T-NAIA 0393-2025 葡萄酒中维生素B2的测定 液相色谱-串联质谱法

宁夏化学分析测试协会发布IT/NAIA0393—2025本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定编写。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞及葡萄酒质量安全））、宁夏化学分析测试协会。本文件主要起草人：张瑶、王泽岚、郭阳、马雪梅、杨建兴、张茹、李强、刘竞择、吴明、吕毅、马桂娟、张小飞。1T/NAIA0393—2025葡萄酒中维生素B2的测定液相色谱-串联质谱法本文件规定了葡萄酒中维生素B2的液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用葡萄酒中维生素B2的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。样品经混匀、离心、过滤，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。5试剂和材料本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1甲酸铵（NH4CO2色谱纯。5.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.3盐酸（HCl）：优级纯。5.1.4盐酸溶液（1+1）：量取等体积的浓盐酸与水，混合均匀。5.1.55mmol/L甲酸铵溶液：称取0.1576g甲酸铵(5.1.1)，用水溶解，定容至500mL，混合均匀。5.2标准品维生素B2：CAS号：83-88-5，纯度不低于99.0%，分子式：C17H20N4O6。5.3标准溶液配制5.3.1标准储备液（100.0μg/mL准确称取适量的维生素B2标准物质，加入2mL盐酸溶液（5.1.4），超声溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，于4℃避光保存，有效期3个T/NAIA0393—20252T/NAIA0393—20255.3.2标准中间液（1.0μg/mL）：吸取维生素B2标准储备液1.0mL于100mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，得到浓度为1.0μg/mL的标准中间液，于4℃避光保存。5.3.3标准工作液：分别准确吸取不同体积标准中间液，用流动相将维生素B2配制成浓度为5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、200.0μg/L、500.0μg/L的标准工作液，临用现配。6仪器和设备6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.01mg和0.01g。6.3高速离心机：转速15000r/min。6.4超声波振荡器。6.5水相微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。7.1试样制备起泡葡萄酒需预先脱气。将100mL试样倒入带排气塞的瓶中，置于超声波振荡器（6.5）中脱气，直至无气体逸出。7.2测定步骤将葡萄酒试样摇匀，取一定量试样于塑料离心管中，于15000r/min离心5min，上清液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。7.3仪器参考条件7.3.1液相色谱参考条件a）色谱柱：C8，2.1mm×100mm，粒径3.5μm或性能相当。b）柱温：30℃。c）流动相：A：5mmol/L甲酸铵溶液（5.1.4），流动相B：甲醇（5.1.2）。d）流速：0.3mL/min。e）进样量：5μL。7.3.2质谱参考条件a）电离方式：电喷雾离子源（ESI）。b）扫描方式：正离子扫描。c）检测方式：多反应监测（MRM）。d）鞘气温度：325℃。T/NAIA0393—20252e）鞘气流速：10.0L/min。f）雾化器压力：310.23kPa。3T/NAIA0393—2025T/NAIA0393—2025g）喷嘴电压：500V。h）毛细管电压：3500V。i）定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞能量等参数参见附录A。7.4定性测定经确证分析被测物质色谱峰保留时间与标准物质相一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离子均出现。同时所选择离子的丰度比与标准溶液中相关离子的相对丰度一致，相似度在允许偏差之内（见表1），则可判定样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差>50%7.5定量测定根据试液中被测物含量情况，选定浓度相近的标准使用液，标准使用液和待测试液中被测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准使用液与试液等体积进样测定。标准溶液及试液均按7.3.1和7.3.2规定的条件进行测定，如果试液中与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行确证。维生素B2标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图参见附录B，采用初始流动相溶液校准曲线外标法定量。7.6空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。8结果与表述试样中维生素B2的含量按式（1）进行计算：X——试样中维生素B2的含量，单位为微克每升(μg/L);c——从标准曲线得到的试样溶液维生素B2的浓度，单位为微克每升(μg/L);ƒ——样品稀释倍数。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9精密度在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。维生素B2的检出限为1.0μg/L，维生素B2的定量限为3.0μg/L。4T/NAIA0393—2025T/NAIA0393—2025表A.1维生素B2的质谱参数V5T/NAIA0393—2025T/NAIA0393—2025维生素B2标准溶液的多反应监测（MRM）典型色谱图+TICMRM(**->**)1-3.dx10343.532.5210.50.511.522.533.544.555.566.577.588.599.50.750.25AcquisitionTime(min)377.0->243.1,377.0->+MRM(1.454-1.901min,33sca243