《微生物检验技术培训课程》课件-非发酵革兰阴性杆菌检验

非发酵革兰阴性杆菌检验NONFERMENTATIVEGRAMNEGATIVEBACILLIANDTHEIRTESTING概念非发酵菌是一群不利用葡萄糖或仅以氧化葡萄糖、需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。多为条件致病菌，引起院内感染，含20多个属。假单胞菌属铜绿假单胞菌不动杆菌属鲍曼不动杆菌产碱杆菌属窄食单胞菌属嗜麦芽窄食单胞菌属黄杆菌属伯克霍德菌属洋葱伯克霍德菌莫拉菌属为何高度重视非发酵菌？条件致病菌，分布广泛。分离率越来越高。耐药形式严峻，多重耐药。2023年上半年细菌耐药检测结果聚焦两大临床常见非发酵菌铜绿假单胞菌和不动杆菌属铜绿假单胞菌：革兰阴性杆菌，宽0.5~1.0μm，长1.5~3.0μm。无芽孢，有单鞭毛。临床分离的菌株常有菌毛和微荚膜。不动杆菌为革兰氏染色阴性、无芽孢、两端钝圆、散在或个别成双排列、大小(0.6~1.0)μmX(1.0~1.6)μm的杆状（球杆状）细菌。图中显示的是鲍曼不动杆菌。学习目标掌握铜绿假单胞菌的生物学特征与微生物学检验。1掌握不动杆菌属的生物学特征与微生物学检验。2了解铜绿假单胞菌和不动杆菌属的临床意义。3一、铜绿假单胞菌分布广泛，人体皮肤、呼吸道及肠道黏膜。条件致病菌，常引起医院获得性肺部感染、烧伤感染等疾病；产生水溶性色素，使伤口创面、脓液和敷料呈绿色。（一）分类与特征1.形态与染色G-杆菌，球杆状或丝状。多散在排列，也可成对或短链状排列。无荚膜和芽胞，端生鞭毛1~3，运动活泼。（一）分类与特征2.培养特性专性需氧，35℃最适生长，4℃不生长而42℃是该菌生长的鉴别特点。营养要求不高，在普平、MAC、血平板上生长良好，具有生姜味，产生灰绿、蓝绿、黄绿色素渗透培养基中（诊断意义）。痰液标本中的铜绿假单胞菌血平板：灰绿色菌落，形成β溶血环MAC枫叶状菌落（一）分类与特征3.生化反应葡萄糖+甘露醇-乳糖-蔗糖-麦芽糖-。

O/F试验：O氧化型（专性需氧）。氧化酶试验+触酶+。严格需氧菌氧化型(O)氧化酶试验触酶试验（一）分类与特征4.抵抗力对干燥、紫外线抵抗力强，但对酸和银盐较敏感。容易发生变异：菌落、形态、耐药变异，形成生物膜，产生耐药性。对多种抗生素呈现固有耐药性，如氨苄西林。中国细菌细菌耐药监测网显示24035株铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性（CHINET2021，数据截止日期2022年2月）（二）临床意义铜绿假单胞菌产生多种致病物质，如菌体结构（菌毛、胞外多糖等）、内毒素、外毒素和酶等。条件致病菌，免疫低下者易感（化疗、感冒、手术、激素治疗等）；临床表现多样，化脓性细菌。常见于烧伤或创伤部位、中耳、角膜、尿道和呼吸道感染。（三）微生物学常规检验标本采集血液、脑脊液、各种渗出液、脓、痰、尿、粪便等。环境微生物检测：空气、水、地面、门把手、医疗器械等。病房物体表面不得检查出铜绿假单胞菌，妇科、外科空气培养不得检查出铜绿假单胞菌。（三）微生物学常规检验涂片镜检（革兰氏染色）氧化酶+O/F试验（氧化型）生化试验增菌培养(肉浸液)

分离培养（BAP/Mac/巧克力）分离培养（Mac、SS）可疑菌落（菌落性状、色素）有正常菌群寄生无正常菌群寄生血液、骨髓脓、痰、脑脊液粪便乳糖不发酵血平板：大而扁平，边缘不齐，湿润、生姜气味，灰绿色和透明溶血环。检验程序铜绿假单胞菌杆菌鉴定依据菌落特征、色素、气味（血平板)。42℃可生长，4℃不生长。氧化酶+，O/F试验为O性（氧化型）。液化明胶。硝酸盐还原试验+。精氨酸双水解酶+。二、不动杆菌属不动杆菌属是一群不发酵糖类、氧化酶阴性、无动力的G-杆菌；分布广泛。在医院感染中的分离率仅次于铜绿假单胞菌，居非发酵菌的第二位。醋酸钙不动杆菌。洛非不动杆菌。溶血不动杆菌。鲍曼不动杆菌（多数临床标本）。琼式不动杆菌。约翰逊不动杆菌。二、不动杆菌属1.形态与染色G-球杆菌，成双排列为主，无芽胞和鞭毛。二、不动杆菌属2.培养特性专性需氧，最适30~35℃，鲍曼不动杆菌可在42℃生长。营养要求不高，普平和MAC中生长良好；在MAC中可形成淡粉色或无色菌落。鲍曼不动杆菌在MAC中红色菌落二、不动杆菌属血平板：圆形、灰白色、光滑、边缘整齐菌落，部分菌落呈现粘液状。鲍曼不动杆菌（血平板）二、不动杆菌属3.生化反应鉴定表6-3不动杆菌属内常见菌种的主要生物学特性菌名41℃生长试验44℃生长试验明胶液化试验葡萄糖产酸试验绵羊血溶血试验Β-丙氨酸利用试验L-精氨酸利用试验枸橼酸盐利用试验丙二酸盐利用试验醋酸钙不动杆菌---+-++++鲍曼不动杆菌++-+-++++溶血不动杆菌--++/-+-++-琼氏不动杆菌+-----++-约翰逊不动杆菌------+/-++/-洛菲不动杆菌---------耐放射性不动杆菌---+/---+-+注：+代表90%以上菌株阳性；-代表90%以上菌株阴性；+/-代表11%~89%菌株阳性。二、不动杆菌属4.临床意义条件致病菌，存在于正常人体皮肤、口腔、呼吸道和胃肠道和泌尿道，自然环境中也广泛分布。医院感染的重要病原菌，主要引起医院获得性肺炎尤其是呼吸机相关的肺炎、泌尿系感染、创伤感染、菌血症等。对常用抗生素的耐药率有逐年增加的趋势。二、不动杆菌属5.微生物学常规