病理检验技术 课件 第1-6章 绪论、病理科的布局和基本配置 - 病理组织切片常用特殊染色

病理检验技术

绪论目

录第一节病理检验技术的意义和任务01第二节病理检验技术人员的常规工作02第三节病理检验技术人员的职业道德03学习目标掌握熟悉了解病理检验技术员的常规工作病理检验技术员的职业道德病理检验技术发展简史及新进展第一节

病理检验技术的意义和任务一、病理检验技术的意义

在病理学临床及科学研究工作中使用的各种技术，统称病理学技术。病理检验技术属于病理学技术的范畴，为临床病理学检验提供技术。熟练掌握病理检验技术，是做好病理学工作的前提和基础。二、病理检验技术的任务1.明确疾病的诊断2.为临床选择治疗方案提供依据3.为判断预后提供参考4.了解疾病的发展及分析疗效5.为科学研究积累资料6.为提高临床诊疗水平服务三、病理检验的分类和基本项目（一）组织学检验（二）细胞学检验（三）尸体剖检三、病理检验的分类和基本项目（一）组织学检验1.活体组织检验/活检2.手术标本检验3.手术中病理检验冷冻切片技术应用最多三、病理检验的分类和基本项目（二）细胞学检验具有损伤小，操作简便，经济、快速、安全等优点。适合大规模的社区普查，具有初筛检查作用。三、病理检验的分类和基本项目（三）尸体剖检/尸检意义：①明确诊断，查明死因，帮助临床医师总结经验，提高医疗技术水平。②及时发现和诊断传染病、地方病和新病种，为疾病的预防、诊治、护理提供理论依据。③明确医疗纠纷中的责任。④为法官办案提供依据。⑤收集病理标本，供教学、科研使用。第二节

病理检验技术人员的常规工作病理检验技术人员的常规工作一、病理标本及病理报告的收发工作二、协助病理标本的取材和尸体剖检工作三、组织学切片和细胞学制片工作四、病理资料的管理和检索工作五、药品、物资、仪器设备的管理和维护工作六、病理大体标本的收集和制作工作病理检验技术人员的常规工作一、病理标本及病理报告的收发工作（一）送检申请单和标本的收检（二）送检申请单和标本的编号及登记（三）标本固定前的预处理和固定（四）登记和送交病理报告单病理检验技术人员的常规工作一、病理标本及病理报告的收发工作（一）送检申请单和标本的收检1.收验送检申请单时应注意的事项（1）认真仔细检查送检申请单上要求填写的项目是否填写完整、清晰。包括：①病人的基本情况②临床情况③病人的联系方式，以便必要时进行联络，并有助于随访工作。（2）验收人员不得对送检申请单中由临床医师填写的各项内容进行改动。病理检验技术人员的常规工作一、病理标本及病理报告的收发工作（二）送检申请单和标本的编号及登记有以下情况的送检申请单和标本不予以接收（1）送检申请单与相关标本未同时送达病理科。（2）送检申请单中填写的内容与送检标本不符合。（3）标本上无病人姓名、送检单位及科室、送检部位等标记。（4）送检申请单内填写的字迹潦草不清。病理检验技术人员的常规工作一、病理标本及病理报告的收发工作（二）送检申请单和标本的编号及登记有以下情况的送检申请单和标本不予以接收（5）申请单中漏填重要项目。（6）标本严重自溶、腐败、干涸等。（7）标本过小，不能或难以制作切片。（8）其他可能影响病理检查可行性和诊断准确性的情况。对于病理科不能接收的申请单和标本一律当即退回，不予存放。病理检验技术人员的常规工作一、病理标本及病理报告的收发工作（二）送检申请单和标本的编号及登记活体组织检查标本：编号以“外”或“S”为字首编号。体液检查标本：编号以“液”或“F”为字首编号。实验动物标本：编号以“动”或“E”为字首编号。尸体解剖标本：编号以“尸”或“A”为字首编号。第三节

病理检验技术人员的职业道德病理检验技术人员必须具备的业务素质一、一丝不苟的工作态度二、严谨求实的工作作风三、勇于创新的工作精神谢谢观看

病理检验技术

病理科的基本配置高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节病理科的布局01第二节病理科的基本配置020304学习目标掌握熟悉了解病理检验室的基本仪器设备及应用。病理检验室的设置。病理检验室特殊设备及应用。第一节

病理科的布局病理科的布局

一、污染区二、半污染区三、清洁区病理科的布局

一、污染区1.标本接收室2.标本检查室3.标本存放室4.快速冷冻切片室5.细胞学制片室6.尸体解剖室病理科的布局

二、半污染区1.常规技术室2.免疫组织化学室3.分子病理检测室病理科的布局

三、清洁区1.病理诊断室2.病理档案室3.标本陈列室配备4.独立的淋浴间第二节

病理科的基本配置病理科的基本配置

一、病理科的常用仪器设备二、病理科的特殊设备三、病理科的人员配备和岗位设置病理科的基本配置

一、病理科的常用仪器设备1.基本仪器设备切片机—最常用石蜡切片机、冷冻切片机2.玻璃器具3.免疫组织化学常用设备4.常用器械和工具5.其他病理科的基本配置

一、病理科的常用仪器设备1.基本仪器设备切片机病理科的基本配置

一、病理科的常用仪器设备病理切片染色最常用的染色方法——HE染色法是组织学和病理学最广泛应用的基本染色法，又称常规染色法。病理科的基本配置

二、病理科的特殊设备1.电子显微镜透射性电子显微镜、扫描式电子显微镜2.超薄切片机3.远程会诊系统4.多聚酶链式反应（PCR）仪病理科的基本配置

三、病理科的人员配备和岗位设置1.病理医师

负责病理标本的取材、病理诊断和出具报告等工作。2.病理技术人员

负责常规病理技术工作3.辅助人员谢谢观看病理检验技术

病理大体标本制作技术高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节病理大体标本的一般处理01第二节病理大体标本的原色保存02第三节病理大体标本的裱装和封存03学习目标知识目标能力目标素质目标1.掌握病理大体标本的制作方法。2.熟悉有机玻璃标本缸的制作。3.了解病理大体标本制作的意义。1.能够根据不同需求进行标本处理和保存，确保标本质量和完整性。2.通过不断实践和探索，提高技术水平，为病理学研究和临床诊断提供可靠的依据。具备良好的团队协作精神和技术交流能力，能够与其他专业人员合作完成大体标本的制作和鉴别任务。具备严谨的科学态度和工作作风，能够保证制作出的病理大体标本的真实性和准确性。第一节

病理大体标本的一般处理一、病理大体标本的收集（一）尸体剖检（二）外科手术（三）动物实验子宫平滑肌瘤二、病理大体标本的固定前处理病理大体标本收集后应仔细处理，修掉多余组织，确保切面平整。保持器官完整性的同时，突显病变特征。切割时保持力度均匀，避免拉锯式动作。选取后立即保存在固定液中，防止组织干燥。不同组织和器官固定前需适当预处理。二、病理大体标本的固定前处理实质性器官固定：使用长刀切开器官，确保刀锋利和切面平整。固定液渗透前垫一层薄脱脂棉或纱布。保存完整脏器时，先灌注固定液再浸泡。空腔脏器固定：修剪掉多余脂肪，剪开器官并用大头针固定于木板上。对于其他空腔器官，可填充脱脂棉后固定。脑固定：冲洗血管内血液后灌入固定液。可使用丝线固定脑组织，或切片固定。病变位于脑内时，先切片再固定。二、病理大体标本的固定前处理4.心脏固定：表面病变灌注整体固定，其他情况剪开并固定。5.肺固定：根据病变位置切开并固定，覆盖脱脂棉或纱布。6.肾固定：切除标本后检查并修整，置于固定液中。7.骨组织固定：剖开显示肿瘤与骨组织关系，剖开肿瘤及软组织后锯开骨。修整后可浇灌明胶水溶液。固定时间约2-5周。三、病理大体标本的固定与保存固定病理大体标本时，应选择适当的容器，固定液要充足，一般为标本体积的10倍。组织良好的固定是病理大体标本制作的关键，病理大体标本的固定与保存以甲醛溶液最常用。固定顺序是先配制固定液，再放入标本。常用的固定液是甲醛溶液，浓度一般为37%～40%。常用的固定液是10%福尔马林液，也可以配成中性缓冲4%的甲醛。固定时间一般为5～10天，具体根据标本大小而定。固定后用自来水冲洗12～24小时，然后放入保存液中保存。用福尔马林液固定和保存标本简便可靠又经济实用，但不能保留标本的原有颜色，如需原色保存需要特殊处理。第二节

病理大体标本的原色保存常用原色标本的固定与保存方法、凯氏(Kaiserling)法、凯氏(Kaiserling)改良法、Pulvertaft法、柯氏(Klotz)法、凯氏(Kaiserling)法[操作步骤]大体标本→取材修整→生理盐水冲洗→第一液（固定液）中3～7天→流水冲洗12～24小时→再修整→第二液（回色液）中1～3小时→颜色恢复→纱布吸干标本表面液体→第三液（保存液）浸泡保存。[试剂配制]第一液（固定液）40%甲醛溶液100mL、醋酸钾50g，加蒸馏水至1000mL。第二液（混合液）甘油300mL、醋酸钾100g、40%甲醛溶液5mL，加蒸馏水至1000mL。第三液（保存液）甘油200mL、醋酸钾100g、麝香草酚2.5g，加蒸馏水至1000mL。二、凯氏(Kaiserling)改良法[操作步骤]大体标本→取材修整→生理盐水冲洗→第一液（固定液）中3～7天→流水冲洗12～24小时→再修整→第二液（回色液）中1～3小时→颜色恢复→纱布吸干标本表面液体→第三液（保存液）浸泡保存。[试剂配制]第一液(固定液）40%甲醛100ml,醋酸钾（钠）50g，蒸馏水加全1000mlo第二液（回色液）95%乙醇或甲醇1000mlo第三液（保存液）氯化钠300g,醋酸钟（钠)50g，蒸馏水加至1000ml。第三液配制好后,溶液如有混浊，可加适量的活性炭吸附，过滤后使用。三、Pulvertaft法[操作步骤]大体标本→取材修整→10%福尔马林生理盐水固定12～24小时→第一液（固定液）中固定3～7天→流水冲洗12～24小时→再修整→95%乙醇回色1～3小时→颜色恢复→纱布吸干标本表面液体→第二液（混合液）浸泡保存。[试剂配制]第一液（固定液）40%甲醛溶液100mL、醋酸钾50g，加蒸馏水至1000mL。第二液（混合液）甘油300mL、醋酸钾100g、40%甲醛溶液5mL，加蒸馏水至1000mL。四、柯氏(Klotz）法[操作步骤]大体标本→取材修整→柯氏第一液（固定液）中固定3～7天→流水冲洗12～24小时→再修整→柯氏第二液中保存→>4～6周后→更换柯氏第二液浸泡保存。[试剂配制]人工卡巴盐硫酸钠22g、碳酸氢钠20g、氯化钠18g、硝酸钾38g、硫酸钾2g。柯氏第一液人工卡巴盐1750g、水合氯醛1750g、浓甲酸1750mL，加水35000mL。柯氏第二液人工卡巴盐850g、水合氯醛350g、浓甲酸175mL，加水35000mL。第三节

病理大体标本的裱装和封存、玻璃标本缸标本的裱装与封存方法（一）标本的修整（二）标本支架的制作（三）标本的装缸（四）封口标本装缸前,需要修掉多余组织，可先浸泡于水中修去表面细小组织，然后浸蜡固定在标本上或贴在标本缸外。标本缸的选择：选择适宜大小和形状的标本缸，一般上下和左右应各留出2～3cm的空间。、玻璃标本缸标本的裱装与封存方法（一）标本的修整（二）标本支架的制作（三）标本的装缸（四）封口制作玻璃棒支架时，选择合适粗细的玻璃棒，根据标本缸内径进行烧制，并用白线固定标本。制作有机玻璃支架时，根据标本缸内径确定有机玻璃支架的尺寸，可以用有机玻璃条或有机玻璃板来固定标本。制作塑料管支架时，选择白色或无色塑料管，插入钢丝并加热封闭两端，制成与玻璃棒支架相似的形状后固定标本。、玻璃标本缸标本的裱装与封存方法（一）标本的修整（二）标本支架的制作（三）标本的装缸（四）封口将固定于支架上的标本清洗后放入标本缸内，加入适量的清水，观察标本各方位，倒掉水，加入保存液至标本缸口0.5～1.5cm，加盖封存。对于做原色保存或染色的标本，直接装缸后加入保存液封存。、玻璃标本缸标本的裱装与封存方法（一）标本的修整（二）标本支架的制作（三）标本的装缸（四）封口松香蜂蜡法：按6：4比例混合松香和蜂蜡，融化后涂于标本缸口上，盖上盖并加压，用油膏刀烫平溢出的封固剂。白油漆氧化锌粉法：用白油漆和氧化锌粉调制成糊状物，涂于标本缸口上，盖上盖并加压，待封口剂干燥后搬动。二、有机玻璃标本缸的制作及标本的裱装与封存方法（一）有机玻璃标本缸的制作（二）

标本的装存材料选择：常用的无色透明有机玻璃板规格有3mm、4mm、5mm和6mm厚。大体积标本选用较厚的板材。裁锯和磨边：按一定比例计算标本缸大小，裁锯后磨平黏合处的余边，确保夹角为90°。加热成型：用电热丝加热成型，确保加热位置对准划线，用木块夹压后冷却。盖和底板的黏合：选择适当厚度的有机玻璃板，裁剪成比缸底口大1～2cm的底板，用三氯甲烷或502胶黏合。抛光：用板锉和砂纸打磨缸体四周和磨毛的部位，最后用纱布蘸牙膏擦拭或用拋光机拋光。二、有机玻璃标本缸的制作及标本的裱装与封存方法（一）有机玻璃标本缸的制作（二）

标本的装存将制好的标本装入有机玻璃标本缸注入适量保存液擦拭缸口黏合缸盖封闭小孔三、标本储存与陈列为了确保病理大体标本的长期保存，应将其储存在标本陈列室的标本陈列橱内。陈列室的环境需要保持明亮、干燥和通风，避免标本受潮、发霉或滋生细菌。要避免阳光直接照射标本，以防止标本变色或损坏。标本可以按照类别或系统进行编号，并建立完整的标本档案，提高工作效率。确保病理大体标本得到妥善保管和利用。谢谢观看病理检验技术

病理组织制片技术高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节

组织取材01第二节

组织的固定02第三节

组织脱钙03第四节

组织洗涤、脱水、透明04第五节

浸蜡和包埋05第六节

组织切片06学习目标知识目标能力目标素质目标1．掌握制片的种类；石蜡和冷冻切片的制片程序；组织固定的常用方法和注意事项；组织脱水、透明、浸蜡、包埋；常规石蜡和冷冻切片的制作。2．熟悉常用固定液的性质、作用和种类；切片机的使用、注意事项和维护；快速石蜡切片的制作。3．了解组织固定的目的和意义；组织的洗涤。1．能进行常用固定液的配制和应用。2．能熟练进行病理组织制片技术常规操作。1．培养严格遵守操作规程、规范操作的职业精神。2．培养严谨认真的工作态度、一丝不苟的工作作风。第一节

组织取材一、取材的配合

病理检验技术人员取材时的职责是：配合病理医师对病变组织进行肉眼检查，准确记录病理医生检查时描述的病理改变，按照病理检验的需要，选择和确定取材的部位和块数。病理检验技术人员要及时对切取的组织进行编号或标记，并在病理送检单上做好记录，以便病理医师镜检时核对。取材后的标本应加足固定液，按编号存放，以备复查之用。二、取材的注意事项1．组织块大小适当

大小以（1.0～1.5）cm×（1.0～1.5）cm为宜。2．标本必须新鲜，及时取材。3．避免组织结构变形。4．确定取材部位原则上凡是可疑处均应取材。5．充分暴露病灶。．二、取材的注意事项6．标明包埋方向对包埋面有特殊要求时，需做记号标明。7．染色、包裹小标本。8．清除多余组织。9．重复取材（补取）。10．认真核对取材前应核对病理送检单上填写的标本是否与收到的标本相符。．第二节

组织的

固

定一、组织固定的目的和意义

（一）组织固定的目的1．破坏溶酶体酶，防止细胞自溶。2．防止细菌的腐蚀。3．凝固或沉淀细胞内物质。4．硬化组织，便于制片。5.增加组织的折射率。一、组织固定的目的和意义

（二）组织固定的意义凡需进行病理检验的各种组织均需要固定。因为细胞死亡后，如不及时固定，细胞在溶酶体的作用下会溶解破坏，组织细胞结构难以保持。若有细菌繁殖则会引起组织腐败。用于免疫组织化学染色的标本，固定则是为了保存组织细胞内的抗原性，使抗原物质不发生弥散和丧失。二、组织固定的常用方法

1．浸泡固定法

2．注射、灌注固定法

3．微波固定法

4．蒸汽固定法三、固定液的性质和种类

理想的固定液，应具备以下特性。

1．渗透性强固定液必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能尽快地被固定在原位置，而不致弥散。

2．组织在固定液的作用下，不应发生过度收缩和膨胀现象。

3．使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的折射率。

4．固定液同时也是一种较好的保存液。三、固定液的性质和种类

（一）单纯固定液是指由单一化学物质组成的固定液。此类固定液包括：甲醛、乙醇、乙酸、重铬酸钾、苦味酸、氯化汞、锇酸、铬酸、丙酮等。（二）混合固定液

指由多种化学物质混合组成的固定液。实际工作中多使用混合固定液，其固定效果明显优于单纯固定液。四、组织固定过程中的注意事项

1．及时固定标本应新鲜，取材要及时，取材后立即将组织块放入固定液中。

2．固定标本新鲜容器要足够大。

3．固定液应足量。4．防止组织变形。

5．确定恰当的固定时间。6.固定标本瓶或胶袋必须贴有该患者姓名、性别、年龄等资料的标签。五、固定后水洗

组织经彻底固定后，在转入脱水之前，要进行一定时间的流水冲洗，目的是洗去过多的固定液和尽可能消除组织与固定液作用所生成的分解产物，避免污染组织，延长脱水剂的使用期。第三节

组织脱

钙一、组织脱钙的方法

（一）酸类脱钙常用的酸类脱钙剂有硝酸、盐酸、甲酸、混合甲酸盐酸脱钙液。（二）电解脱钙（三）螯合剂脱钙二、组织脱钙后的处理1．脱钙后的组织须经流水冲洗半小时至数小时。2．修去锯面的薄层组织，切成适当大小的组织块，进行常规脱水、透明等处理。3．用酸性液脱钙后的组织，苏木精染色时间应适当延长，伊红染色时间应稍缩短，可使染色达到较好的对比度。第四节

组织洗涤、脱水、透明一、组织洗涤组织经固定处理后，用水或乙醇等将未与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉的过程，称为洗涤。目的是为了去掉未与组织结合的固定液及沉淀物。洗涤方法：1．含水固定液的洗涤方法

常用的含水固定液是甲醛溶液，用流水冲洗即可。2．含乙醇固定液的洗涤方法用乙醇或乙醇混合液固定的组织，一般不需要洗涤。3．特殊固定液的洗涤方法使用的固定液不同，洗涤的方法也不一样。二、组织脱水用某些能与水相混合的化学试剂将组织内的水分置换出来的过程称为脱水。所使用的化学试剂称为脱水剂。脱水剂种类：（一）单纯脱水剂1．乙醇最常用的脱水剂，脱水时应先从低浓度开始，逐步递增浓度。2．丙酮

可用于染色前后的脱水，一般很少单纯使用。3．异丙醇是乙醇的良好代用品，不含水，可替代无水乙醇。二、组织脱水（二）脱水剂兼透明剂1．正丁醇

一般用法是：组织经固定及水洗后，依次移入50%、70%、80%乙醇中脱水，然后移入正丁醇处理12～24小时。2．叔丁醇

是一种使用较广的脱水剂。3．环己酮

三、组织透明（一）常用的透明剂1．二甲苯最常用的一种透明剂。2．苯和甲苯苯适用于致密结缔组织、肌肉及腺体等组织的透明。甲苯多用于切片染色后的透明。

3．三氯甲烷4．香柏油5．冬青油常用透明方法将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，置换透明剂2～3次即能达到透明目的。第五节

浸

蜡

和

包

埋一、组织浸蜡经过透明的组织块在熔化的石蜡中浸渍，使组织中的透明剂被完全置换出来的过程，称为浸蜡（透蜡），用于浸蜡的石蜡被称为浸透剂。浸蜡的目的是用石蜡去置换、替代组织中的透明剂，使组织具有一定的硬度，有利于切片。常用的浸蜡剂有石蜡、碳蜡(聚乙二醇)、火棉胶、明胶、环氧树脂等。二、组织包埋组织块经过浸透剂浸透后，埋入石蜡或其他包埋剂包成一定形态，使其具有一定的硬度和韧度，便于在切片机上夹持和切成薄片的过程，称为包埋。用于包埋的物质分水溶性（如碳蜡、明胶等）和非水溶性（如石蜡、火棉胶等）两类。（一）石蜡包埋法

最常用1．常规石蜡包埋2．快速石蜡包埋法3．胃镜标本的包埋4．体液标本的包埋（二）蜡半薄切片包埋法第六节

组

织

切

片一、切片机具（一）切片机1．按结构分类根据结构的不同，切片机可分为轮转式（转动式）、滑动式、推动式（雪撬式）、摇动式、振动式及冷冻式等。2．按用途分类根据用途的不同，切片机可分为石蜡切片机、火棉胶切片机及冷冻切片机等。（二）切片刀二、石蜡包埋组织切片、摊片、贴片和烤片（一）切片前的准备1．蜡块准备。2．切片用品准备。（二）石蜡切片制作过程将切片刀安装于切片机刀架上，调整好刀的角度→将修整好的蜡块固定于切片机组织块夹具上→调整组织块夹具的调节螺旋，使蜡块切面与刀口平行→粗切蜡块→切片→摊片→贴片→烤片（三）注意事项（四）切片中常出现的问题及对策三、冷冻切片（一）切片前的准备1．蜡块准备。2．切片用品准备。（二）石蜡切片制作过程将切片刀安装于切片机刀架上，调整好刀的角度→将修整好的蜡块固定于切片机组织块夹具上→调整组织块夹具的调节螺旋，使蜡块切面与刀口平行→粗切蜡块→切片→摊片→贴片→烤片（三）注意事项（四）切片中常出现的问题及对策四、快速石蜡切片（一）切片制作方法组织取材应薄，厚度一般不超过2mm。方法：用加热的无齿镊在预制的蜡块上熔出相应的小孔，将组织块放入其内，烫平蜡块表面，冷却硬化后即可按常规石蜡切片的方法进行切片、捞片、贴片。（二）注意事项谢谢观看

病理检验技术

病理组织切片常规染色高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节病理切片染色概述01第二节苏木精-伊红染色02学习目标知识目标能力目标素质目标

树立良好的医德医风和科学严谨的工作作风能够独立配置苏木精-伊红染色液，独立完成HE染色掌握常用染色术语的含义，掌握苏木精-伊红染色第一节

病理切片染色概述一、染色的目的

它的主要目的是增强组织中各种成分在光学显微镜下的可见性和辨识度。当病理组织标本被制作成切片后，需要通过特定的染色剂进行处理。这些染料能够选择性地与目标组织或细胞成分结合，使它们呈现出特定的色彩。这些色彩的变化不仅使组织和细胞成分更加鲜明可见，更重要的是，它们改变了组织和细胞的折射率，使得在显微镜下观察时，各种组织结构的界限更加清晰，极大地促进了我们对组织结构和病变的深入理解和准确诊断。二、染色机制

染色，作为一个将染色剂与组织细胞紧密结合的过程，其背后的反应机制显得尤为复杂，且至今科学家们仍在努力探索其完整细节。当前，学术界普遍认为，这一反应过程不仅涉及了深层次的化学作用，同时也涵盖了物理作用的参与。换句话说，组织细胞的染色效果，实际上是这两种作用共同交织、协同作用的结果。这种综合作用的机制，为我们理解和应用染色技术在医学、生物学等领域提供了重要的基础。(一)染色的物理作用1.渗透作用

组织具有许多微小的孔隙，染料通过渗透进入组织，它并非与组织牢固地结合，而是通过简单的物理过程进入。这可以被视为染料与组织之间的简单物理交互，类似于混合过程。2.吸附作用

吸附作用是指一种物质从其周围将另一种物质的分子、原子或离子集中到界面上的过程。3.吸收作用

又称溶解作用。组织吸收染料并形成牢固的结合。(二)染色的化学作用三、常用染色剂

(一)染色剂的性质染色剂又称染料，染色剂又称染料，是一类有色的无机或有机化合物。在组织学染色中常用的染料主要为含有苯环和杂环的有机化合物。

1.发色团

也称为色原，是染料分子中能够产生颜色的基团。2.助色团

助色团是染料分子中的一种基团，它能够与发色团产生电离并形成盐类，从而加深染料分子的颜色，并与被染物质分子形成亲和力。三、常用染色剂(二)染色剂的分类1.按染色剂的来源分类(1)天然染料；(2)人工合成染料；(3)无机化合物2.按染色剂的化学反应分类(1)碱性染料；(2)酸性染料；(3)中性染料3.按染料的主要用途分类(1)细胞染料；(2)组织染料四、常用染色术语1.普通染色2.特殊染色3.单一染色4.复染色5.多种染色6.直接染色、间接染色7.媒染剂、促染剂、分化剂8.异染性染色9.蓝化

五、染色方法的分类

1.按染色的手段分类2.按染色对象的成分分类3.按染色对象的种类分类

六、进行性染色与退行性染色

(一)进行性染色

进行性染色是一种逐渐加深染色的方法，从浅到深地染色组织成分，直至达到所需的染色强度为止。在这种方法中，通常使用较低浓度的染料溶液，以获得适当的染色效果。在染色过程中，需要不断在显微镜下观察样品，以控制染色的程度，避免过度染色。相比于其他方法，进行性染色不需要使用盐酸乙醇等分化剂。(二)退行性染色

退行性染色的特点是先使组织过度染色，超过所需的程度，然后再使用某些溶液（如盐酸乙醇）来去除过多的染色剂，最终达到适当的染色深度,同时使不应着色的组织细胞脱色，这个脱色步骤被称为“分化”。在分化过程中，通过显微镜下的观察来控制染色的程度是必不可少的。HE染色中用苏木精染细胞核多用退行性染色。第二节

苏木精-伊红染色苏木精(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色，简称HE染色，是组织学、病理学最广泛应用的基本染色方法，也被称为常规染色。HE染色主要用于显示各种组织和病变的一般形态结构，可以进行全面的观察。因此，在病理诊断、教学和科研方面都具有重要的价值。一、染色的原理

(一)苏木精染色的基本原理

通常，苏木精被称为碱性染料，因为它在碱性条件下呈现出蓝色。但实际上，苏木精本身并不是碱性染料，而是一种前体物质。在氧化的过程中，苏木精转变为酸性染料苏木红。当苏木红与铝结合时，形成一种带正电荷的蓝色色精。只有这种蓝色色精在碱性条件下才表现出碱性。细胞核的染色质主要由DNA组成，DNA的磷酸基在双螺旋结构中呈现负电荷，因此具有酸性。在染色过程中，带负电荷的细胞核与带正电荷的蓝色色精通过离子键或氢键结合，从而完成染色。因此，苏木精在碱性溶液中呈现出蓝色，使细胞核染成蓝色。一、染色的原理

(二)伊红染色的基本原理

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中会离解成带负电荷的阴离子。细胞质内主要成分是蛋白质，蛋白质是一种两性化合物，在其等电点(pH4.7～5.0)时，不表现出电性。在这种情况下，酸性或碱性染料很难染色细胞质。当pH调至6.7～6.8时，高于蛋白质的等电点，蛋白质呈酸式电离，此时带负电荷的阴离子就能被带正电荷的染料染色，同时也会染色胞核，造成胞核和胞质难以区分。为了解决这个问题，需要将pH调至低于细胞质的等电点，这样细胞质中的蛋白质就会带正电荷(阳离子)，从而可以被带负电荷的伊红染料染色。通常情况下，细胞质、红细胞和结缔组织会被伊红染成红色或粉红色，与被苏木精染成蓝色的细胞核形成鲜明对比。二、染液的配制

(一)苏木精液1.Harris苏木精液，最常用；2.Ehrlich苏木精液的配制；3.Gi11改良苏木精液的配制4.Mayer改良苏木精液的配制(二)分化液(三)氢氧化氨液蓝化液(四)伊红染液三、染色的程序

苏木精伊红染色简称HE染色，是组织学技术中常用的标准染色方法。在优质的HE染色切片中，红色和蓝色相互映衬，层次清晰，色彩浓淡均匀。(一)常规石蜡切片HE染色1.脱蜡至水2.染色3.脱水、透明4.封固(二)冷冻切片HE染色(三)快速石蜡切片染色四、染色的结果

HE染色是一种常规染色方法，能够使细胞核呈现出鲜明的蓝色，软骨基质和钙盐颗粒染成深蓝色，黏液染成灰蓝色。同时，细胞质被伊红染成淡红色，胶原纤维呈淡粉红色，细胞质内的嗜酸性颗粒呈鲜红色，而红细胞呈橘红色。在优质的HE染色切片中，细胞核和细胞质呈现出蓝色和红色相映，色彩鲜艳美丽。胞核清晰可见，核膜和核染色质颗粒也十分清晰。此染色方法能够展示组织或细胞的一般形态和多种物质成分，并且能够长期保存而不褪色。五、染色过程中的注意事项HE染色的质量受到多种因素的影响，包括样本采集、处理、染色等各个环节。常见问题如下：(一)、固定不当；(二)、脱蜡不净(三)、染色与分化不当(四)、脱水不彻底或过度(五)、封固及封固剂使用不当(六)、切片脱落谢谢观看病理检验技术

病理组织切片常用特殊染色高职高专医学检验技术专业系列教材目

录第一节结缔组织多色染色01第二节结缔组织多色染色02第三节弹性纤维染色03第四节网状纤维染色04目

录第五节肌肉组织染色05第六节脂质染色06第七节糖原染色07第八节黏液物质染色08目

录第九节色素染色09第十节病原微生物染色10学习目标知识目标能力目标素质目标掌握各种特殊染色的应用；熟悉特殊染色的的染色方法；了解特殊染色常用染液的配制。能够对常用特殊染色的结果判读；能熟练对组织进行特殊染色操作。培养严格遵守操作规程、规范操作的职业精神，严谨认真的工作态度、一丝不苟的工作作风。第一节

结缔组织多色染色一、结缔组织多色染色的应用一、结缔组织多色染色的应用结缔组织特殊染色的方法多数是使用混合染料或不同染料连续染色，通常能够以三种以上的颜色使结缔组织成分选择性着色。清晰地显示出胶原，软骨，粘液，淀粉样物质和纤维素等。这些方法被称为结缔组织多色染色法，是显示与鉴别结缔组织的重要方法。

二、常用染色方法Masson三色染色法1.染液配制（1）Weigert铁苏木素液：甲液：苏木素 1g95%乙醇或无水酒精100ml乙液：30%三氯化铁水溶液 4ml盐酸 1ml蒸馏水 95ml使用前将两液体等量混合。（2）丽春红酸性品红液：丽春红0.7g酸性品红0.3g冰醋酸1ml蒸馏水99ml（3）2%醋酸苯胺蓝染液：

苯胺蓝2g

2%冰醋酸水溶液100ml二、常用染色方法Masson三色染色法2.染色步骤（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）Weigert铁苏木素染色5-10分钟。流水稍洗。（3）1%盐酸乙醇分化，流水冲洗数分钟。（4）丽春红酸性品红液染色10分钟，蒸馏水稍冲洗。（5）1%磷钼酸水溶液处理3分钟，镜下控制见肌肉纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。（6）不经水洗，直接用苯胺蓝液染5分钟。（7）1%冰醋酸处理2分钟。（8）95%乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。二、常用染色方法Masson三色染色法3.染色结果染色结果胶原纤维呈蓝色，肌纤维、细胞质和红细胞呈红色，细胞核呈蓝褐色。第二节

胶原纤维染色一、胶原纤维染色的应用一、胶原纤维染色的应用1.识别和区分正常组织与病变组织中的胶原纤维含量、分布和形态变化，例如，在肿瘤组织学中。2.帮助判断肿瘤是否来源于纤维细胞或判断纤维化程度，如在心肌瘢痕灶、肝硬化的早期阶段以及纤维增生或纤维减少的各种疾病中。二、常用染色方法VanGieson苦味酸酸性品红染色发（VG染色法）1.染液配制（1）Weigert铁苏木素液：甲液：苏木素 1g95%乙醇或无水酒精100ml乙液：29%三氯化铁水溶液

4ml盐酸 1ml蒸馏水 95ml临用前将两液体等量混合。（2）VanGieson苦味酸酸性品红液：甲液：1.22%苦味酸饱和水溶液90ml乙液：1%酸性品红水溶液

10ml两液提前配制，临用前取甲液9份、乙夜1份混合后使用。三、结缔组织染色过程中的注意事项VanGieson苦味酸酸性品红染色发（VG染色法2.染色步骤（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）Weigert铁苏木素染色5-10分钟，流水稍洗。（3）1%盐酸乙醇分化，流水冲洗数分钟。（4）VanGieson染液染色2-5分钟。（5）倾去染液，直接用95%的乙醇迅速分化和脱水。（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。三、结缔组织染色过程中的注意事项VanGieson苦味酸酸性品红染色发（VG染色法3.染色结果胶原纤维呈鲜艳的红色或粉红色，肌纤维、红细胞呈不同程度的黄色至橙黄色，细胞核呈蓝褐色。第三节

弹性纤维染色一、弹性纤维染色的应用一、弹性纤维染色的应用1.血管病变诊断2.心血管疾病诊断3.鉴别如弹力纤维瘤4.肺部疾病分析5.其他组织病变评估二、常用染色方法维多利亚蓝一丽春红s染色法1.染液配制（1）酸性高锰酸钾溶液甲液：高锰酸钾0.5g蒸馏水

100m1乙液：硫酸0.5ml蒸馏水

加至100ml使用前将两液等量混合。（2）1%草酸溶液草酸1g蒸馏水100ml二、常用染色方法（3）维多利亚蓝染液：维多利亚蓝2g

糊精0.5g

间苯二酚4g

蒸馏水200ml将上述试剂成分进行混合并加热，持续搅拌约5分钟直至煮沸。向沸腾的混合液中缓慢加入30%的三氯化铁水溶液25ml，并保持煮沸状态继续搅拌3分钟。在此期间，溶液会逐渐转变成胶体状，此时即可停止加热。待溶液冷却后过滤，滤纸及残留在滤纸上的物质应一起被放置到60℃恒温箱中烘干。经烘烤，残渣会形成深蓝色、质地细腻的粉末颗粒。将干燥后的细颗粒溶解于400ml70%的乙醇溶液。加4ml浓盐酸和5g苯酚，混合物需静置大约一周时间以充分成熟，才能使用。丽春红S染液：0.5%丽春红水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液（1.22%）85ml。二、常用染色方法2.染色步骤（1）切片脱蜡至蒸馏水。（2）酸性高锰酸钾溶液氧化5分钟，水洗。（3）1%草酸溶液漂白1-2分钟，流水稍洗。（4）70%乙醇洗2分钟。（5）维多利亚蓝染液1-2小时。（6）70%乙醇分化数秒，直至切片不再脱色为止，水洗。（7）丽春红S染液5分钟。（8）倾去染液，直接用95%乙醇迅速分化和脱水。（9）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封闭。二、常用染色方法3.染色结果弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。第四节

网状纤维染色一、网状纤维染色的应用1.网状纤维染色在诊断原位癌与早期浸润癌时至关重要：原位瘤保有完整基底膜，而浸润癌则破坏之。2.该染色法区分上皮性癌症和间叶性肉瘤：肉瘤中网状纤维散在分布，癌巢周围则包绕着网状纤维。3.显示病变组织网状纤维的结构变化（如完整性、破坏等），有助于评估疾病进程、严重程度及预后。4.分析网状纤维的数量和分布特征，可鉴别不同来源或类型的肿瘤，例如血管相关肿瘤或其他特定卵巢肿瘤。二、常用染色方法Gordon-Sweet网状纤维染色法1.染液配制（1）酸性高锰酸钾溶液（2）1%草酸溶液（3）2%硫酸铁铵溶液（4）Gordon-Sweet氨银染液（5）核固红染液二、常用染色方法2.染色步骤(1)石蜡切片，脱蜡至水。(2)酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟，水洗。(3)1%草酸水溶液漂白1-2分钟，水洗、蒸馏水洗。(4)入2.5%硫酸铁铵水溶液媒染5-15分钟，蒸馏水洗2次。(5)入Gordon-Sweet氨银液1-2分钟，蒸馏水洗3次。(6)10%福尔马林液还原1分钟，流水冲洗5-10分钟。(7)用核固红复染5-10分钟，稍水洗。(8）梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.染色结果

网状纤维呈黑色，胶原纤维星黄棕色，细胞核呈红色第五节

肌肉组织染色一、肌组织的构成及形态特点肌组织分为三大类型：骨骼肌、心肌和平滑肌。二、肌组织染色的应用在心肌和骨骼肌出现病变时，常规的HE染色可能不足以清晰揭示肌纤维内部的变性病变，如肌质凝聚、断裂等病理改变。为了准确评估这些变化，并有效鉴别横纹肌肉瘤与各类未分化的间胚叶肿瘤，采用针对肌纤维的特殊染色技术进行观察是十分必要的。三、肌组织的染色方法Mallory磷钨酸苏木精染色法1.染液配制（1）酸性高锰酸钾溶液（2）1%草酸溶液：2.染色步骤(1)石蜡切片，脱蜡至水。(2)酸化高锰酸钾水溶液氧化5分钟，水洗。(3)1%草酸水溶液漂白1-2分钟，水洗、蒸馏水洗。(4)Mallory磷钨酸苏木精染液12-48小时。(5)95%乙醇快速分化。(6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

三、肌组织的染色方法3.染色结果橫纹肌纤维、神经胶质纤维、细胞核等呈紫蓝色，胶原纤维、网状纤维、软骨基质星棕红色。缺血缺氧早期病变心肌呈紫蓝色或棕黄色。第六节

脂质染色一、脂质的构成成分二、脂质染色的应用

能有效区分多种肿瘤类型，如脂肪肉瘤与黏液肉瘤、不同卵巢纤维源性肿瘤及肾实质恶性与良性肿瘤。同时，利用脂类物质染色技术，可以精准识别脂肪变性与空泡变性、糖原沉积等病变，并在判断疾病中脂质异常及诊断脂肪栓塞等方面发挥关键作用。三、常用染色方法苏丹III染色法1.染液配制2.染色步骤（1）冷冻切片厚8um-10um，蒸馏水稍洗。(2)harris苏木素1-2分钟。(3)自来水洗、盐酸酒精分化、返蓝，水洗、蒸馏水洗。(4)70%乙醇浸洗。(5)苏丹III染液30-60分钟，如果置于56℃温箱中可适当缩短时间。(6)70%乙醇分化数秒。(7)蒸馏水洗，在空气中稍晾干，甘油明胶液封固。3.染色结果

脂肪呈橘红色细胞核呈淡蓝色第七节

糖原染色一、糖原染色的应用1.通过糖原染色，可在HE染色无法区分的情况下，确定细胞内空泡成分是糖原还是溶解的脂质。2.糖原染色对于研究心肌病变及心血管疾病十分关键，能揭示心肌缺血时糖原含量的早期变化，如在坏死区域观察到糖原明显减少。3.在诊断糖原沉积病、糖尿病时，