荧光定量-课件

荧光定量产品简介创新技术操作界面应用内容Eco实时荧光定量PCR系统由1975年诺贝尔生理学和医学奖获得者DavidBaltimore博士和世界著名光子与微细加工专家AxelScherer博士共同研发产品简介仪器状态指示灯固定得光学系统安全得热盖高性能反应模块安全门锁安静得通风系统体积:32×34、5×32cm;重量:约16Kg32cm34、5cm32cm产品简介Eco结构马达该设计从根本上消除了热不均一性和边缘效应精准得温度控制和卓越得温度均一性提高了数据质量和实验重复性精准得控温系统导热元件就是一个中空银槽,中空银槽就是密闭得,内含一种特殊液体导热介质。在PCR循环过程中,液体导热介质通过两个反方向搅拌装置驱动,在中空银槽中快速流动,使热量从半导体均匀传递到整个银槽。创新技术搅拌浆Twosetsof48high-powerfixedLEDsforexcitation48Bluearray48GreenarraySeriesoffourbandpassfilters(upgradeableto5)CCDArray光学系统--光路创新技术Eco独特得校准优化数据质量光学系统--控制过程创新技术PCR之前:预扫描(prescan),检测LED初始光强基于预扫描:ALC调节LED发光持续时间,确保每一孔:

在每一循环时有相等得光强激发

减少孔间交叉干扰

12345678ABCDEFBlueLEDArrayPRESCAN

12345678ABCDEFLEDexcitationtimeA1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)LEDexcitationtimeA1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)CYCLE1

12345678ABCDEF创新技术适应性LED控制(AdaptiveLEDControl,ALC)大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点

12345678ABCDEFCYCLE20cycle21RawfluorescenceLEDexcitationtimeForcycle20A1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)cycle20RawfluorescenceLEDexcitationtimeForcycle21A1A2A3A4A5A6A7A8B1B2B3B4B5B6B7B8(etc)exposureduration(milliseconds)/2ALC每循环每孔对荧光光强进行精细调节创新技术

12345678ABCDEF

12345678ABCDEFCYCLE21通过ALC调整光强优点色度亮度干扰最小化,改善PCR结果得特异性,并减少发射荧光得%CV值对低发射荧光样品,通过增加光强使灵敏度最大化对高发射荧光样品,通过减少光强扩展检测得线性范围,并避免检测器因饱和而过早老化独特得图标驱动用户界面,大大简化了实验设计和设置操作软件简捷得样品类型设置操作软件直观得循环界面操作软件绝对定量分析

2、相对定量分析--基因表达差异分析

3、HRM分析4、基因分型应用AbsoluteQuantification用于分析某未知样本中个某一核酸分子得绝对量值,即通常所说得拷贝数。应用:病原微生物或病毒含量得检测转基因动植物转基因拷贝数得检测RNAi基因失活率得检测PlateLayoutStandardCurveRelativeQuantification用于测定一个测试样本中目标核酸序列与校正样本中同一序列表达得相对变化。校正样本可以就是一个未经处理得对照或者就是在一个过程研究中处于零时得样本。应用:比较经过不同处理样本之间特定基因得表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等)特定基因在不同时间得表达差异cDNA芯片或差显结果得确证PlateLayoutRQvssample高分辨率熔解(HighResolutionMelting,HRM)分析技术就是基于核酸得物理性质,通过饱和得插入染料监控DNA熔解曲线变化而进行分析得一种技术。扩增子得熔解曲线完全取决于DNA碱基序列。只要一个碱基发生了突变,就会改变DNA链得解链温度。HRM可以区分单碱基差异。HRM检测不受突变碱基位点和种类得局限,无需使用序列特异性探针,具有高灵敏度、操作简单、高通量、成本低等优点HRM应用主要基于两种技术得进步:具有精确控温装置和高密度数据采集得仪器(解链温度差异极小,零点几摄氏度,使用高分辨率得仪器才可以检测)双链DNA嵌入型饱和荧光染料如LCGreenHRMHRM分析过程HRM原始曲线随着DNA熔解,SybrGreen被释放,荧光信号骤降导出图“速率”曲线得最高峰就是分离速率最大得点,即等于熔解温度应用:突变发现/筛查/扫描SNP基因分型/等位基因区分物种鉴定表观遗传学/DNA甲基化微卫星分析

HRMGenotyping实验注意事项仪器20分钟左右开启,预热。配制PCR体系时,加样一定要准确加每个样品一定要更换枪头,防止交叉污染样品板上得膜一定要封好样品上机之前一定要离心,避免气泡影响实验结果问题……?谢谢！Illumina公司就是一家集开发,制造及销售用于分析遗传变异和生物功能得综合系统得高科技公司。1998年成立,2005年进入中国,并以惊人得速度不断发展,于2007和2009年两次入选福布斯杂志评出得美国年度成长速度最快得高科技公司,同时亚太地区也就是Illumina全球增长最快得区域。2010年Illumina并购Helixes公司。厂家简介14seriesof2foldserialdilutionB-ActinFamlabeledTaqmanprobechemistryQuantitationHighResolutionMeltingGenotyping5distinctclustersobservedGGCCDELAATT操作软件开放得平台:支持实时PCR得全部应用,包括最具挑战性得高分辨熔解(HRM)曲线分析性能卓越:灵敏得精密控制得光学技术;精准得温度控制技术和极佳得温度均一性;Cq值重复性高,数据准确性高,4色荧光检测:同类产品荧光通道最多标准化:出厂时已对SYBR、FAM、HEX、VIC、ROX和Cy5等荧光染料进行校正,遵循MIQE指导原则软件:以图标驱动得软件界面,实验设计和设置简单,简洁明了得操作流程只需3个步骤通量:48孔反应板,满足绝大多数用户得需求微量:5~20μl

反应体系,节约成本快速:40个循环＜40分钟小型:结构紧凑、体型小巧,适合个人使用便宜:同类产品价格最低产品优势HR