第54讲微生物的培养技术及应用课件高三生物一轮复习（人教版）

生物技术与工程发酵工程基因工程重组DNA技术的基本工具传统发酵技术的应用细胞工程生物技术的安全性与伦理问题微生物的培养技术及应用动物细胞工程植物细胞工程基因工程的基本操作程序基因工程的运用蛋白质工程的原理和应用转基因产品的安全性发酵工程及其应用胚胎工程关注生殖性克隆人、禁止生物武器第54讲

微生物的培养技术及应用第十单元

生物技术与工程课标要求核心素养1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的

微生物培养物的前提。2.阐明无菌技术是在操作过程中,保持无

菌物品与无菌区域不被微生物污染的

技术。3.举例说明通过调整培养基的配方可有

目的地培养某种微生物。4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是

实验室中进行微生物分离和纯化的常

用方法。5.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法

是测定微生物数量的常用方法。1.生命观念：通过认识乳酸菌、酵母菌和醋酸

菌的结构和代谢类型与各类微生物都能适应

其生活环境。2.科学思维：根据微生物的代谢类型分析培养

基的组成和配制。3.科学探究：讨论并掌握无菌技术的实验操作

方法；讨论并掌握微生物的纯培养的方法；

讨论土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的

方法。4.社会责任：讨论和认可发酵工程在生产上的

重要应用价值。自主梳理课本选择性必修3《生物技术与工程》P9-211.实验室培养微生物的条件？培养基定义？分类？成分（必备营养组成、特殊需求）？2.获得纯净的微生物培养物的关键？无菌技术包括哪两个方面？消毒：定义？常用方法？

应用范围？

灭菌：定义？常用方法？应用范围？

3.纯培养物的定义？纯培养的定义？

菌落的定义？

接种方法？微生物的纯培养包括哪些

步骤？培养基、培养皿的灭菌方法

？培养基调PH在哪一步之前进行？倒平板温度？平

板冷凝后，倒置目的？锥形瓶瓶口通过火焰的目的？培养皿只打开一条缝的目的？平板

划线法的原理？接种环灼烧次数？每次灼烧的目的？在第二次以及其后的划线操作时，

为什么总是从上一次划线的末端开始划线？接种后的平板培养时如何放置？培养条件？

同时培养一个未接种的平板作用？4.实验室微生物筛选的原理？选择培养基的概念？一些细菌能利用尿素的原因？尿素不能

作为分解尿素的细菌的碳源的原因？配制什么培养基将土壤稀释液中能分解尿素的细菌

分离出来？培养基中KH2PO4和Na2HPO4作用？5.微生物的数量测定的方法？活菌计数法常用的接种方式？原理？选择菌落数多少的平板

计数？结果统计的是活菌数还是死菌数？为什么统计值比实际值小？直接计数法的优点？

材料用具？结果统计的是活菌数还是死菌数？微生物的基本培养技术微生物的选择培养和计数无细胞结构原核细胞真核细胞真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫、硅藻等1.微生物的类群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RNA病毒；噬菌体等DNA病毒细菌：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌、醋酸菌等；放线菌：链霉菌等本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。一、培养基为微生物提供所需营养物质2.培养基(1)概念：人们按照微生物对

的不同需求，配制出供其

的营养基质。营养物质生长繁殖(2)作用：用以

微生物或

。积累其代谢物(3)营养构成：①基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源无机碳源：CO2（空气中）、CO32-、HCO3-有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物氮源无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有机氮源：蛋白胨、牛肉膏、尿素、氨基酸等无机盐：Ca、K、Mg为大量元素；Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素②特殊需求：满足微生物对

、

、

的需求。特殊营养物质pHO2培养厌氧微生物时，需要提供

的条件。培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加

；培养霉菌时，需要将培养基调至

；培养细菌时，需要将培养基调至

；维生素酸性中性或弱碱性无氧培养、分离、鉴定、保存含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源特殊营养物质：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等提供无机营养、调节PH、维持渗透压划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产、扩大培养观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产用已知的化学物质配制分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基(4)培养基的类型具体处理原理目的选择培养基鉴别培养基

分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养微生物鉴别分解尿素的细菌鉴别纤维素分解菌加入青霉素不加氮源不加有机碳源加入酚红培养基加入刚果红青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用固氮微生物能利用空气中的氮气自养型微生物能利用无机碳源尿素被分解产生氨，培养基呈碱性，酚红指示剂变红。刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈。加入伊红-亚甲蓝琼脂培养基鉴别大肠杆菌菌落呈现深紫色1.目的：防止培养物被污染；2.关键：防止感染实验操作者。防止杂菌污染①消毒；②灭菌；3.防止杂菌污染的方法③避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触；④为了避免周围环境微生物污染，操作应在

超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。二、无菌技术4.无菌技术的对象：①实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。培养皿接种环培养基类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物，不包括芽孢和孢子强烈的理化方法，杀死所有微生物，包括芽孢和孢子煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5-6min巴氏消毒法不耐高温的液体62-65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌,160-170℃加热2-3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15-30min接种室、接种箱，超净工作台5.无菌技术的类型1.灭菌物品不要装得太挤，以妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果2.锥形瓶和试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹的瓶口的

纸渗入棉塞3.加热初期打开排气阀，待冷空气排尽之后再关闭4.断开电源，让锅内温度自然下降，待压力表指针指到零后打开排气阀高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌效果最好；灼烧灭菌最彻底。酒精消毒液中酒精浓度对效果的影响：无菌技术措施的选择原则：①考虑效果：灭菌的效果比消毒要好。②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒的方法，

而不能采用灭菌的方法。75%的酒精杀菌效果最好；浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中。浓度过低，杀菌能力减弱。易错强化

湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）干热灭菌灼烧灭菌化学药物消毒（酒精）紫外线消毒巴氏消毒法以下所采用的灭菌或消毒方法依次是什么？化学药物消毒（次氯酸钠）培养基：培养皿：接种环：实验操作者的双手：实验室：牛奶：

有活性生物材料：辨析思考三、微生物的纯培养①培养物：②纯培养物：接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体③纯培养获得纯培养物的过程1.相关概念配制培养基、_____、接种、_____和培养等。由单一个体繁殖所获得的微生物群体概念：步骤：最常用的接种方法是____________和_______________。平板划线法

稀释涂布平板法

④菌落：由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。接种方法：灭菌

分离

菌落属于种群；不同菌落的大小、形状、隆起程度、颜色等不同特征是鉴定菌种的重要依据微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖2.酵母菌的纯培养接种和分离培养酵母菌制备培养基配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养去皮马铃薯200g,切成块加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂用纱布过滤用蒸馏水定容至1000ml加入20g葡萄糖15-20g琼脂结果分析如果需要调节培养基的pH，应该在定容完成之后，灭菌之前进行操作配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养培养基灭菌:

;培养皿灭菌:

;湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌马铃薯加水煮烂过滤蒸馏水定容加葡萄糖和琼脂结果分析配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养结果分析培养基要冷却至50℃左右开始倒平板。温度过高会烫手，温度过低培养基会凝固。锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，平板倒置后，既可避免培养基表面的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。结果分析培养基灭菌:

;培养皿灭菌:

;湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌马铃薯加水煮烂过滤蒸馏水定容加葡萄糖和琼脂配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养结果分析灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上原有微生物。杀死上次划线残留菌种,使下次划线菌种直接来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者12345接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。结果分析培养基灭菌:

;培养皿灭菌:

;湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌马铃薯加水煮烂过滤蒸馏水定容加葡萄糖和琼脂平板划线法方法：原理：单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散或稀释生长繁殖配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。结果分析培养基灭菌:

;培养皿灭菌:

;湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌马铃薯加水煮烂过滤蒸馏水定容加葡萄糖和琼脂平板划线法方法：原理：单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散或稀释生长繁殖对照组：实验组：未接种平板倒置培养接种平板倒置培养(1个)(3个)28℃恒温培养箱培养配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养结果分析①在未接种的培养基表面是否有菌落生长②在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌

落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点，③如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操

作不规范等原因引起的。配制培养基灭

菌培

养倒

平

板接种和分离2.酵母菌的纯培养待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。结果分析培养基灭菌:

;培养皿灭菌:

;湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌马铃薯加水煮烂过滤蒸馏水定容加葡萄糖和琼脂平板划线法方法：原理：单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散或稀释生长繁殖对照组：实验组：未接种平板倒置培养接种平板倒置培养①在未接种的培养基表面是否有菌落生长②在接种酵母菌的培养基上观察单菌落特征1.培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质()2.培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性()3.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上()4.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。()5.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落()6.对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和灭菌()7.无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料（如培养基、接种环等）都可采用干热

灭菌法进行灭菌（

）8.配制培养基时应先灭菌再调pH（

）9.平板划线法中每一次划线后要将接种环灼烧（

）10.为了避免周围环境中微生物的污染，接种过程中许多操作都应在超净工作台并在酒

精灯火焰附近进行。()11.培养微生物的温度因菌种不同而稍有差异()易错辨析√√×××√√×√××下列有关无菌技术的说法，正确的是（

）A.无菌技术的关键是杀灭实验室中的所有的微生物B.培养微生物的试剂和器具都要进行湿热灭菌C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存D.无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌C典例分析根据倒平板的方法及注意事项回答下列问题：（1）培养基灭菌后，需要冷却到________左右时，才能用来倒平板。（2）请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：______________________。（3）甲、乙、丙中的灭菌方法是_________________。（4）丁中的操作需要等待_______________才能进行。为什么要将平板倒置？（5）整个过程为何要在酒精灯旁进行？（6）如何检测培养基制备是否成功？50℃丙→乙→甲→丁灼烧灭菌

平板冷却凝固

37℃倒置培养24～48h，观察是否有微生物生长防止皿盖上水珠落入培养基造成污染，避免培养基表面的水分更快地挥发。酒精灯旁空气中杂菌少典例分析微生物的基本培养技术微生物的选择培养和计数寻找耐高温的DNA聚合酶聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外DNA复制的技术，要使用耐高温的DNA聚合酶。1.科学实例：(2)筛选原因：(1)筛选思路：耐高温的酶耐高温的生物体高温环境（热泉、火山口）寻找寻找美国黄石公园

热泉的高温淘汰了绝大多数微生物，而水生栖热菌能生存。一、选择培养基例：在被石油污染的土壤中可以筛选

微生物

在冰川冻土层可以筛选

微生物

以纤维素为唯一碳源培养基分解石油耐寒——分离______________纤维素分解菌(3)启示:

人为提供____________________的条件（包括______、____和______等），同时_________________________________有利于目的菌生长营养温度PH抑制或阻止其他微生物的生长2.实验室筛选微生物的原理：寻找目的菌种时要根据它对

的要求，到相应的环境中去寻找。生存环境培养基按营养成分是否完全分：基本培养基：野生型菌株正常生长；完全培养基：满足绝大多数微生物的生长；补充培养基：加某种营养成分满足相应的营养缺陷型菌株生长。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。3.概念：一、选择培养基4.选择培养基的制备方法类型条件选择分离得到的菌种水生栖热菌酵母菌、霉菌等真菌金黄色葡萄球菌能消除石油污染的微生物自养型微生物固氮菌厌氧型微生物，兼性厌氧型改变培养条件添加某种化学物质特殊碳、氮源营养缺陷不加氮源不加碳源石油是唯一碳源高浓度食盐加入青霉素无氧环境下培养70～80℃的高温编号①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL据某微生物培养基的配方表回答下列问题1.此培养基按物理性质划分属于______培养基，理由是______________________

按功能划分属于_______培养基，因为没有碳源，只有__________微生物才能生长

(利用空气中的CO2)。2.此培养基含有的微生物的营养成分包括____________________三类，若加入氨基酸，

则它可充当的营养成分包括_________________________。3.若要观察微生物的菌落特征，培养基中应添加的成分是_________________。4.若用该培养基来分离尿素分解菌，应除去表中

成分(填表中序号)，应加入

_________和_______________的有机物。液体选择自养型水、无机盐、氮源碳源、氮源、生长因子凝固剂(琼脂)①尿素不含氮元素没有凝固剂(琼脂)典例分析1.稀释涂布平板法(3)两个基本操作：___________和___________(1)概念：是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养的方法。梯度稀释涂布平板聚集的微生物单个细胞菌液梯度稀释单个菌落涂布平板生长繁殖(2)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌二、微生物数量的测定（活菌计数法即统计菌落数间接计数活菌数）①选择30-300个菌落的平板进行计数；②每个稀释度至少取3个平板取其平均值。(4)计数原则:思考：用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目

，原因

是

。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落低（5）计算公式：M代表稀释倍数C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)每g样品中的菌落数＝

(C÷V)×M1.稀释涂布平板法二、微生物数量的测定（活菌计数法即统计菌落数间接计数活菌数）例：某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234

个(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)，那么稀释倍数为106的试

管中细菌的浓度是

个/mL，稀释倍数为10的锥形瓶中细菌的

浓度为

个/mL，所以每克样品中的细菌数是

个。2.34×1032.34×1082.34×109方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途效果图相同点连续划线梯度稀释→涂布平板接种环涂布器从最后划线区挑取稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数①都能分离纯化菌种；②都在固体培养基上进行归纳比较2.显微镜直接计数法不能区分死菌与活菌→导致结果偏大；个体小的细菌在显微镜下难以观察。（1）原理：（2）缺点：血细胞计数板：细菌计数板：较厚，用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。较薄，对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（“染色排除法”）（3）优点：快速、直观利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。细菌计数板计数室的高度是0.02mm2。故细菌计数板计数细菌的计算是：0.02mm3=0.02×10-3cm3=2×10-5mL3.比浊法直接计数分光光度计菌悬液中的细胞浓度与光密度成正比，在一定波长下，测定菌悬液的光密度将未知细胞数的菌悬液的光密度与已知细胞数的相比不能区分死菌和活菌二、微生物数量的测定内容直接计数法间接计数法主要用具计数依据优点计算公式缺点结果细菌计数板或血细胞计数板涂布器细菌个数培养基上菌落数计数方便、操作简单计数的是活菌每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400÷大格体积×稀释倍数每克样品中的菌株数:(C÷V)×M不能区分死菌与活菌当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落比实际值偏大比实际值偏小归纳比较

绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。1.实验目的：（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌2.实验原理：CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶尿素葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g蒸馏水定容1000ml①制备选择培养基（尿素为唯一氮源）提供无机盐；调节pH②制备牛肉膏蛋白胨培养基3.培养基的制备三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容1000ml土壤取样样品稀释菌落计数涂布平板观察培养4.实验流程细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。注意：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要

。操作完成后，一定要

。灭菌洗手结果分析土壤取样样品稀释4.实验流程细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤3~8cm的土壤层中生长将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。10g1090mL无菌水1mL1mL1mL1mL1mL1mL1021031041051061076只试管分别加入9mL无菌水菌落计数涂布平板观察培养结果分析土壤取样样品稀释4.实验流程菌落计数涂布平板观察培养结果分析a.用微量移液管取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。c.将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。d.用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入恒温箱培养。b.将涂布器浸在盛有酒精（体积分数70％）的烧杯中。土壤取样样品稀释4.实验流程菌落计数涂布平板观察培养结果分析不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间，适于计数的平板。一般测细菌数用104、105、106

放线菌用103、104、105

真菌数用102、103、104稀释液不涂布的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基验证培养基中是否含有杂菌。每个浓度至少设置4个平板选择培养基（平行重复）牛肉膏蛋白胨培养基（对照，判断选择培养

基是否具有选择作用）。思考：如何验证培养基中是否含有杂菌？土壤取样样品稀释4.实验流程菌落计数涂布平板观察培养结果分析培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。（细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d）观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。稀释度104105106107123平均值123平均值123平均值123平均值菌落数土壤取样样品稀释4.实验流程菌落计数涂布平板观察培养结果分析内容现象结论有无杂菌污染的判断对照的培养皿中无菌落生长对照组的培养皿中有菌落菌落形态多样，菌落数偏高选择培养基的筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目样品的稀释操作得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板重复组的结果若选取同一土样，统计结果应接近未被杂菌污染被杂菌污染培养基中混入其他杂菌选择培养基具有筛选作用操作成功思考：得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？不一定，还需要进一步鉴定5.分解尿素的细菌的鉴定在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性①液体培养基可以直接看液体的变色情况；②固体培养基上可以观察菌落周围是否出

现红色环带，红色环带直径与菌落直径

比值越大，说明分解能力越强。原理：几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈土壤取样→富含纤维素的环境→以纤维素为唯一碳源，增加

目的菌浓度（选择培养基）→制备系列稀释液→筛选产生透明圈的菌落选择培养涂布平板→将样品涂布到含刚果红的培

养基上（鉴别培养基）梯度稀释挑

选四、拓展：分解纤维素的微生物的分离纤维素刚果红红色复合物纤维素酶红色消失现透明圈纤维素分解菌红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。拓展：鉴别培养基名称主要用途主要化学物质特征性变化伊红—亚甲蓝琼脂培养基

刚果红培养基油脂培养基淀粉培养基H2S试验培养基鉴别大肠杆菌鉴别纤维素分解菌鉴别产脂肪酶菌株鉴别产淀粉酶菌株鉴别产H2S菌株伊红、亚甲蓝刚果红、纤维素食用油、吐温、中性红指示剂碘液、可溶性淀粉醋酸铅出现金属光泽的深紫色菌落纤维素被分解后出现透明圈由淡红色变成深红色淀粉被分解后出现淀粉水解圈产生黑色沉淀微生物的筛选方法微生物的鉴别方法归纳总结菌落特征鉴别法指示剂鉴别法透明圈鉴别法根据微生物在固体培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红，说明该种微生物能够分解尿素例如为了筛选出高效降解淀粉菌种，以淀粉为唯一碳源的微生物能产生淀粉酶分解淀粉，淀粉被分解后遇碘液不呈现蓝色，因而随着淀粉被分解，蓝色褪去出现透明圈单菌落挑取法选择培养法鉴定培养法利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，筛选目的微生物1.选择培养基可以鉴定某种微生物的种类（

）2.筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源（

）3.分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低（

）4.尿素在脲酶的催化作用下分解成无机物（

）5.刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分

解菌（

）6.稀释涂布平板法计数时，平板上的一个菌落就是一个细菌。统计的菌落数就是活菌的

实际数(

)7.统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计()8.利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数()9.菌液的稀释度足够高时，培养基表面会获得单菌落。(

)10.适于平板计数的菌落数范围为3～300。(

)×√×√×××√×易错辨析×

（2）操作中在血平板上的接种方法

是

，接种操作前后需要对接种工具进行

灭菌。（1）7.5%NaCl肉汤培养基为微生物提供的营养成分包

括

，用7.5%NaCl肉汤

培养基进行选择培养的主要目的

是

。金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答问题。碳源、氮源、水和无机盐增加金黄色葡萄球菌的