饲料中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法编制说明

团体标准

饲料中硝基咪唑类药物及其代谢物

残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

（征求意见稿）

编制说明

陕西秦云农产品检验检测股份有限公司

2021年12月

1

饲料中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

编制说明

1任务来源及制定背景

1.1标准制定任务来源

团体标准《饲料中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-

串联质谱法》是根据陕西省饲料协会《关于征集2021年团体标准参编单位的

通知》（陕饲协[2021]020号）的要求制定的，本标准由陕西秦云农产品检验

检测股份有限公司主持，黑龙江省农产品和兽药饲料技术鉴定站、陕西正能农

牧科技有限公司、陕西鑫诚大唐畜牧有限公司共同参，项目完成期限为1年。

本标准由陕西省饲料协会提出并归口。经过项目组的共同努力，于2021年12

月完成标准征求意见稿。

1.2标准制定背景及意义

硝基咪唑类有机化合物是一类具有5一硝基咪唑环结构的药物。主要品种

有包括甲硝唑(MNZ)、二甲硝咪唑(DMZ)、异丙硝唑(IPZ)、塞可硝唑(SCZ)、

奥硝唑(ONZ)、替硝唑(TNZ)和洛硝哒唑(RNZ)等。硝基咪唑类药物具有抗原虫

和抗菌活性，同时也具有很强的抗厌氧菌作用。药物进入易感的微生物细胞后,

在无氧或少氧环境和较低的氧化还原电位下，其硝基易被电子传递蛋白还原成

具有细胞毒作用的氨基，抑制细胞DNA的合成，并使已合成的DNA降解，

破坏DNA的双螺旋结构或阻断其转录复制，从而使细胞死亡，发挥其迅速杀

灭厌氧菌、有效控制感染的作用。MNZ除抗滴虫及阿米巴原虫外，还对脆弱

拟杆菌、黑色素拟杆菌梭状杆菌属、产气荚膜梭状芽抱杆菌等有良好抗菌作用；

3

MNZ内服吸收迅速，生物利用度为60%~100%，在1~2h内达到峰浓度，在血

中仅少量与血浆蛋白结合，消除半衰期为4.5h。DMZ不仅能抗大肠弧菌、多

型性杆菌、链球菌、葡萄球菌和密螺旋体，且能抗组织滴虫、纤毛虫、阿米巴

原虫等。添加本品于饲料中，可预防螺旋体引起的猪下痢，亦可用于防治禽类

的组织滴虫病及六鞭虫病,此外还有增重作用[1-2]。

硝基咪唑类药物的临床表现中，虽然大多数病人对硝基咪唑类药物具有很

好的耐受性，但仍然出现了一些严重的不良反应，如过敏反应、片状出血、过

敏性休克等[3]。更严重的则会引起消化系统和呼吸系统疾病，使病人出现恶心，

胃部不适，急性肺水肿等病状。硝基咪唑类药物作为饲料添加药物使用时，不

会全部被畜禽动物吸收和排泄掉，有部分药物残留在动物体内，增加畜禽动物

的药物耐受性，同时造成动物源性食品的兽药残留污染危害，危害食品安全，

影响人类健康[4]。

随着农业农村部第194号公告的发布，自2020年7月1日起，饲料生产

企业停止生产含有促生长类药物的饲料添加剂品种，宣告饲料行业“限抗令”

正式实施。硝基咪唑类药物作为处方兽药，在饲料产品中不在作为抗菌类抗生

素药物添加。查阅国内检测硝基咪唑类药物的标准，现行有效的方法有：GB/T

23410-2009蜂蜜中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/

质谱法；农业部2349号公告-6-2015饲料中硝基咪唑类、硝基呋喃类和喹啉

类药物的测定液相色谱串联质谱法；农业部1025号公告-22-2008动物源食

品中4种硝基咪唑残留检测液相色谱-串联质谱法；GB/T23407-2009蜂王浆

中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法；GB/T

21995-2008饲料中硝基咪唑类药物的测定液相色谱-串联质谱法；GB/T

22949-2008蜂王浆及冻干粉中硝基咪唑类药物残留量的测定液相色谱-串联

质谱法；农业农村部公告第197号-1-2019饲料中硝基咪唑类药物的测定液

相色谱-质谱法等。

4

综合以上标准，当前测定硝基咪唑类药物的方法主要为液相色谱-串联质

谱法，其中用于饲料中硝基咪唑类药物的检测方法为GB/T21995-2008[5]和农

业农村部公告第197号-1-2019[6]，但两种方法检测的硝基咪唑类药物种类较

少，难以满足对此类药物的检测需要。因此需要建立一种能同时测定饲料中多

种硝基咪唑类药物及其残留量的高效液相色谱-串联质谱法迫在眉睫。

陕西秦云农产品检验检测股份有限公司发起并编制了《饲料中硝基咪唑类

药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，能够同时测定15种

硝基咪唑类药物及其代谢物残留量，为保障我省饲料产品质量安全，加强对于

饲料中硝基咪唑类的管控提供检测依据和数据支撑，该标准的制定将提升监管

部门对该类物质的监控能力，对规范硝基咪唑类药物的使用提供保障，在促进

我省饲料行业健康平稳发展，确保饲料及畜禽动物安全方面具有重要的意义。

2主要工作过程

2.1成立标准编制小组

计划任务下达后，我单位成立标准起草小组，对标准起草工作进行分工，

明确任务职责，确保项目顺利实施。

姓名性别所在单位职务/职称分工

项目主持人，负责项

陕西省畜牧技术推广总目的全面工作，负责

李宏男高级畜牧师

站编制说明及标准文稿

编写与审定

陕西秦云农产品检验检试验过程主要实施，

贺习文男助理工程师

测股份有限公司标准文稿及编制说明

陕西秦云农产品检验检

高勤叶女技术负责人组织项目实施

测股份有限公司

陕西秦云农产品检验检

雷浩男董事长经费划拨

测股份有限公司

5

陕西省畜牧技术推广总

赵彩会女畜牧师文稿校准

站

陕西秦云农产品检验检

李易轩男检验员实验数据检测

测股份有限公司

陕西秦云农产品检验检

赵雪宁女检验员实验数据检测

测股份有限公司

2.2相关标准和文献资料

查阅了有关标准和参考文献等技术资料，选取具有代表性的参考资料作为

标准起草中的主要技术参考文本。

（1）GB/T23410-2009蜂蜜中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法；

（2）农业部2349号公告-6-2015饲料中硝基咪唑类、硝基呋喃类和喹啉

类药物的测定液相色谱串联质谱法；

（3）农业部1025号公告-22-2008动物源食品中4种硝基咪唑残留检测

液相色谱-串联质谱法；

（4）GB/T23407-2009蜂王浆中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测

定液相色谱-质谱/质谱法；

（5）GB/T21995-2008饲料中硝基咪唑类药物的测定液相色谱-串联质

谱法；

（6）GB/T22949-2008蜂王浆及冻干粉中硝基咪唑类药物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法；

（7）GB/T23406-2009肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法；

（8）农业农村部公告第197号-1-2019饲料中硝基咪唑类药物的测定液

相色谱-质谱法；

（9）SN/T1928-2007进出口动物源性食品中硝基咪唑残留量检测方法

6

液相色谱-质谱/质谱法；

（10）SN/T2579-2010进出口蜂王浆中10种硝基咪唑类药物残留量的测

定液相色谱-质谱/质谱法。

3.3确定标准制定技术路线

本标准依据硝基咪唑类药物的理化性质基础上，确定标准制定的技术路线

如下：

（1）根据化合物性质确定样品的提取溶剂和净化方式；

（2）确定流动相、柱温等色谱条件，电压、源温等质谱条件；

（3）根据化合物的理化性质进行抗干扰试验；

（4）确定标准溶液的线性范围和稳定性；

（5）确定方法的检出限和定量限；

（6）验证方法的精密度和加标回收率；

（7）典型样品的试验情况。

3.标准的编写规则和编制依据

1、编写规则

本标准的结构、技术要素及表述方法按照GB/T1.1-2020《标准化工作导

则第1部分：标准的结构和编写》以及GB/T20001.4-2015《标准编制规则第

4部分：试验方法标准》的规定和要求进行编写。

2、编制依据

（1）遵循国家颁布的相关法律法规；

（2）国家或行业、团体标准有关文献资料规定；

（3）标准编制小组调研和实测的样品检测数据。

4.标准制定的主要内容及其依据

经资料查询，目前硝基咪唑类药物的检测方法有高效液相色谱法、气相色

谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法等[7-9]，HPLC法检出限高，定性能力差，

7

GC-MS法前处理过程繁琐，检测时间长，因此，我们选择更为简单快捷的液

相色谱-串联质谱法来建立方法。方法确定过程总体分为样品提取、样品净化

和样品检测三个部分，并对具体实验条件进行优化。

4.1样品提取溶剂和净化方式的确定

4.1.1提取溶剂的确定

硝基咪唑类药物是一类具有硝基咪唑环结构的药物，易溶于乙酸乙酯、丙

酮、三氯甲烷等有机试剂，溶于甲醇、乙腈，微溶于水。在常温下稳定，与强

氧化剂不相容。根据其物理化学性质可知，该类物质为极性化合物，因此我们

选取基质较为复杂的猪用配合饲料2g，添加硝基咪唑类药物混合标准溶液，

使15种药物的添加浓度均为10.0μg/kg，分别用乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、

乙腈、甲醇作为溶剂进行提取，净化后上机测定，计算其回收率，结果见下表

1。

表1某猪用配合饲料各溶剂的提取情况

回收率（%）乙酸乙酯丙酮三氯甲烷乙腈甲醇

4-硝基咪唑85.786.389.674.650.4

2-甲硝咪唑91.585.990.575.158.9

地美硝唑93.484.793.560.362.4

羟甲基甲硝咪唑92.789.291.652.462.1

氯甲硝咪唑88.688.685.171.668.9

苯硝咪唑95.881.288.772.870.0

异丙硝唑90.792.586.369.574.1

甲硝唑96.893.385.964.859.8

塞克硝唑85.482.992.163.266.6

8

羟基异丙硝唑88.880.690.366.962.7

羟基甲硝唑85.984.992.574.164.8

罗硝唑91.292.184.785.965.2

卡硝唑94.693.385.284.969.2

替硝唑93.284.086.181.061.4

奥硝唑87.781.180.974.863.8

由表1中回收率结果可知，采用乙酸乙酯、丙酮和三氯甲烷作为提取液时

均获得了较好的回收率，乙腈和甲醇对硝基咪唑类药物的提取效果不佳。因此

不考虑乙腈和甲醇作为提取剂。从乙酸乙酯、丙酮和三氯甲烷的三种溶剂的回

收率可以发现，乙酸乙酯和三氯甲烷的回收效果优于丙酮，乙酸乙酯和三氯甲

烷的提取效果相差不大，但三氯甲烷毒性大，对人体皮肤的伤害性大，综合考

虑下，采用乙酸乙酯作为提取溶剂效果最好。

另外分别选用猪用复合预混料、猪用配合料和鸡用浓缩料各2.0g，添加

成浓度为10.0μg/kg，考察乙酸乙酯在不同基质样品下的提取效率，结果见下

表2。

表2不同样品中乙酸乙酯的提取情况

回收率（%）猪用复合预混料猪用配合料鸡用浓缩料

4-硝基咪唑89.187.486.3

2-甲硝咪唑91.085.587.1

地美硝唑92.596.394.0

羟甲基甲硝咪唑93.394.195.8

氯甲硝咪唑91.690.889.4

苯硝咪唑93.695.994.2

9

异丙硝唑87.780.685.4

甲硝唑89.487.686.9

塞克硝唑87.990.691.5

羟基异丙硝唑94.896.892.5

羟基甲硝唑94.695.492.6

罗硝唑98.796.290.6

卡硝唑94.792.691.7

替硝唑90.894.892.7

奥硝唑92.596.393.6

从表2中的回收率可以看出，不同的基质样品中，乙酸乙酯都有良好的回

收效果，因此最终选择乙酸乙酯作为提取溶剂。

考虑到饲料样品粉碎后颗粒较细，容易粘连，因此前处理时先将样品涡旋

1min，然后考察了超声提取时间对样品中硝基咪唑类药物的回收率情况，分别

测试了10min、15min、20min、25min和30min，试验结果表明，超声时间为

10min时，回收率均能达到80%以上，超声时间>10min，回收率无显著增加，

为提高检测效率，节约操作时间，最终将样品提取时间定为每次提取10min。

考察了提取次数分别为1次、2次、3次时对结果的影响，提取1次时，回收

率虽然能够达到80%以上，但重复性较差，提取次数为2次时，回收率高，且

样品重复性变好，提取次数为3次时，回收率无显著变化，因此提取次数选择

2次。考察了每次提取液体积分别为10mL、20mL、30mL、40mL时样品的

回收率测试情况，当每次提取液体积为10mL时，回收率高且稳定，提取体

积>10mL时，由于提取体积变大，目标物的浓度被稀释，峰面积减小，同时

造成了提取液的浪费。因此试验最终选择每次提取液体积为10mL。

10

考察了氮吹温度对检测结果的影响，分别考察了35℃、40℃、45℃、50℃

氮吹结果，结果表明当氮吹温度>40℃时，回收率有所下降，因此选择氮吹温

度为40℃；考察了氮吹后残渣的溶解液，考虑到固相萃取柱的承载情况，分

别测试了10%甲醇溶液、0.2%甲酸水溶液、水作为复溶液，结果表明10%甲

醇溶液和纯水作为复溶液时，回收率偏低，原因是低比例的甲醇减小了硝基咪

唑类药物在柱上的保留，而纯水对硝基咪唑类药物的溶解度低，无法完全溶解

残渣，0.2%甲酸溶液溶解效果优于纯水，因此选择0.2%甲酸溶液作为复溶液；

另外考虑到配合料、浓缩料等样品中脂肪含量较高，因此在SPE净化前，先

通过液液萃取方式去除复溶液中的脂肪，因此向复溶液中加入3mL正己烷，

涡旋萃取后，弃去正己烷层。

综合以上，最终确定样品提取过程为：称取试样（配合饲料、浓缩饲料，

复合预混合饲料、精料补充料）2g，置于50mL离心管中，准确加入乙酸乙酯

10mL，涡旋1min，在超声提取仪上超声提取10min，超声后取出冷却至室温，

于8000r/min离心5min，上清液转入另一离心管中，残渣用乙酸乙酯10mL重

复提取一次，合并提取液，在40℃下氮吹至干，加入3.0mL0.2%甲酸溶液溶

解，再加入3mL正己烷，涡旋1min，弃去上层正己烷，下层溶液待净化。

4.1.2样品净化条件的确定

饲料产品基质复杂，除含有各种植物性色素外，生产时往往还会添加各

类维生素、矿物质、氨基酸、酶制剂、微生态制剂等。如果对样品的提取液不

加以净化处理，可能会对检测仪器造成干扰和污染，这将极大影响检测结果的

准确性，因此实验中选择适当的净化方法是十分必要的。

目前实验室常用的净化方法是选用固相萃取技术，利用固相萃柱对待测

物或样品中杂质选择性吸收，从而达到净化的目的。

分别考察了MCX固相萃取柱、C18固相萃取柱、HLB固相萃取柱对样

品提取液的净化情况，选取基质复杂的某鸡用配合饲料2g，经乙酸乙酯提取

11

后，分别用MCX固相萃取柱、C18固相萃取柱、HLB固相萃取柱净化后，上

机测定，具体特征离子色谱图见下图1、2、3、4所示。

图1未净化样品总离子流图

图2HLB固相萃取柱净化总离子流图

图3MCX固相萃取柱净化总离子流图

图4C18固相萃取柱净化总离子流图

从图1-图4可以看出，三种填料的固相萃取柱均能达到一定的净化效果，

MCX固相萃取柱的净化效果要优于另外两种固相萃取柱。为进一步验证三种

固相萃取柱的回收率效果，选取该鸡用配合饲料2g进行加标回收实验，15种

硝基咪唑类药物添加浓度均为10.0μg/kg，经提取、氮吹、复溶、萃取后，分

12

别选用了相同厂家、相同规格的三种不同填料的固相萃取小柱对样液进行净

化，所得回收率结果见表3。

表3不同填料的固相萃取柱回收率结果情况

回收率（%）MCXC18HLB

4-硝基咪唑90.154.174.1

2-甲硝咪唑90.438.952.4

地美硝唑93.656.965.1

羟甲基甲硝咪唑94.858.462.3

氯甲硝咪唑89.647.266.6

苯硝咪唑92.443.647.2

异丙硝唑90.542.953.3

甲硝唑87.033.348.6

塞克硝唑88.337.942.1

羟基异丙硝唑92.854.863.6

羟基甲硝唑94.555.962.1

罗硝唑96.656.473.3

卡硝唑92.552.178.9

替硝唑94.368.754.3

奥硝唑97.162.162.9

从表3可以看出，MCX柱回收率在87.0%以上，C18柱回收率在68.7%

以下，HLB柱回收率在78.9%以下。三种固相萃取柱的提取效果为：MCX固

相萃取柱>HLB固相萃取柱>C18固相萃取柱，因此选用MCX固相萃取柱净化。

为进一步验证MCX固相萃取柱对不同饲料样品的净化效果，我们选取预

混料、配合料、浓缩料（添加浓度为10.0μg/kg）比较其提取液未净化和净化

后的回收率情况，结果见表3。

表4样品提取液净化与未净化回收率结果情况

预混料配合饲料浓缩饲料

回收率（%）

未净化净化未净化净化未净化净化

13

4-硝基咪唑90.592.487.492.588.694.7

2-甲硝咪唑84.587.581.686.484.591.0

地美硝唑85.491.684.785.982.493.7

羟甲基甲硝咪唑86.290.787.489.288.688.4

氯甲硝咪唑84.686.581.082.684.789.5

苯硝咪唑85.684.786.992.681.592.9

异丙硝唑79.586.984.395.185.689.5

甲硝唑88.496.582.490.884.788.5

塞克硝唑84.192.587.396.084.894.1

羟基异丙硝唑85.292.684.791.092.396.8

羟基甲硝唑82.190.687.488.581.492.6

罗硝唑80.391.485.492.590.496.5

卡硝唑87.495.688.996.492.493.7

替硝唑85.496.384.796.982.589.7

奥硝唑84.392.586.487.486.392.9

由表3可以看出，预混料中未净化样品回收率在80.3~90.5%，净化后的

样品回收率在84.7~96.5%，配合饲料中未净化样品回收率在81.0~88.9%，净

化后的样品回收率在82.6~96.9%，浓缩饲料中未净化样品回收率在

81.4~92.4%，净化后样品回收率为88.4~96.8%。三种不同基质的饲料中，使用

MCX固相萃取柱净化后的样品，回收率比未净化的样品均有显著提高。

4.1.3不同规格的固相萃取柱对结果的影响

称取某配合饲料2g，添加浓度为10.0μg/kg，按照前处理过程获得提取液

后，分别使用规格为60mg/3mL、200mg/6mL、500mg/6mL的MCX固相萃取

柱净化，每组做2个平行，上机测定计算每组回收率，结果见表5。

表5不同规格固相萃取柱对结果的影响

回收率（%）MCX60mg/3mLMCX200mg/6mLMCX500mg/6mL

4-硝基咪唑195.492.693.6

14

294.893.794.1

191.092.592.3

2-甲硝咪唑

291.992.493.0

187.788.584.3

地美硝唑

289.586.483.2

羟甲基甲硝189.588.584.2

咪唑290.685.485.9

196.594.798.2

氯甲硝咪唑

295.694.896.3

189.485.788.9

苯硝咪唑

288.286.984.2

185.487.486.3

异丙硝唑

286.985.786.4

192.490.294.7

甲硝唑

293.592.791.8

194.892.596.3

塞克硝唑

295.592.493.9

羟基异丙硝192.894.193.2

唑297.488.594.2

184.788.684.7

羟基甲硝唑

285.782.684.0

191.292.593.6

罗硝唑

294.795.291.5

192.090.894.7

卡硝唑

293.691.492.2

192.591.894.1

替硝唑

296.594.192.7

187.991.294.6

奥硝唑

290.892.193.3

15

通过以上试验数据可以看出，三种规格的MCX固相萃取柱均能够得到很

好的回收效果，考虑到成本及填料的浪费，以及柱容量的承载情况，选择

200mg/6mL的MCX固相萃取柱作为净化材料。综合4.2及4.3的试验情况，

净化过程最终确定为：MCX固相萃取柱先依次使用3mL甲醇、3mL水活化，

将上述提取液全部转移至柱中，使其流速不大于1mL/min通过固相萃取柱后，

用3mL水淋洗，抽干3min，加入3mL5%氨化甲醇溶液洗脱，在40℃下氮吹

至干，加入1mL乙腈，涡旋混合1min，过0.22μm针头过滤器后上机测定。

4.2仪器条件的确定

4.2.1色谱条件的确定

由于硝基咪唑类药物为极性化合物，考察了大部分文件和标准均使用

C18色谱柱，所以本方法采用最为常用的C18色谱柱进行分析。试验中分别选

用柱长50mm，内径2.1mm，粒径1.9µm和柱长100mm，内径2.1mm，粒

径1.9µm的色谱柱进行考察。试验表明柱长为50mm的色谱柱虽然有更短的

分析时间，但对塞克硝唑和羟基异丙硝唑难以达到完全分离，柱长为100mm

的色谱柱能够对两种化合物达到完全分离，最终确定柱长100mm，内径2.1

mm，粒径1.9µm的色谱柱为分析柱，15种硝基咪唑类药物二级质谱图见图5。

流动相采用有机相+水相来改善出峰情况，有机相选用乙腈，与样品溶解溶液

保持一致，减少溶剂效应的干扰；水相选用0.1%的甲酸酸水溶液，能够改善

目标物的峰型，消除峰拖尾现象，使其更加尖锐对称。在洗脱方式的选择上，

分别采用了等度洗脱和梯度洗脱两种方式，等度洗脱时，异丙硝唑、奥硝唑等

分析时间较长，通过调节乙腈比例缩短分析时间，则塞克硝唑和羟基异丙硝唑

分离效果变差，梯度洗脱时，15种药物均能得到良好的分离，且分析时间缩

短至10min，极大的压缩了分析时间。因此选择梯度洗脱方式，洗脱程序见表

6。

表6液相色谱梯度洗脱程序

16

时间（min）流速（mL/min）0.1%甲酸溶液（%）乙腈（%）

0.00.209010

1.00.209010

5.00.201090

7.00.201090

7.10.209010

100.209010

17

图515种硝基咪唑类药物二级质谱图

（由上向下分别为4-硝基咪唑、2-甲硝咪唑、地美硝唑、羟甲基甲硝咪唑、氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、

异丙硝唑、甲硝唑、塞克硝唑、羟基异丙硝唑、羟基甲硝唑、罗硝唑、奥硝唑、卡硝唑、替硝唑）

通过对柱温、进样量以及质谱条件的不断优化，最终确定出最佳的分析条

件，试验所用质谱条件，化合物定性、定量离子对及碰撞能量参考值如下。

4.2.2质谱条件的确定

本标准所使用仪器为ThermoTSQQuantiva型液质联用仪，根据仪器精密

度及化合物结构等情况，最终确定质谱条件为：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯气体及其他合适气体，调节各气

体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；

18

c)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应优化至最佳灵敏度；

d)定性离子对、定量离子对及对应的保留时间、锥孔电压和碰撞能量。

本实验采用赛默飞TSQQuantiva液质联用仪，经各参数优化后其条件如

下：

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应监测；

毛细管电压、碰撞能量等参数应优化至最佳灵敏度；

定性、定量离子对及碰撞能量等参数见表7。

表715种硝基咪唑类药物定性、定量离子对及碰撞能量的参考值

定性离子对定量离子对碰撞能量

被测物名称

m/zm/zV

114.1>68.117

4-硝基咪唑114.1>68.1

114.1>97.116

128.1>42.231

2-甲硝咪唑128.1>42.2

128.1>82.117

142.1>81.125

地美硝唑142.1>81.1

142.1>96.115

158.1>55.217

羟甲基甲硝咪唑158.1>55.2

158.1>140.116

162.1>116.117

氯甲硝咪唑162.1>116.1

162.1>145.115

164.1>91.135

苯硝咪唑164.1>91.1

164.1>118.120

170.1>109.124

异丙硝唑170.1>109.1

170.1>124.117

172.1>82.124

甲硝唑172.1>82.1

172.1>128.114

塞克硝唑186.1>128.1186.1>128.113

19

186.1>168.110

186.1>128.113

羟基异丙硝唑186.1>128.1

186.1>168.110

188.1>123.111

羟基甲硝唑188.1>123.1

188.1>126.116

201.1>110.116

罗硝唑201.1>110.1

201.1>140.110

220.1>82.127

奥硝唑220.1>82.1

220.1>128.115

245.1>75.129

卡硝唑245.1>75.1

245.1>118.110

248.1>121.115

替硝唑248.1>121.1

248.1>128.120

4.3抗干扰试验

经实验，未找到与15种目标物相似的干扰物。

4.4标准溶液有效期的确定

为确保检测方法的准确性，依据硝基咪唑类药物的理化性质，对其标准溶

液稳定性进行验证，分别在0天、30天、60天、90天、120天、180天、240

天将1.00mg/mL标准储备液从冰箱取出，充分回温至室温，用乙腈逐级稀释

成100ng/mL工作液，用LC-MS/MS分析。对各工作液连续进样5次考察其

稳定性。当测试时间为240天时，部分化合物（如氯甲硝咪唑）溶液峰面积偏

离初始数据（0天）超过5%，因此为保证标准溶液稳定性，减少测试误差，

并参照GB/T27404-2008中的“标准溶液参考有效期”的要求，最终确定在-20℃

保存条件下，1.00mg/mL标准储备溶液有效期确定为6个月；100.0µg/mL的

标准中间液有效期确定为3个月；基质匹配标准工作溶液临用现配。

化合物测试时间（d）峰面积

4-硝基咪唑0天452478

20

30天451365

60天452781

90天456281

120天456251

180天447819

240天435124

0天665147

30天665210

60天658791

2-甲硝咪唑90天656616

120天654728

180天649718

240天621574

0天335781

30天335694

60天345124

地美硝唑90天336974

120天315247

180天302145

240天295178

0天547819

30天552104

60天546259

羟甲基甲硝咪唑90天558741

120天536147

180天521871

240天509714

0天1124578

氯甲硝咪唑

30天1124306

21

60天1101471

90天1054781

120天1022021

180天995847

240天912547

0天675841

30天669458

60天669120

苯硝咪唑90天671458

120天665987

180天661214

240天663021

0天502147

30天495216

60天498521

异丙硝唑90天497152

120天485267

180天482147

240天483216

0天914781

30天920504

60天920174

甲硝唑90天915874

120天902515

180天901254

240天895471

0天886514

塞克硝唑30天842571

60天862514

22