基因检测样本提取技师考试试卷及答案

基因检测样本提取技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.基因检测常用血液样本的抗凝剂通常是______。2.DNA提取的基本步骤包括裂解、沉淀、______和溶解。3.RNA提取时需避免______污染。4.磁珠法提取核酸的核心原理是核酸与磁珠表面的______结合。5.样本提取中防止交叉污染应使用______耗材。6.琼脂糖电泳中DNA迁移方向是从______极到______极。7.核酸纯度常用______比值判断。8.血液样本不能立即提取时应置于______环境保存。9.蛋白质污染会使核酸A260/A280比值偏______。10.磁珠法提取时需用______分离磁珠。答案：1.EDTA-K2；2.纯化；3.RNase；4.特异性基团；5.一次性；6.负、正；7.A260/A280；8.-80℃（或低温）；9.低；10.磁力架二、单项选择题（每题2分，共20分）1.以下哪种样本不适合基因检测？A.新鲜血液B.甲醛固定组织C.唾液D.口腔拭子2.DNA提取中裂解细胞常用试剂是？A.蛋白酶KB.RNaseAC.Tris-HClD.EDTA3.磁珠法提取核酸的优势不包括？A.自动化高B.污染少C.耗时短D.成本极低4.RNA提取中β-巯基乙醇的作用是？A.抑制RNaseB.裂解细胞C.沉淀RNAD.去蛋白5.电泳判断DNA片段大小的标准是？A.MarkerB.上样量C.电压D.时间6.影响PCR反应的抗凝剂是？A.EDTA-K2B.肝素C.柠檬酸钠D.草酸钾7.核酸保存最佳温度是？A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室温8.酚-氯仿法的主要作用是？A.沉淀核酸B.去蛋白C.溶解核酸D.抑制酶活性9.口腔拭子采集后正确保存方式是？A.室温干燥B.生理盐水C.保存液D.冷冻10.若A260=0.2，体积100μL，dsDNA浓度是？（1OD=50μg/mL）A.10μg/mLB.10ng/μLC.20μg/mLD.20ng/μL答案：1.B；2.A；3.D；4.A；5.A；6.B；7.C；8.B；9.C；10.B三、多项选择题（每题2分，共20分）1.基因检测常用样本类型包括？A.血液B.组织C.唾液D.尿液E.粪便2.DNA提取关键步骤包括？A.细胞裂解B.核酸纯化C.去蛋白D.沉淀E.溶解3.影响核酸纯度的因素有？A.蛋白污染B.RNA污染C.酚残留D.盐残留E.样本量4.磁珠法提取步骤包括？A.结合B.洗涤C.洗脱D.裂解E.沉淀5.RNA提取注意事项包括？A.避免RNase污染B.低温操作C.无RNase试剂D.加抑制剂E.快速操作6.核酸质量控制指标包括？A.浓度B.纯度C.完整性D.产量E.保存时间7.血液样本提取前处理包括？A.离心分离血浆B.红细胞裂解C.白细胞分离D.样本稀释E.抗凝处理8.酚-氯仿法试剂作用正确的是？A.酚：变性蛋白B.氯仿：去酚残留C.异戊醇：促分层D.Tris-HCl：维持pHE.EDTA：抑制DNase9.口腔拭子采集注意事项包括？A.避免食物残渣B.立即放保存液C.不接触其他物品D.采颊黏膜E.干燥保存10.核酸电泳常用染料是？A.EBB.SYBRGreenC.GoldViewD.溴酚蓝E.二甲苯青答案：1.ABCD；2.ABCDE；3.ABCD；4.ABC；5.ABCDE；6.ABCD；7.ABCE；8.ACDE；9.ABCD；10.ABC四、判断题（每题2分，共20分）1.EDTA-K2抗凝剂适用于DNA提取。（）2.RNA提取可使用普通水溶解。（）3.磁珠法提取核酸无需离心。（）4.甲醛固定组织可直接用于基因检测。（）5.A260/A280=1.8-2.0提示DNA纯度良好。（）6.肝素抗凝血液适合PCR检测。（）7.不同样本应在不同区域操作。（）8.RNA提取后可长期在4℃保存。（）9.蛋白酶K在56℃活性最佳。（）10.核酸浓度越高，纯度一定越好。（）答案：1.√；2.×；3.√；4.×；5.√；6.×；7.√；8.×；9.√；10.×五、简答题（每题5分，共20分）1.简述磁珠法提取核酸的基本原理。答案：磁珠法基于核酸与磁珠表面特异性基团（羧基、硅基等）在特定条件下结合，杂质不结合的原理。步骤为：①样本裂解释放核酸；②磁珠与核酸结合；③洗涤去除杂质；④洗脱液分离核酸。该方法可自动化，减少污染，适合高通量操作。2.简述RNA提取的关键注意事项。答案：核心是避免RNase污染：①用无RNase耗材/试剂；②操作环境清洁，加RNase抑制剂（β-巯基乙醇）；③样本快速处理，低温操作；④提取后-80℃保存，避免反复冻融。3.简述核酸纯度判断方法及标准。答案：①A260/A280比值：DNA1.8-2.0纯，<1.8提示蛋白/酚污染；RNA1.9-2.1纯；②电泳观察：DNA呈清晰高分子量条带，RNA呈28S（2倍18S亮度）、18S、5S条带，无降解smear。4.简述血液样本提取DNA的基本步骤。答案：①抗凝血液离心分离白细胞；②蛋白酶K裂解细胞；③酚-氯仿/磁珠去蛋白；④异丙醇沉淀DNA；⑤70%乙醇洗涤；⑥TE缓冲液溶解，得到纯化DNA。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论血液、唾液、组织样本在基因检测中的优缺点及适用场景。答案：①血液：优点DNA含量高、纯度好，缺点需抗凝、保存要求高；适用常规检测、亲子鉴定。②唾液：优点无创易采，缺点DNA含量低、易污染；适用无创产前、口腔疾病检测。③组织：优点反映病变基因状态，缺点需活检、固定组织需脱蜡；适用肿瘤基因检测。选择需结合检测目的与样本可及