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43I 2 2 2 4 6 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。12规范性引用文件通过外部观察或其他方法确定母牛发情程度的方5冷冻精液的贮存2冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中贮存，液氮生物容器应符合GB/T5458有关规定冻精液由一个液氮容器转换到另一液氮容器时，在液氮容器外停留时间不得超6输精准备6.6.2剪去细管精液封口，剪口应正，断面应齐。通过母牛的外部表现症状和外生殖器官的变化判断母牛是否发情和发8输精在卵泡壁薄、满而软、有弹性和波动感明显接近成熟排卵时输精一次；6h～103母牛接受爬跨后8h～12h是适宜输精时间。如采用两次输精，第二次输精时间为母牛接受爬跨后输精后第二个情期未发情(40d左右),通过直肠触摸检查子宫，可查出两侧子宫角不对称，孕侧对配种28d后的牛采血，用检测试剂盒(PA4A.1玻璃器皿A.2金属器械56用一次性采血针和5mL采血管，对配种28d～30d的母牛尾根酒精消毒采血2mL～3mL,采血管做好标记和填写采样单，静置1h，3000g离心10min，离心后血清可直接用于检测，不立即检测的血清C.3.2用封口膜将微孔板密封以防蒸发，轻轻摇匀，在20℃的恒温培养箱孵育C.3.3孵育后，去掉膜，翻转微孔板C.3.4洗涤后，向微孔内加入检测溶液，轻轻摇匀，随后在20℃的恒温培养箱孵育C.3.6洗涤后，再向孔内加入酶标抗体，轻轻摇匀
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