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文档简介
DB32江苏省质量技术监督局发布操作技术，保证转基因技术应用的生物与环境安全，特制定本标1水稻转基因实验室安全操作规程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适将目的基因插入到经过改造的T-DNA区——借助农杆菌的感染实现外源基因向水稻细胞的转移与整合——通过细胞和组织培养技术，再生出转2使用实验室离心机时，应仔细检查使仪器的机械性能处于离心机放置的高度应使工作人员能够看到离心机内部，以正确放置十字轴离心桶的装载、平衡、密封和打开应在生物安操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大使用固定角离心转子时，离心管不能装的过满，5.1.2匀浆器、摇床、搅拌器和超声处盖子、杯子或瓶子应保持正常状态，无裂缝或变形。盖子使用匀浆器、摇床和超声处理器时，应采用结实透明的塑将黑红两种颜色的电极线对应插入仪器输出插口，并与电泳槽相同颜色插口连接好。3关闭暗箱门，打开紫外灯，调节成像参数，获基因枪的操作过程须在无菌条件下进行，基因枪所处的位置及超净工作台在使用前用紫外灯灭菌安装可裂解膜于其托盘上，顺时针安装到加被轰击样品，根据参数距离放入轰体室合适的位置，关好轰击将中间位置气流控制开关置于“VENT”位通气，等待真空表回零后取出样品。操作者应牢记，当出现液出、破损或不良操作时，安全柜不具有保护操作者的作用。所有工作应在工作台面的中后部进行，并能通过玻璃观察挡板4所有操作过程应尽量细心，避免产生溅出和将无菌的花药或种子接种在愈伤组织诱导或分化培养基上进行预从平板上挑取单菌落，接种到20mL附加相应抗生素的细菌培养液体培养基（pH7.0）中，于超净工作台上，将菌液倒入无菌小培养皿中（可根据材料对菌液的敏感情况进行不同倍数的稀将经过共培养的外植体转移到加有选择压（以Hph为标记基因时一般使用潮霉素）的脱菌（附加250-500mg/L的羧苄青霉素或头孢霉素，抑制农杆菌生长）分化或愈伤组织诱导培养基上，在光照为2000-10000lx、25℃条件下选择培养2-3周后，愈伤组织的转化细胞将分化出抗性愈伤组织，将这些抗性材料转入相应的选化或剩余的其他愈伤组织利用专用垃圾袋保存，121℃灭不同实验区域的清洁用具应固定，不能交叉使注：10%次氯酸钠和3%的双
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