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T/CVMA248—2025牛病毒性腹泻病毒阻断磁微粒CLIA抗体检测方法Blockingmagneticparticlebasedchemiluminescenceimmunoassayfordetectingantibodiesagainstbovineviraldiarrheavirus中国兽医协会发布I请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利艳、古丽娜尔、关团、苏贵成、迟安庆、林明梓、12规范性引用文件GB/T6682分析实验室用水NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范AE:吖啶酯（AcridiniumEster）CLIA：化学发光免疫分析法（ChemiluminescenceImmuRLU:相对光单位（RelativeLightUnit）发光底物，读取RLU。依据样本RLU与标准品RLU的对比，判定结果。发光强度与牛病毒性腹泻病毒26.4抗原工作液，含有生物素标记的BVDV重组蛋白的溶液。按照B.2配制。6.5AE抗体工作液，含有吖啶酯标记的BVDV单克隆抗体的溶液。按照B.3配制。围为140U~260U，按照附录D制备。7.2电子天平，最大称量：Max=28检测前准备离心（1000g离心10min~15min）分离出血清。采集的血清样品在无法于12h内送检的情况下，样品检测前3000r/min离心2min，取上清放于1.5mL尖底离心管中，体积应大于300μL39.3第一次免疫反应9.5第二次免疫反应将BVDV抗体工作校准品1~6放入样本架，按照），4a——当x趋近于负无穷时Y的极限值；d——当x趋近于正无穷时Y的极限值。5A.120×浓缩洗液配制Na2HPO4NaH2PO45.92gNaClA.2校准品稀释液配制KH2PO4·2H2O26399-70-2Na2HPO4·12H2O2.9gNaClKCl0.5mLA.3PBS配制KH2PO4·2H2O26399-70-2Na2HPO4·12H2O2.9gNaClKCl6A.510%甘氨酸溶液称取100g甘氨酸（C2H7NO2，CAS号：567制备前，取1mgBiotin平衡至室温后加入180μL超纯水，溶解混匀后，加入处理好的BVDV重组蛋白13.5mg，充分混匀后室温静置60min。向超滤管中加入上述偶联液，PBS补齐至管顶的白线，12000充分混匀，室温静置60min。按照总体积1%的比例添加10%甘氨酸，充分混止反应。向超滤管中加入上述偶联液，PBS补齐至管顶的白线，12000液，PBS洗三次，回收偶联液。按85%的回收率计算质量。要求浓缩后的浓度在2mg/mL~489BVDV抗体质控品制备取C.1所制备的BVDV高免血清，用校准

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