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中国兽医协会发布I请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1伴侣动物A型流感主动监测技术规范NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范4缩略语cDNA:互补脱氧核糖核酸(complementaPCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReactioRNA:核糖核酸(RibonucleicAcVTM:病毒载液(VirusTransportMedia)25.2为伴侣动物A型流感病毒感染、变异情况及向人类溢出风险评估提供本底数据。6.1监测点宜选择伴侣动物聚集区域,如宠物诊疗场所、宠物经营场所、宠物繁育场所、流浪动物收6.2如场点或区域符合以下情况之一的,可考虑设置为监测——三年内曾经发生过较大规模伴侣动物相关A型流感病毒疫情的区域;——伴侣动物饲养密度或诊疗密度较大的区域。8.1.1主要采集监测对象的咽拭子。若监测对象有明显呼吸道症状的则加采鼻拭子,有明显腹泻症状8.1.2按照NY/T541要求进行样本的采集、保存和运输,样品保存液配制方法见附录A。3或附录C自行合成实时荧光定量RT-PCR所需的引物探针并配制采用测序方法确认核酸阳性样本中A型流感病毒亚型。测序可使用商品化试剂盒,也可参照附录D检测结束后,及时将样品检测和测序结果等相关信息9废弃物处理采样和检测过程中产生的医疗废弃物按照相关规定进行无害化处4A.2取出玻璃瓶,倒出去核酸试剂和去核酸酶试剂后用DEPC水洗三次,高压灭菌玻璃瓶。A.5将玻璃瓶1中液体通过0.40μm过滤器过A.6将过滤后的VTM分装至2mL冻存管中,每管1mL,分装完成后将VTM置于4℃避光保存。56FAM-TGCAGTCCTCGCTCACTG将新合成的探针瞬时离心后,依照说明书用RNaseFreeWater溶解为100μM的储存液将配制好的正向引物工作液、反向引物工作液和探针工作液按照体7RT-PCR反应表D.1RT-PCR反应引物序列NA正向引物NA反向引物注:1.引物序列引用自Hoffmann,Eetal.“Universalprimersetforthefull-lengthamplificationofallinfluenzaAviruses.”Archivesofvirologyvo
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