常用pH缓冲溶液的配制和pH值

(一)溶液配制注意事项ﻫ1、药品要有较好得质量

试剂分为优级纯（保证试剂,Guarａnteeｄ

reagｅｎt,Ｇ、R、)、分析试剂(Antalyｔical

reagent,A、R、)化学纯（Ｃhemicａｌ

purｅ,C、P、)与实验试剂(Laboraｔｏｒy

rｅageｎt，L、Ｒ、)等等。工业用得化学试剂,杂质较多,只在个别情况下应用，如配洗液用得硫酸、配干燥剂得氯化钙等。

２、药品称量要精确。ﻫ3、配制试剂用水应用新鲜得去离子水或双蒸馏水,比电阻值在５0万欧姆以上,pＨ在5、５～7、0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此项要求,配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

4、配好后得溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质）,以防杂菌生长。ﻫ（二)０、0６7（1／１5)Moｌ/L磷酸缓冲液

1、１/１５Ｍｏｌ／L磷酸二氢钾溶液得配制:称取磷酸二氢钾(KH2PO4,Ａ、R、)９.０8ｇ,用蒸馏水溶解后，倾入1

0０0ml容量瓶内，再稀释至刻度（1

０00ml)。

２、1／15Ｍｏl／L磷酸二氢钠溶液得配制:称取无水磷酸氢二钠（Nａ2HPO４,A、R、)9．4７g(或者Na２ＨPO4·2H2O

1１．8７g)用蒸馏水溶解后，放入1

00０ml容量瓶内,再加蒸馏水稀释至刻度(1

00０ml)。ﻫ3、按附表得比例,配制成不同pH值得缓冲溶液。

附表1

磷酸盐缓冲液配制法(单位:毫升)ﻫpH

1/１5Moｌ/L

Ｎａ2HＰO4

1/1５Ｍol/Ｌ

ＫH2PO4

pＨ

1／１５Ｍol/L

Na2ＨPＯ4

1／15Mol/Ｌ

ＫＨ２ＰO4

５、8

８、0

92、0

７、1

66、6

２３、４

ﻫ５、9

9、9

90、１

7、2

７2、0

28、0

6、0

12、2

8７、８

7、3

76、８

2３、２

6、１

１５、3

84、7

７、３

80、8

１9、2

6、2

1８、6

８1、４

7、５

84、１

15、9

6、3

22、4

77、6

７、６

8７、0

１３、0

6、4

２6、7

７３、3

7、7

89、4

１0、6

6、5

３1、8

68、２

7、8

91、5

8、5

６、６

37、5

6２、5

7、9

93、２

６、８

ﻫ6、７

４3、5

56、5

8、8

9４、7

5、3

6、8

４９、６

50、4

8、1

95、8

４、2

６、９

５5、4

4４、6

8、２

97、0

3、０

7、0

６1、1

38、9

8、4

98、0

2、0

(三)0、15Ｍol/L

PＢ液

附表2

0、15Mｏｌ/LＰB液配制法

pH

0、１５Mｏl／L

Nａ２HＰO4（ml）

0、15Mｏl/L

NaH2PO４(ml)

ﻫ6、4

２6、５

７3、５

6、6

37、5

62、５

6、８

4９、0

5１、0

7、0

６1、０

3９、0

ﻫ7、2

７2、0

28、0

7、4

81、0

1９、0

ﻫ7、６

８7、0

13、０

ﻫ

Na2HＰO4·2H2Ｏ分子量=175、０5

0、15Mol／L溶液含２６.７ｇ/L。

Na２HPＯ4·１２H2O分子量＝３58、22

0、１5Mol／L溶液含５3．7g/L。ﻫNａH2ＰＯ4·H2O分子量=１3８、０0

0、１5Mｏl/L溶液含20.7g/L。

NａH2PO4·2H2O分子量=156、0３

0、15Ｍｏl/L溶液含2３.4g／L。ﻫ(四)0、2Mｏl/Ｌ

ＰB缓冲液ﻫ附表3

0、２mol/Ｌ

PＢ缓冲液配制法

pH

0、2

Mol/L

Nａ２HPＯ4(ｍｌ)

0、2Mol／L

NaH2PO4（mｌ)

５、8

8、0

92、0

６、0

12、３

87、７

ﻫ6、2

１8、5

８1、5

ﻫ6、4

26、5

73、5

ﻫ6、6

37、5

６2、5

6、8

49、0

5１、0

7、０

61、0

３9、0

ﻫ7、２

７2、0

2８、0

7、4

８1、0

１9、0

7、6

８7、0

13、0

ﻫ７、8

91、5

8、5

ﻫ8、0

９４、7

5、3

ﻫ

0、２Mol/Ｌ

Nａ２HＰO4·２

H2O溶液３5.６1g/L

Na2HPO４·12

H2O溶液含7１.６4g/L

０、２Ｍol/LNａH2PO4·Ｈ2O溶液含27.60g／Lﻫ

NaH2PＯ４·２

H2O溶液含31.２1ｇ/L

欲配0、1Ｍol／L

ＰB缓冲液则在0、2Mol/L

PＢ缓冲液得基础上加H2Ｏ稀释1倍即可。欲配制PＢS液时,则在溶液中加0、８５%得ＮａCl溶液即可。

(五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水(ＰBS）ﻫ(0、15Mｏｌ/Ｌ

PH

7、2)ﻫ

NａCl

８.0g

KＣl

0.2g

Na2ＨPO4

１.1５gﻫ

（如为Na2HＰO4·1２Ｈ2O,则为2.8９ｇ)ﻫ

KH２ＰO4

0.2gﻫ将上述试剂依次溶于1

０00ml去离子水中,完全溶解后,１1５℃高压灭菌１０ｍin~1５min,存在４℃冰箱中备用。此液可用于配制与稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

(六）硼酸盐缓冲液(Borate

sａlｉｎe

buffeｒ)

文章来自:

医药园

（HＹＰＥRＬＩNK"）/"\t"_blａnk")

整理:zfg

１、硼酸（Ｈ3BＯ3)ﻫ0、2Mol／L硼酸:硼酸12.3７g加水至1

00０ｍl。

２、硼砂(Na2Ｂ4O7)

０、０５Ｍol/L硼砂:硼砂1９．07g加水至1

０00ml。ﻫ附表4

不同ｐH得0、2Mol/Ｌ硼酸缓冲液配制法

ｐH

0、０5Moｌ/L硼砂(ml）

0、2Mｏｌ/L硼酸(ml)

pH

０、05Moｌ/L硼砂(mｌ)

0、2Mol/Ｌ硼酸(mｌ)

7、4

１、0

9、0

8、２

3、5

６、5

7、6

1、5

８、5

８、4

4、5

5、5

ﻫ7、8

2、０

8、０

8、7

6、0

4、0

ﻫ8、0

３、０

7、0

９、0

8、０

2、0

(七)巴比妥缓冲液

1、pH8、2离子强度0、05Mｏｌ/L巴比妥缓冲液

巴比妥钠

47.6g

蒸馏水

3

000ｍl

1、１７Ｎ

HCｌ

55、0mlﻫ

（1、17

N

ＨCl=193ml浓HＣl加1

807mｌ蒸馏水）

⑴

将4.7６g巴比妥钠溶于3

0０0ml蒸馏水。

⑵

加1、17

N

HCｌ

55ｍl。ﻫ⑶

用HＣl调节pH到8、2,并加蒸馏水至4

2６5ml。ﻫ

2、pH8、4

0、0６Mol/L巴比妥缓冲液ﻫ

巴比妥

1.8４gﻫ

巴比妥钠

10.3０gﻫ

加蒸馏水至

1

000、00ml

3、pＨ8、6

0、０6Mol/L巴比妥缓冲液

巴比妥

1.6６ｇﻫ

巴比妥钠

12.76gﻫ

加蒸馏水

1

0０0、0０ｍlﻫ(八)0、2Mol/L醋酸盐缓冲液

见表附表５ﻫ附表5

0、2Ｍｏｌ/L醋酸盐缓冲液配制法ﻫpH

０、2Mol／ＬﻫＴris(ml）

0、1Moｌ/L

HＣl（mｌ)

pH

0、2Mol/LﻫＴriｓ(ｍｌ)

0、1Ｍｏl／L

ＨＣl(mｌ)

23℃

37℃

23℃

3７℃

9、10

8、95

２5

5

8、06

７、9０

25

２7、５

ﻫ8、92

8、7６

２5

7、5

7、９6

7、8２

25

３0、0

ﻫ８、75

8、60

2５

10、5

7、87

７、73

25

32、５

ﻫ８、６2

8、48

２5

1２、5

7、77

7、63

２5

3５、0

８、5０

8、37

２５

1５、5

7、６6

7、52

25

37、5

８、40

8、27

２5

１7、5

7、54

7、40

25

40、0

ﻫ8、３２

8、18

2５

20、0

7、36

7、22

25

42、5

ﻫ(九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液(Tｒis—HCｌ缓冲液)

不同pH，0、05Ｍol/Lﻫ25ml0、2Ｍｏl/L三羟甲基氨基甲烷加хmｌ0、1NHCl,加水稀释至１00ｍl(见下表)

附表6

Trｉs—HCl缓冲液配制法

pH

0、２Mol/L

Trｉs(ml）

0、1NHCｌ

(mｌ)

pH

0、2Mol／LﻫTｒiｓ（ml)

０、1NHCl

(ｍl）

ﻫ23℃

37℃

23℃

3７℃

ﻫ9、10

8、96

25

5

8、0５

7、90

25

2７、５

８、92

8、７8

25

7、5

７、9６

7、82

25

3０、0

ﻫ8、74

８、60

２5

１0、0

7、87

７、73

25

3２、5

８、62

8、４8

２5

12、5

7、77

7、63

2５

35、０

８、５0

８、３７

25

１5、0

7、66

7、５2

２5

３7、5

ﻫ８、4０

８、27

25

17、5

7、54

7、40

25

40、0

ﻫ8、32

8、18

25

2０、0

７、36

7、22

2５

4２、5

8、23

8、1０

25

22、５

7、２0

7、05

25

45、0

8、１4

８、00

25

25、0

25

ﻫﻫ三羟甲基氨基甲烷(Tris)ﻫ

分子量=12１、1４

0、２Ｍoｌ/Ｌ三羟甲基氨基甲烷：Tris２4.２3g，加水至1

00０ml。

0、1NHＣl:取HCl8、６ｍl,加水至1

０00ｍl。

(十)0、5Ｍol/L

pH9、5碳酸盐缓冲液ﻫ

NaＨCO3

3.７０g

Na2CO3

0.60ｇ

溶于６00、０0mｌ蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞,以免吸收空气中二氧化碳使PＨ下降。最好小量配制。ﻫ(十一)甘油磷酸缓冲液

1、配制pＨ8、０磷酸缓冲液

0、1Mol/L

Na２HＰO４

94、50mlﻫ

0、1N

NaＨ２PＯ4

5、５０mlﻫ

混合即可

2、9份甘油与1份pH8、０磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：用于免疫荧光试验。ﻫ(十二）Hａnk’ｓ液

1、贮存液ﻫ

NaＣl

80.0０g

KCl

4．00g

Ｎa2HＰＯ4·12

H2Ｏ

1.５2gﻫ

KＨ2PO4

0.60g

葡萄糖

４.0０gﻫ

０、4％酚红液

50、００mlﻫ

双馏水加至

100、0０ml

115℃高压灭菌1５min,冰冻保存。

2、工作液

贮存液

1份ﻫ

双馏水

9份ﻫ

115℃高压灭菌15ｍiｎ。临用时用灭菌得5、6％ＮaＨCＯ3液调ｐＨ值至7、2左右（溶液呈橙红色)。

(十三）萘(钠)氏试剂(Nessler’ｓ

reagent）

配方1:氯化汞

6.0ｇ

碘化钾

12．4gﻫ

20％NaOＨ

3０ｍlﻫ

加蒸馏水至

100ml

配方2:碘化汞

11.５ｇﻫ

碘化钾

8gﻫ

蒸馏水

５0mlﻫ

（完全溶解后)过滤,加20％NaOH

50ml。ﻫ

用途:检测溶液中氨离子。ﻫ(十四）阿氏(Alsever’s）液ﻫ

葡萄糖

2.05gﻫ

柠檬酸钠

0.８０g

氯化钠

0.42ｇ

蒸馏水

100ｍlﻫ

溶解后，以１０%柠檬酸调节ｐH至６、１,过滤，分装,１0磅10miｎ灭菌,４℃保存。ﻫ(十五）青、链霉素混合液(简称S、P、液或双抗液）ﻫ

青霉素(４0万U)

5支

链霉素（20０万μg)

１支

分别溶于100ｍl灭菌无离子水中或共同溶于20０ml灭菌无离子水中,混合后分装小瓶,置－10℃~-２0℃冰箱保存备用（1万单位μg／ml)。

临用时,按1％得量加入营养液或其她溶液中,最后浓度就就是青霉素10０U／mｌ,链霉素1００ug／ml。

（十六)洗液(清洁液）

配方1:重铬酸钾

150gﻫ

蒸馏水

300ml

浓硫酸

３

000mlﻫ将重铬酸钾加入蒸馏水中,使之自然溶解或水浴溶解,亦可在大坩埚中加热溶解,然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌,见发热过剧则稍停,冷却后再继续加。此为强洗液。

盛清洁液得容器要坚固,上加厚玻璃盖,操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜与厚胶皮手套,以保安全。ﻫ洗液一旦变绿,表示铬酸已经还原,失去了氧化能力,不宜再用。如将这样洗液加热,再加适量重铬酸钾,又可重新使用。ﻫ配方２：浓硫酸

５０%ﻫ

蒸馏水

50%

重铬酸钾

5%ﻫ此为中等强度洗液。ﻫ缓冲溶液(英文:bufｆersolｕtioｎ）就就是一种能在加入少量HＹＰERLINK＂"＼t"_blank"酸或ＨＹPＥＲLINＫ＂"＼ｔ"_blａnk"碱与HＹPERＬINＫ＂"\t"＿blank"水时大大减低ＨＹPERLINK"＂\t"＿blanｋ"pH变动得ＨYＰERLIＮK""\t＂_blａnk"溶液。pH缓冲系统对维持HYPＥRLIＮK"＂生物得正常pＨ值与正常HYPERＬIＮK＂"\ｔ"_blaｎk＂生理环境起到重要作用。多数HYＰERLINK""＼t"_bｌaｎk"细胞仅能在很窄得ｐH范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现得pH变化。在生物体中有三种主要得pＨ缓冲体系,它们就就是ＨYPERLINK""\t"＿blank"蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及HＹPERLINK""\t＂＿blanｋ"磷酸盐缓冲系统。每种缓冲体系所占得分量在各类细胞与HYＰERLＩＮK"＂\t＂_ｂlａnk"器官中就就是不同得。在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系得HYPＥRLＩNK""\ｔ"_blank"酸碱度。研究工作得溶液体系pＨ值得变化往往直接影响到研究工作得成效。如果“提取ＨYPERLINK""\t"＿blank"酶”实验体系得pＨ值变动或大幅度变动,HYPERLINＫ"＂\ｔ"_ｂｌaｎｋ＂酶活性就会下降甚至完全丧失。所以配制缓冲溶液就就是一个不可或缺得关键步骤。[ＨYPERＬＩＮK""\ｌ"#"编辑本段]常用作缓冲溶液常用作缓冲溶液得酸类由HYPＥＲLINK""\ｔ＂_ｂlａｎk"弱酸及其共轭酸盐组合成得溶液具有缓冲作用。HYPEＲLIＮK""＼t"＿blank"生化实验室常用得缓冲系主要有HYＰERLIＮK"＂\t"＿blaｎk"磷酸、HYPＥＲLIＮK＂"\ｔ"_blanｋ"柠檬酸、HYＰEＲLINK""＼t＂＿ｂlａnk"碳酸、HYPERLIＮK""\ｔ"＿blanｋ"醋酸、ＨYPERLINK""\ｔ＂_blaｎk＂巴比妥酸、HYPERＬINＫ""\t"_blank＂Ｔris（HYPEＲLINK""＼ｔ"＿ｂｌank＂三羟甲基氨基甲烷)等系统，生化实验或ＨＹPＥRLＩNK""\ｔ＂＿blank"研究工作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果得因素并不就就是缓冲液得ｐH值,而就就是缓冲液中得某种HYPERLINＫ""\t＂_blank＂离子。如ＨＹPERLＩNK"＂\t"_blaｎｋ"硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐与三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要得化学反应。硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成HＹＰERLINＫ""\ｔ"_bｌａnｋ"复盐、如HＹＰERLINK＂"\t"＿ｂlａnk"蔗糖。柠檬酸盐:柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子得情况下不能使用。磷酸盐：在有些实验,它就就是酶得抑止剂或甚至就就是一个代谢物,重金属易以磷酸盐得形式从溶液中沉淀出来。而且它在ｐＨ7、５以上时缓冲能力很小。三羟甲基氨基甲烷:它可以与重金属一起作用,但在有些系统中也起抑制作用。其主要缺点时HＹPERLIＮＫ＂"\t"_ｂlank"温度效应。这点往往被忽视,在室温pH就就是7、８得Trｉs缓冲液,4℃时就就是８、4,37℃时就就是7、4,因此,4℃配制得缓冲液在37℃进行测量时,其氢离子浓度就增加了10倍。在ｐH７、5以下,其缓冲能力极为不理想。[ＨＹPEＲLINＫ＂"＼l＂#"编辑本段]缓冲溶液组成缓冲体系由１、弱酸与它得盐（如ＨAc---NaAc)2、弱碱与它得盐(NH3、H２O--－NH４Cl)3、多元弱酸得酸式盐及其对应得次级盐(如NaH2PＯ４－--Ｎａ2ＨＰＯ4）得水溶液组成。［HYPERＬINK""编辑本段]决定缓冲液ｐH值得因素设缓冲系统得弱酸得ＨＹＰERLINＫ＂"＼ｔ"_blank"电离常数为Ｋ（HYPＥRLIＮＫ＂"\t＂＿bｌank"平衡常数)，平衡时弱酸得ＨYＰERLINK""\ｔ"_blank"浓度为[酸]，弱酸盐得浓度为[盐],则由弱酸得电离平衡式可得下式:［Ｈ＋]=Kａ{[弱酸]/[共轭碱]}pＨ=pKａ＋lｏｇ｛[共轭碱]/[弱酸]}这就就就是Hendｅｒｓoｎ-Ｈａsseｌbaｃh等式。如果[弱酸]=[共轭碱］,ｐＨ=ＨＹPEＲＬINK""＼t"_blanｋ＂pKa根据此式可得出下列几点结论:1缓冲液得ｐH值与该酸得HＹPＥRLINK""＼t＂_blａnk"电离平衡常数K及盐与酸得浓度有关。弱酸得pH值衡定，但酸与盐得比