第4章 病理组织制片技术

病理检验技术

病理组织制片技术高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节

组织取材01第二节

组织的固定02第三节

组织脱钙03第四节

组织洗涤、脱水、透明04第五节

浸蜡和包埋05第六节

组织切片06学习目标知识目标能力目标素质目标1．掌握制片的种类；石蜡和冷冻切片的制片程序；组织固定的常用方法和注意事项；组织脱水、透明、浸蜡、包埋；常规石蜡和冷冻切片的制作。2．熟悉常用固定液的性质、作用和种类；切片机的使用、注意事项和维护；快速石蜡切片的制作。3．了解组织固定的目的和意义；组织的洗涤。1．能进行常用固定液的配制和应用。2．能熟练进行病理组织制片技术常规操作。1．培养严格遵守操作规程、规范操作的职业精神。2．培养严谨认真的工作态度、一丝不苟的工作作风。第一节

组织取材一、取材的配合

病理检验技术人员取材时的职责是：配合病理医师对病变组织进行肉眼检查，准确记录病理医生检查时描述的病理改变，按照病理检验的需要，选择和确定取材的部位和块数。病理检验技术人员要及时对切取的组织进行编号或标记，并在病理送检单上做好记录，以便病理医师镜检时核对。取材后的标本应加足固定液，按编号存放，以备复查之用。二、取材的注意事项1．组织块大小适当

大小以（1.0～1.5）cm×（1.0～1.5）cm为宜。2．标本必须新鲜，及时取材。3．避免组织结构变形。4．确定取材部位原则上凡是可疑处均应取材。5．充分暴露病灶。．二、取材的注意事项6．标明包埋方向对包埋面有特殊要求时，需做记号标明。7．染色、包裹小标本。8．清除多余组织。9．重复取材（补取）。10．认真核对取材前应核对病理送检单上填写的标本是否与收到的标本相符。．第二节

组织的

固

定一、组织固定的目的和意义

（一）组织固定的目的1．破坏溶酶体酶，防止细胞自溶。2．防止细菌的腐蚀。3．凝固或沉淀细胞内物质。4．硬化组织，便于制片。5.增加组织的折射率。一、组织固定的目的和意义

（二）组织固定的意义凡需进行病理检验的各种组织均需要固定。因为细胞死亡后，如不及时固定，细胞在溶酶体的作用下会溶解破坏，组织细胞结构难以保持。若有细菌繁殖则会引起组织腐败。用于免疫组织化学染色的标本，固定则是为了保存组织细胞内的抗原性，使抗原物质不发生弥散和丧失。二、组织固定的常用方法

1．浸泡固定法

2．注射、灌注固定法

3．微波固定法

4．蒸汽固定法三、固定液的性质和种类

理想的固定液，应具备以下特性。

1．渗透性强固定液必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能尽快地被固定在原位置，而不致弥散。

2．组织在固定液的作用下，不应发生过度收缩和膨胀现象。

3．使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的折射率。

4．固定液同时也是一种较好的保存液。三、固定液的性质和种类

（一）单纯固定液是指由单一化学物质组成的固定液。此类固定液包括：甲醛、乙醇、乙酸、重铬酸钾、苦味酸、氯化汞、锇酸、铬酸、丙酮等。（二）混合固定液

指由多种化学物质混合组成的固定液。实际工作中多使用混合固定液，其固定效果明显优于单纯固定液。四、组织固定过程中的注意事项

1．及时固定标本应新鲜，取材要及时，取材后立即将组织块放入固定液中。

2．固定标本新鲜容器要足够大。

3．固定液应足量。4．防止组织变形。

5．确定恰当的固定时间。6.固定标本瓶或胶袋必须贴有该患者姓名、性别、年龄等资料的标签。五、固定后水洗

组织经彻底固定后，在转入脱水之前，要进行一定时间的流水冲洗，目的是洗去过多的固定液和尽可能消除组织与固定液作用所生成的分解产物，避免污染组织，延长脱水剂的使用期。第三节

组织脱

钙一、组织脱钙的方法

（一）酸类脱钙常用的酸类脱钙剂有硝酸、盐酸、甲酸、混合甲酸盐酸脱钙液。（二）电解脱钙（三）螯合剂脱钙二、组织脱钙后的处理1．脱钙后的组织须经流水冲洗半小时至数小时。2．修去锯面的薄层组织，切成适当大小的组织块，进行常规脱水、透明等处理。3．用酸性液脱钙后的组织，苏木精染色时间应适当延长，伊红染色时间应稍缩短，可使染色达到较好的对比度。第四节

组织洗涤、脱水、透明一、组织洗涤组织经固定处理后，用水或乙醇等将未与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉的过程，称为洗涤。目的是为了去掉未与组织结合的固定液及沉淀物。洗涤方法：1．含水固定液的洗涤方法

常用的含水固定液是甲醛溶液，用流水冲洗即可。2．含乙醇固定液的洗涤方法用乙醇或乙醇混合液固定的组织，一般不需要洗涤。3．特殊固定液的洗涤方法使用的固定液不同，洗涤的方法也不一样。二、组织脱水用某些能与水相混合的化学试剂将组织内的水分置换出来的过程称为脱水。所使用的化学试剂称为脱水剂。脱水剂种类：（一）单纯脱水剂1．乙醇最常用的脱水剂，脱水时应先从低浓度开始，逐步递增浓度。2．丙酮

可用于染色前后的脱水，一般很少单纯使用。3．异丙醇是乙醇的良好代用品，不含水，可替代无水乙醇。二、组织脱水（二）脱水剂兼透明剂1．正丁醇

一般用法是：组织经固定及水洗后，依次移入50%、70%、80%乙醇中脱水，然后移入正丁醇处理12～24小时。2．叔丁醇

是一种使用较广的脱水剂。3．环己酮

三、组织透明（一）常用的透明剂1．二甲苯最常用的一种透明剂。2．苯和甲苯苯适用于致密结缔组织、肌肉及腺体等组织的透明。甲苯多用于切片染色后的透明。

3．三氯甲烷4．香柏油5．冬青油常用透明方法将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，置换透明剂2～3次即能达到透明目的。第五节

浸

蜡

和

包

埋一、组织浸蜡经过透明的组织块在熔化的石蜡中浸渍，使组织中的透明剂被完全置换出来的过程，称为浸蜡（透蜡），用于浸蜡的石蜡被称为浸透剂。浸蜡的目的是用石蜡去置换、替代组织中的透明剂，使组织具有一定的硬度，有利于切片。常用的浸蜡剂有石蜡、碳蜡(聚乙二醇)、火棉胶、明胶、环氧树脂等。二、组织包埋组织块经过浸透剂浸透后，埋入石蜡或其他包埋剂包成一定形态，使其具有一定的硬度和韧度，便于在切片机上夹持和切成薄片的过程，称为包埋。用于包埋的物质分水溶性（如碳蜡、明胶等）和非水溶性（如石蜡、火棉胶等）两类。（一）石蜡包埋法

最常用1．常规石蜡包埋2．快速石蜡包埋法3．胃镜标本的包埋4．体液标本的包埋（二）蜡半薄切片包埋法第六节

组

织

切

片一、切片机具（一）切片机1．按结构分类根据结构的不同，切片机可分为轮转式（转动式）、滑动式、推动式（雪撬式）、摇动式、振动式及冷冻式等。2．按用途分类根据用途的不同，切片机可分为石蜡切片机、火棉胶切片机及冷冻切片机等。（二）切片刀二、石蜡包埋组织切片、摊片、贴片和烤片（一）切片前的准备1．蜡块准备。2．切片用品准备。（二）石蜡切片制作过程将切片刀安装于切片机刀架上，调整好刀的角度→将修整好的蜡块固定于切片机组织块夹具上→调整组织块夹具的调节螺旋，使蜡块切面与刀口平行→粗切蜡块→切片→摊片→贴片→烤片（三）注意事项（四）切片中常出现的问题及对策三、冷冻切片（一）切片前的准备1．蜡块准备。2．切片用品准备。（二）石蜡切片制作过程将切片刀安装于切片机刀架上，调整好刀的角度→将修整好的蜡块固定于切片机组织块夹具上→调整组织块夹具的调节螺