《微生物检验技术培训课程》课件-螺旋体检验

螺旋体检验SPIROCHAETATEST螺旋体螺旋体是一类细长、柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。特点内含脂多糖和胞壁酸的细胞壁。以二分裂方式繁殖。对抗生素敏感。体态柔软，胞壁与胞膜之间绕有弹性轴丝，借助它的屈曲和收缩能活泼运动。分类钩端螺旋体属（Leptospira）：螺旋数目较多，螺旋较密，比密螺旋体更细密而规则，菌体一端或两端弯曲呈钩状。钩端螺旋体密螺旋体属（Treponema）：有8～14个较细密而规则的螺旋，如梅毒螺旋体。疏螺旋体属（Borrelia）：有5～10个稀疏而不规则的螺旋，如回归热螺旋体及奋森氏螺旋体，前者引起回归热，后者咽峡炎，溃疡性口腔炎等。螺旋体的流行情况我国以问号钩端螺旋体和梅毒螺旋体（TP）最为多见是我国法定管控的两种乙类传染病钩端螺旋体临床意义（一）致病物质溶血素细胞毒因子内毒素样物质“寒热、酸痛、一身乏，眼红、腿痛、淋巴结大”钩端螺旋体临床意义（二）致病过程及临床类型储存宿主和传染源：鼠和猪家畜肾小管→生长繁殖→尿→污染的水源、稻田、小溪、塘水等称为疫水穿过正常或破损的皮肤和粘膜1经消化道粘膜进入人体2经胎盘感染胎儿引起流产3经吸血昆虫4临床上常见有下列几种类型临床上常见几种类型流感伤寒型黄疸出血型肺出血型有脑膜脑炎型肾功能衰竭型胃肠炎型梅毒螺旋体临床意义（一）致病物质致病物质荚膜物质：粘附和抗吞噬作用。粘多糖酶：先吸附于含有粘多糖血管周围组织，后分解基质粘多糖。前列腺素E：抑制巨噬细胞的活性，降低机体免疫活性。梅毒螺旋体临床意义先天性梅毒又称胎传梅毒。梅毒螺旋体经胎盘进入胎儿血循环，引起胎儿全身感染，螺旋体在胎内儿脏（肝、脾、肺及肾上腺）及组织中大量繁殖，造成流产或死胎，如胎儿不死则称为梅毒儿，会出皮肤梅毒瘤、骨膜炎、锯齿形牙、神经性耳聋等症状。人是梅毒的唯一传染源，传播途径有：直接接触、间接接触、垂直传播。后天获得性梅毒95%是由性交直接感染，少数通过输血等间接途径感染。分为三期初期梅毒：梅毒螺旋体侵入皮肤粘膜约三周后，在侵入局部出现无痛性硬结及溃疡，称硬性下疳。分为三期二期梅毒：此期的主要表现为全身皮肤粘膜出现梅毒疹，全身淋巴结肿大，有时亦累及骨、关节、眼及其他器官。分为三期三期梅毒：主要表现为皮肤粘膜的溃疡性损害或内脏器官的肉芽肿样病变（梅毒瘤），严重者在经过10～15年后引起心血管及中枢神经系统损害，导致动脉瘤、脊髓痨及全身麻痹等，此期的病灶中螺旋体很少，不易检出。一、生物学性状（一）形态、结构、染色菌体纤细，长短不一，菌体一端或两端弯曲呈钩状，常为“C”、“S”等形状。在暗视野显微镜下可见钩体象一串发亮的微细珠粒，运动活泼，可曲屈，前后移动或围绕长轴作快速旋转，可见翻动，滚动状。钩体革兰染色为阴性，钩体常用镀银染色法，把菌法染成褐色，但因银粒堆积，其螺旋不能显示出来。钩端螺旋体钩端螺旋体（暗视野映光法）一、生物学性状（二）培养人工条件：20～30℃，pH7.2～7.5，6.5—8.4。常用柯索夫（Korthoff）氏液培养基培养，生长缓慢，接种后3～4天开始繁殖，1～2周后，液体培养基呈半透明云雾状混浊生长。固体培养基：1-3周形成扁平，透明、不规则、细小圆形菌落。半固体培养基上孵育3-10天形成针尖大小的半圆形菌落。钩端螺旋体一、生物学性状（一）形态与染色梅毒螺旋体（苍白螺旋体）

梅毒螺旋体细长，形似细密的弹簧，螺旋弯曲规则，平均8～14个，两端尖直。运动方式两侧摆动或旋转方式。一般染料不易着色，镀银染色呈棕褐色，吉姆萨染色呈淡红色。梅毒螺旋体一、生物学性状（二）培养梅毒螺旋体（苍白螺旋体）

1981年，Fieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞，在微氧条件下培养成功，在人工培养基上尚不能培养。（三）抵抗力梅素螺旋体对温度、干燥均特别敏感，离体干燥1～2小时死亡，41℃中1小时死亡，4℃中3天死亡，对化学消毒剂敏感，1～2%石炭酸中数分钟死亡，对青霉素、四环素、砷剂等敏感。钩端螺旋体微生物学常规检验（一）病原学检查发病一周内取血液，第二周以后取尿，有脑膜炎型症状者取脑脊液进行检查。显微镜检查直接镜检：暗视野显微镜检查，镀银染色镜检。分离培养与鉴定：种于柯氏（Korthoff）培养基。动物接种：于豚鼠腹腔进行分离。钩端螺旋体微生物学常规检验（二）血清学试验：双份血清的检测显微镜凝集试验间接凝集试验补体结合试验间接免疫荧光试验ELISA（三）分子生物学方法：PCR测核酸梅毒螺旋体微生物学检查1.标本：初期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的渗出物、血清。2.检验方法：（1）直接检查：用暗视野或墨汁负染、如查见有运动活泼的密螺旋体即可诊断；镀银染色和荧光抗体检测法，作初诊。梅毒螺旋体微生物学检查血清学检查梅素螺旋体抗原分为三类：螺旋体表面特异性抗原：使机体产生特异的凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体。螺旋体内类属抗原：使机体产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应。螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（Aegagin）。可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起反应。非螺旋体抗原试验（STS）

原理用正常牛心肌的心类脂（Cardiolipin）作为抗原，检测病人血清中的反应素。非螺旋体抗原试验（STS）

1.性病研究实验室(VDRL)的玻片试验法。该法是以胆固醇为载体，包被上心磷脂和卵磷脂，构成VDRL抗原微粒，与灭活血清反应时呈凝集，为阳性。是一种简单的玻片沉淀试验，试剂及对照已标准化。但需要低倍镜观察。非螺旋体抗原试验（STS）

2.不加热血清反应素试验（USR）和快速血浆反应素试验（RPR），其抗原是UDRL抗原的改良，本试验所用抗原是非特异的，检测的抗体时应排除假阳性反应，结合病史，临床表现及多次的试验结果进行分析。快速血浆反应素试验（RPR）：用经处理的活性碳颗粒吸附VDRL抗原，血清有反应素时，则出现黑色凝集块，不需要用显微镜观察。螺旋体抗原试验（TP）抗原为梅毒螺旋体，以检测血清中的特异性抗体。荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA～ABS）：为间接荧光抗体法，其敏感性及特异性均高，常用于梅毒的早期诊断。螺旋体抗原试验（TP）血清学检测方法分类检测方法方法缩写非梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒非特异性抗体检测）快速血浆反应素环状卡片试验RPR甲苯胺红不加热血清试验TRUST性病研究实验室试验VDRL梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒特异性抗体检测）梅毒螺旋体颗粒凝集试验TPPA梅毒螺旋体血细胞凝集试验TPHA酶联免疫吸附试验ELISA快速免疫层析检测法RT化学发光免疫分析法CLIA荧光螺旋体抗体吸收试验FTA-ABS钩端螺旋体防治预防：消灭传染源：大力灭鼠，加强病畜