷酒精析出的白色丝状物即为蛋白质杂质B．DNA在沸水浴条件下遇二苯胺试剂显蓝色，此时DNA的双螺旋结构已解开C．DNA片段在电泳时的迁移速率与DNA分子量的大小和构象有关D．指示剂不会使DNA着色，待指示剂前沿接近凝胶边缘时停止电泳4．（2026·广东佛山·二模）BUF1基因是稻瘟病菌的关键基因，其功能正常时病菌为深色。Cas12a系统包含向导RNA和Cas12a蛋白，向导RNA识别特定DNA位点（靶点）后，Cas12a蛋白可对该位点进行剪切。为获得弱致病性的稻瘟病菌突变体，研究者利用Cas12a系统对BUF1基因进行编辑，如图a。将转化后的稻瘟病菌进行选择培养，并进行PCR和电泳检测，结果如图b。下列分析错误的是（）A．Cas12a蛋白通过水解DNA上的磷酸二酯键发挥作用B．选择培养基上需添加潮霉素，浅色菌落对应目标菌株C．根据电泳结果，可确定菌株2为编辑成功的目标菌株D．筛选得到的目标菌株可用于培育抗稻瘟病水稻的研究5．（2026·广东广州·一模）基因工程中，使用单个限制酶酶切构建的表达载体易出现连接方向错误和重复插入目的基因片段等现象，可通过酶切及筛选标记鉴定出符合预期的重组载体。研究小组选用的载体P和目的基因CDS片段特征如图，将CDS片段插入载体P的SacⅡ位点后对重组载体进行扩增、筛选和检测。下列叙述错误的是（）注：LacZ基因表达产物为β-半乳糖苷酶，X-gal会被β-半乳糖苷酶分解，产生蓝色产物。A．含重组载体的宿主细胞在含X-gal的培养基上，菌落颜色为白色B．重组载体被PstⅠ充分酶切后电泳可能会获得长度为9.4kbDNA片段C．用EcoRⅠ与PstⅠ充分酶切重组载体，可判断CDS片段的连接方向D．用EcoRⅠ与SacⅡ充分酶切重组载体，可得到2个长度的DNA片段6．（2026·广东佛山·二模）巴斯德利用鹅颈瓶（瓶颈拉得细长的烧瓶）进行了著名的肉汤实验（如图所示），该实验为巴氏消毒法的诞生奠定了基础。下列叙述错误的是（）A．加热肉汤可以杀死其中的绝大多数微生物B．鹅颈瓶狭长弯曲的颈部可防止空气中的杂菌污染C．实验证明了分解肉汤中有机物的是微生物产生的水解酶D．实验区分了“空气滋生微生物”和“空气携带微生物”两种观点7．（2026·广东湛江·二模）确保生物学实验室安全也是每一位学生的责任。在生物学实验室中，下列做法合理的是（

）A．在实验室饮水B．向试管中快速加入浓硫酸C．使用后的微生物培养基进行灭菌处理D．在密闭的实验室中使用层析液分离色素8．（2026·广东中山·一模）烟草作为重要的经济作物，其产量和品质与土壤及其微生物密切相关。科研人员在进行农田试验时，给烟草地施加不同剂量的微生物菌肥，并测量土壤有关数据（见下表），下列分析错误的是（）组别处理组菌种多样性指数无机氮（mg/Kg）脲酶活性（U/g）1不施肥6.392805.902烟草专用肥6.203566.513低剂量微生物菌肥6.563106.514中剂量微生物菌肥6.443408.65高剂量微生物菌肥6.283256.5A．常用稀释涂布平板法统计土壤样品的活菌数目B．推测低剂量微生物菌肥为烟草生长的最适剂量C．过量添加菌肥可能会加剧菌群竞争，导致菌种多样性下降D．微生物菌肥可增强土壤的脲酶活性，有利于无机氮的生成9．（2026·广东中山·一模）《金漳兰谱》中写道“其茅葺，其叶青青，犹绿衣郎，挺节独立，可敬可慕”。下列分析错误的是（）A．“茅葺”描述了兰花的形态，反映其一定的生态位特征B．“其叶青青，犹绿衣郎”，其中的色素主要存在于叶绿体C．兰花种子萌发率低，可用叶片进行组织培养繁殖幼苗D．《金漳兰谱》中的词句体现了生物多样性的间接价值10．（2026·广东韶关·二模）牧草紫花苜蓿富含蛋白，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含的单宁可结合蛋白，避免鼓胀病。科学家以二者为材料培育了抗鼓胀病的牧草新品种，如图所示。下列叙述错误的是（

）注：IOA抑制细胞呼吸第一阶段，R-6G抑制线粒体功能，两者均为不可逆抑制A．为获得原生质体，需要在含有体细胞的清水中加入适量的纤维素酶和果胶酶B．PEG诱导原生质体融合后，未融合或同种融合的细胞无法继续生长和增殖C．愈伤组织在固体培养基和黑暗条件下培养，可发生基因的选择性表达D．该过程克服了远缘杂交不亲和的障碍，实现了基因组的重组，但不属于有性生殖二、实验题11．（2026·广东茂名·二模）细菌肿瘤治疗是利用细菌作为药物载体的免疫疗法。ClyA是一种细菌外膜蛋白，能促进细菌对肿瘤细胞的黏附与侵入，从而实现靶向递送。Noxa蛋白可诱导肿瘤细胞凋亡。研究人员在ClyA基因与Noxa基因的一端设计互补序列实现无缝连接，通过重叠延伸PCR技术将两者进行融合（如左图），并将其与温控元件相连构建热诱导表达载体（部分结构如右图），导入非致病性大肠杆菌中用于靶向治疗肿瘤。注：pR-pL为启动子；Tc1为温控调节元件，可抑制下游基因表达，热诱导可解除其抑制作用。回答下列问题：(1)左图中PCR1与PCR2不能在同一个反应体系中进行，原因是引物2和引物3的碱基序列________，上述4种引物中能作为PCR3过程的引物是________。(2)研究人员将重组的ClyA-Noxa基因分别插入带有温控元件a和b的不同载体中，通过________法导入大肠杆菌中构建了工程菌a和b，分别在37℃和42℃条件下培养，检测Noxa蛋白的表达情况，结果如图所示，其中WT表示未导入重组质粒的大肠杆菌。应选择工程菌________进行后续的实验，理由是________________________________。(3)研究人员将筛选的工程菌通过尾静脉注射到肿瘤小鼠体内，检测不同器官及肿瘤组织中工程菌的分布情况，下表的结果能否说明成功构建了工程菌，请作出判断并说明原因。________________________小鼠组织注射后12小时注射后72小时心肝脾肺肿瘤心肝脾肺肿瘤工程菌数量（“+”越多，数量越多）+++++++++++++++++++++++++++++++(4)近红外光热疗法利用光敏感材料的光热转换能力高热杀伤肿瘤细胞，但多数材料肿瘤靶向性差、疗效不佳。结合上述实验结果提出一种新的肿瘤治疗思路：________________________________________。12．（2026·广东·一模）番茄红素是工业生产中重要的化工原料。为提高番茄红素生产效率，研究人员用基因工程技术将番茄红素合成过程中三种重要的酶（酶E、酶B和酶I，相应的基因分别用E、B、I表示）定位到一定区域，研究番茄红素的合成效率。回答下列问题：(1)研究人员以CRISPR-Cas6系统的RNA为支架将酶固定在一定区域，现有E6和C4两种Cas蛋白的该系统（图），利用序列1和序列2之间的______，实现E6和C4两种Cas蛋白固定在同一区域。(2)为了将酶E、酶B和酶Ⅰ三种酶中的两种固定在一定区域，研究人员将E6和C4两种Cas蛋白分别与酶E、酶B和酶Ⅰ三种酶中的一种形成融合蛋白，构建图中LYC-1、LYC-2和LYC-3三种质粒，其中质粒LYC-3中三种酶基因①、②和③依次是______。LYC-4是产生RNA支架的载体，构建LYC-5质粒的作用是______。注：P1表示启动子，T表示终止子，HE6表示与E6结合的RNA基因，HC4表示与C4结合的RNA基因。CymR表示阻遏蛋白基因，阻遏蛋白结合到CuO位点，阻止下游基因转录，枯酸可以与CymR阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白无法结合到CuO位点。(3)研究人员将构建好的质粒LYC-1、LYC-2和LYC-3分别与质粒LYC-4共同转化到大肠杆菌中，得到重组菌株LYC-1-4、LYC-2-4、LYC-3-4，LYC-5质粒单独转化、LYC-5与______质粒共转化到大肠杆菌中，得到对应重组菌株。对5组重组菌株先进行______培养，目的是增加菌株数量，再加入______表达出RNA支架固定相应的酶并进行番茄红素的合成培养，检测番茄红素的合成量（图），该结果说明______两种酶固定在一起效果最好。(4)本研究的核心优势在于通过利用RNA支架组装蛋白，突破了传统上修饰蛋白质只能从______水平调控的局限性。基于本研究，未来还可以从哪些方向进一步优化番茄红素的生产效率？请结合所学知识阐述你的观点：______（答出1点）。13．（2026·广东湛江·二模）甜瓜（Cm）花起始为两性花，通过抑制雄蕊或心皮原基的发育来决定性别，最终形成单性花。研究表明，甜瓜花性别决定与ACS7、ACS11和WIP1基因有关。在此基础上，研究人员新鉴定出一种关键因子CRC，并探究其与已知性别决定基因间的关系。回答下列问题：(1)WIP1基因编码的蛋白质是甜瓜性别决定过程中的关键调控因子。研究人员监测花蕾中CRC基因和WIP1基因的表达情况（结果见下图），据图分析，CRC基因沉默很可能使甜瓜花发育为_____花。进一步研究发现，WIP1基因功能的缺失可诱导CRC基因的表达，据此推测基因CRC和WIP1之间的关系是_____。(2)为了进一步验证WIP1基因与CRC启动子区域之间的作用关系，研究人员构建了WIP1蛋白的两种突变体G242R和S306F，并用_____酶构建5个基因表达载体（下图），其中质粒①包含的主要结构是_____。构建完成后将_____导入受体细胞，检测荧光比值。(3)研究人员通过基因工程技术将小分子RNA靶向WIP1基因干预WIP1蛋白与CRC启动子区域结合，从而使甜瓜花发育为雌花。简要阐述该过程：_____。三、解答题14．（2026·广东韶关·二模）近年来，利用光合微生物将二氧化碳转化为有机物产品，成为解决能源与环境问题的新兴策略。我国科研团队成功构建了一种能利用CO2高效合成生物可降解塑料——聚乳酸（PLA）的工程蓝细菌（图1）。(1)研究者构建的PLA的合成途径包含三步酶促反应（图1），LDH、PCT、PHA三种外源酶分别由来自三种不同细菌的ldhD、pct、pha基因编码。根据目的基因的_______（填3′或5′）端碱基序列设计引物，并利用_______技术获取目的基因。(2)研究者首先构建了质粒A和B（图2），分别将目的基因导入两组蓝细菌，并全程添加等量IPTG，以PLA产量反映质粒功能。①质粒A中，多个基因共用一个启动子转录出一条mRNA，再分别翻译出不同蛋白质。这种结构在DNA较短的原核生物中普遍存在，其意义是_______，但该结构存在缺陷，即距离启动子越远的基因表达量逐渐衰减。②最终测得质粒B的PLA产量远高于质粒A，其原因是_______。③研究者构建质粒C，通过敲低脂肪酸合成酶基因的表达（不删基因，只是抑制其转录或翻译）来提高PLA产量。推测靶向序列转录的sRNA应与_______的mRNA互补，从而抑制其翻译，该过程需在hfq基因编码的伴侣蛋白HFQ协助下进行。hfq基因的翻译受茶碱诱导的核糖开关调控，据图3说明茶碱诱导HFQ翻译开启的机制：_______。(3)脂肪酸是合成蓝细菌细胞膜的关键原料，缺少脂肪酸将无法生长和分裂；而持续大量表达外源酶也会给细胞造成代谢负担，不利于细胞增殖。因此，在利用工程蓝细菌（含质粒B和C）发酵生产时，应该在即将达到K值时加入_______，目的是在工程菌的快速增长期实现_______，而在数量稳定期实现_______。15．（2026·广东佛山·二模）DNA分子已成为信息存储领域的新型载体。研究人员开发了一种可标记荧光的DNA凝聚体，使其通过荧光标记的差异性获得信息存储、动态编辑和信息加密的能力，凝聚体的合成过程如图所示。回答下列问题：(1)DNA凝聚体由两种存在重复序列的长单链DNA分子构成。为得到长链DNA，研究人员通过______________酶将基础DNA首尾相连形成环状模板，再利用特定的______________酶进行复制。获得产物后，先使内核DNA按照设定结构形成核心，再______________（填“升高”或“降低”）温度，使外壳DNA通过碱基互补配对与内核DNA相结合，形成凝聚体。(2)向凝聚体中加入带有红/绿/蓝色荧光的DNA分子探针，选择性地杂交标记于凝聚体内核（序列n）或外壳（序列m）上。序列m和n应避免设计成互补配对序列，理由是______________。为保证解码准确性，每种荧光在凝聚体结构中最多出现一次，根据三种荧光在凝聚体上的位置差异，共能得到______________种不同的组合搭配，将其与不同英文字母相对应，可建立空间—荧光双编码的存储与读写规则，如图所示。(3)为提高信息存储的安全性，研究人员还开发了特殊的加密及解密机制。通过荧光密钥的置换反应，使原本被标记的部位消除荧光或使原本无荧光的部位发出荧光，从而实现信息转换，如图所示。图中字母U经密钥解