（正式版）DB21∕T 3638-2022 《海蜇种质鉴定技术规范》

DB21辽TechnicalRegulationforGermplasmidentificationofRhopilemaesculentum辽宁省市场监督管理局发布I请注意本文件的某些内容可能涉及某些专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件主要起草人：李云峰、李玉龙、周遵春、鲍相渤、陈百灵、陈井童、田梅1海蜇种质鉴定技术规范本文件规定了海蜇（RhopilemaesculentGB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分GB/T18654.12养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析刺胞动物门（Cnidaria）、钵水母纲（Scyphomedusa5.2形态特征胃膜、口柱连为一体。伞体部表面光滑，呈半2DB21/T3638—2022图1.海蜇外形及纵切面图1.中胶层；2.胃腔；3.生殖下穴；4.间辐管；5.肩板；6.口腕管；7.外伞；8.生殖乳突；9.生殖腺；10.胃丝；11.内伞；12.感觉器；13.缘瓣；14.口腕；15.丝状附属器；16.棒状附属器5.3.1性成熟海蜇雌雄异体，雄性和雌性性成熟年龄为1龄。5.3.2怀卵量怀卵量随个体的增大而增加，每个雌性海蜇一生的怀卵量为2.0×10⁶粒~8.0×107粒。在显微镜下观察性腺发育情况，当卵子直径在80μm~100μm可进行繁殖，统计每个雌性海蜇的怀卵量。5.3.3产卵类型海蜇分批产卵，卵为沉性卵，卵径80μm~100μm,产卵2批~3批，产卵时间在8月~10月。5.3.4繁殖特性世代交替生殖，水母型通过有性生殖产生无性世代水螅型，水螅型通过横裂生殖产生有性世代水母5.4细胞遗传学特性检测5.4.1染色体数体细胞染色体数：2n=42。5.4.2核型染色体组核型公式：10m+14sm+12st+6t,NF=78。染色体核型见图2。3PCR反应液见附录B表B.1。反应条件为：94℃预变性5min;进入30个循环，每个循环94℃变性30s,53℃~56℃退火30s,72℃延伸30s;最后72℃延伸5min。TCTATCTCTTCGGCCTCACATTGGAGCTATTTTGTTGGTTGTTTTTGCTGCCATTTTTAACACGTTATTATATT4GCACACGCACCAGAAGAGACGTTCGCTCGTTCGCTCGTTCGTTTGTCTCTTGCTGTATACGTGTGGCTAGCGATAAAACAAAACAAGAAACAACTTCCAACGGTGGATCTCTTGGCTCGTGCATCGATGAAGAACGCAGCCAGCTGCGATATGTAGTGTGAATTGCAGAACCCAGCGAATCATCGAATCTTTGAACGCAAATGGCGCTCCTTGGTTCTCCATGGAGCACGTCTGTCTGAGCGTCATGGCCAATCAATCCCAATAGCACACGCTCTTCTGCAAAGAGAGGAGCATGTGGCGTTGAGGCAACACGGCGTTGATGACGGACATCAGCCATCAACTGATGC符合第5章要求，且COI基因序列测序结果与5.5.4节比对结果相似度在98%以上，判5A.2低渗：将细胞悬液于1000rpm/min离心10min，去除上清后加入0.075mol/L的KCl溶液，27℃低渗A.4解离：-20℃中取出已经固定好的细胞悬液，离心去上清，加入预冷的50%冰醋酸1-2滴进行解离A.5滴片：将细胞悬液在距冰冻载玻片上1m左右的高A.6染色：将载玻片置于现配置的10%Giemsa（pH=6.8）染缸内染色30min，用蒸馏水冲洗干净，或将载玻片用DAP