生物工程实验指导-课件 07-仪器分析实验

仪器分析实验实验一

紫外可见分光光谱法测定蛋白质含量实验二

电位滴定法测定食醋中的醋酸含量实验三

原子吸收光谱法测定水中钾含量实验四

苯甲酸红外光谱测定与谱图分析实验五

气相色谱法测定食用酒中乙醇含量实验六

高效液相色谱法测定槐花中芦丁含量实验七

薄层色谱法测定苏丹红实验八

气相色谱法测定藿香正气水中乙醇的含量实验九

高效液相色谱法测定阿司匹林片剂中乙酰水杨酸含量实验一

紫外可见分光光谱法测定蛋白质含量(1)掌握考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量的原理与方法。(2)熟练掌握紫外可见分光光度计的使用和操作方法。(3)掌握蛋白质工作曲线的绘制及样品中蛋白质含量的测定和计算。2实验原理考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色,最大吸光度在465nm;当它通过疏水作用与蛋白质相结合形成蓝色的蛋白质染料复合物时,在595nm处有最大吸光度。在一定的蛋白质浓度范围内,蛋白质染料复合物在波长为595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比。通过测定595nm处吸光度的增加量,可以得知与其结合的蛋白质的量,因此可用于蛋白质含量测定。蛋白质和考马斯亮蓝G-250结合,在2min左右的时间内达到平衡,反应十分迅速。蛋白质染料复合物具有很高的消光系数,使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高,可测微克级蛋白质含量。1实验目的3实验材料及设备3.1实验材料绿豆芽(黄豆芽)。3.2仪器设备分析天平、紫外可见分光光度计、移液管(2mL,5mL)、研钵、量筒、容量瓶(100mL,500mL)、烧杯、比色皿、试管、试管架。3.3试剂及其配制方法牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G-250、乙醇、磷酸。①100mg/mL牛血清白蛋白质标准溶液:称取100mg牛血清白蛋白,溶于蒸馏水并定容至100mL容量瓶,即为1mg/mL的标准蛋白质溶液。②考马斯亮蓝G-250试剂:称取0.05g考马斯亮蓝G-250,溶于25mL乙醇(95%)中,加入85%(m/v)的磷酸50mL,最后用蒸馏水定容至500mL容量瓶。4实验步骤(1)标准曲线的绘制取6支10mL试管,按顺序编号。按表7-1中数据配制一系列不同浓度的蛋白质溶液。摇匀后放置10min,在595nm波长下比色测定,记录吸光度。以各管相应标准蛋白质含量(μg)为横坐标,A595为纵坐标,绘制标准曲线。(2)待测样品测定称取1.0g新鲜绿豆芽的下胚轴,放入研钵中研成匀浆,用10mL蒸馏水分三次把研钵冲洗干净,将全部液体转入10mL刻度试管中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。※注意事项:①如果测定要求很严格,可以在试剂加入后5~20min内测定吸光度,尽量1h内完成,否则会因蛋白质染料复合物发生凝集沉淀而影响测定结果。②考马斯亮蓝的染色能力很强,如果比色杯没有清洗干净会影响吸光度。测定中,蛋白染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完以后可用乙醇将蓝色的比色杯清洗干净。试管中加入自制蛋白质样品和蒸馏水共1mL,再加入4mL考马斯亮蓝G-250试剂,摇匀,放置10min后,在595nm波长下比色,记录A595。根据所测A595从标准曲线上查得蛋白质含量。5结果与分析(1)拍摄照片保存实验结果。(2)将实验数据记录在表7-2中。(3)绘制标准曲线,并计算蛋白样品的浓度。6思考题①考马斯亮蓝法测定蛋白质含量有什么优缺点?②考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理是什么?③蛋白质含量的测定还有哪些其他方法,其优缺点是什么?实验二

电位滴定法测定食醋中的醋酸含量1实验目的(1)掌握电位滴定法的原理和基本操作技术。(2)掌握电位滴定曲线的绘制和滴定终点的计算方法。(3)掌握电位滴定法测定食醋中乙酸含量的方法。食醋的主要成分是醋酸。用氢氧化钾标准溶液滴定醋酸,通常可选用酚酞作指示剂,滴定终点时溶液由无色变为微红色。然而,在滴定过程中,由于食醋呈棕色,无法使用合适的指示剂来观察滴定终点,因此滴定终点需用酸度计来测量。在酸碱电位滴定过程中,随着滴定剂的不断加入,被测物与滴定剂发生反应,溶液pH不断变化,在化学计量点附近发生pH突跃。因此,通过测量溶液pH的变化就能确定滴定终点。pH-V

曲线法以滴定剂用量V

为横坐标,以pH为纵坐标,绘制pH-V

曲线;作两条与滴定曲线相切的直线,切线与曲线的交点即为滴定终点。ΔpH/ΔV-V

曲线法以滴定剂用量V为横坐标,以ΔpH/ΔV(pH变化值的一次微商与对应滴定剂体积增量ΔV

的比值)为纵坐标,绘制ΔpH/ΔV-V

曲线,曲线的最高点即为滴定终点。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料食醋。3.2仪器设备PHS-3C型酸度计、铁架台(含滴定管夹)、100mL容量瓶、250mL锥形瓶、5mL滴定管、10mL移液管、玻璃棒。3.3试剂及其配制方法①0.1mol/L草酸(MW=126.07g/mol,H2C2O4·2H2O)标准溶液:称取草酸12.607g于小烧杯中,加入50mL蒸馏水使其溶解后,转入1000mL容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀。②0.1mol/L氢氧化钾(MW=56.11g/mol,KOH)标准溶液(浓度待标定):称取氢氧化钾固体5.611g于小烧杯中,加入50mL蒸馏水使其溶解,稍冷后转入1000mL容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀。③标准缓冲溶液(购买的袋装品):0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液,pH=4(20℃);0.05mol/L磷酸氢二钾和0.05mol/L磷酸二氢钾混合溶液,pH=6.88(20℃)。4实验步骤(1)酸度计的安装与用标准缓冲溶液校准。打开pH计电源开关,调节温度补偿旋钮,预热30min。使用pH为6.86的标准缓冲溶液进行定位较准(调节定位旋钮);再用pH为4的标准缓冲溶液进行斜率校准(调节斜率旋钮)。要求仪器示值与对应温度下缓冲溶液的标准pH偏差不超过±0.05pH单位。(2)0.1mol/L氢氧化钾溶液的标定准确移取2.00mL草酸标准溶液于250mL小烧杯中,加水20mL,用待标定的氢氧化钾溶液进行滴定,每1mL记录一次读数,在滴定终点体积V处及化学计量点附近时(pH变化较快时),每隔0.5mL记录一次读数,记录每个点对应的体积和pH,以此绘制滴定曲线。(3)电位滴定法测定食醋中醋酸含量准确移取5mL食醋于50mL容量瓶中定容。从中移取5mL于烧杯中,加水20mL,用标定的氢氧化钾溶液进行滴定,每1mL记录一次读数,在滴定终点体积V处及化学计量点附近(pH变化较快时),每隔0.5mL记录一次读数,记录每个点对应的体积和pH,以此绘制滴定曲线。※注意事项:①pH复合电极在使用前必须在3mol/L氯化钾溶液中浸泡活化24h。电极膜很薄易碎,使用时需十分小心。②切勿将搅拌磁子连同废液一起倒掉。5结果与分析(1)拍摄照片保存实验结果。(2)将氢氧化钾溶液的标定数据记录在表7-3中。绘制pH-V曲线和ΔpH/ΔV-V曲线,确定滴定终点对应的体积V,计算氢氧化钾标准溶液的浓度。(3)将食醋中醋酸含量测定的数据记录在表7-4中。6思考题①实验中使用的酸度计若不事先进行校正,结果是否会一样?②电位滴定法与酚酞指示剂滴定法相比,有哪些优点?③如果食醋中含有盐酸,滴定曲线将有何变化?5结果与分析绘制pH-V曲线和ΔpH/ΔV-V曲线,确定滴定终点对应的体积V,计算食醋中醋酸含量。实验三

原子吸收光谱法测定水中钾含量1实验目的(1)掌握电位滴定法的原理和基本操作技术。(2)掌握电位滴定曲线的绘制和滴定终点的计算方法。(3)掌握电位滴定法测定食醋中乙酸含量的方法。水样中的金属离子被原子化后,会吸收来自同种金属元素空心阴极灯发出的共振线,吸收共振线的量与样品中该元素含量成正比。其关系可表示为

A=KC式中

A———吸光度;K———常数;C———试样浓度。本实验采用标准曲线法测定溶液中钾的含量。在既定条件下,测定一系列不同钾含量标准溶液的

A

值,得到

A-C

的标准曲线。再根据钾未知溶液的吸光度,即可求出未知液中钾的浓度。2实验原理3材料、仪器及试剂3.1材料饮用水、容量瓶(250mL)、移液管(5mL,10mL)、试管(10mL)。3.2仪器原子吸收光谱仪、空气压缩机、乙炔气体钢瓶、电子打火枪、钾空心阴极灯(灵敏吸收线为766.5nm)。3.3试剂5%稀硝酸作为稀释剂、桶装纯净水。①钾标准使用溶液(10mg/L):基准氯化钾(相对分子质量为74.55)在150℃干燥2h,称取0.477g氯化钾,以水溶解并移至250mL容量瓶中,稀释至标线,摇匀。②稀释钾标准溶液(10mg/L):5mL移液管吸取钾标准储备溶液2.5mL于250mL容量瓶中,加水稀释至标线,摇匀备用。4实验步骤(1)仪器操作条件的设置(测定参数)吸收线波长:766.5nm;空心阴极灯电流:5mA;狭缝宽:1mm;燃烧器高度:7mm;乙炔流量:1.6L/min。(2)曲线的绘制用5mL移液管准确移取钾标准溶液0、0.5、1、1.5、2、2.5mL,分别移入10mL试管中,用10mL移液管移取水稀释至刻度,摇匀。此标准系列钾的浓度分别为0、5、10、15、20、25mg/L。试剂添加量见表7-5。在仪器最佳工作条件下,于波长766.5nm处,以试剂空白调零,测定其吸光度。以测定的吸光度为纵坐标,相对应的钾含量(mg/L)为横坐标,绘制出标准曲线。(3)水样测定水样在采集后,应立即以0.45μm滤膜(或中速定量滤纸)过滤。用5mL移液管移取过滤后试样溶液5mL,置于10mL试管中,用水稀释至刻度。在与制作标准曲线相同的条件下,于波长766.5nm处测定水样的吸光度,从标准曲线中查得钾离子的浓度。※注意事项:①钾为溶解度很大的常量元素,而原子吸收光谱法是一种灵敏度很高的分析方法。为了取得精密度好、准确度高的分析结果,对所用玻璃器皿必须认真清洗。②样品及标准溶液不能保存在软质玻璃瓶中,因为这种玻璃中的钾和钠容易被水样和溶剂溶出,从而导致污染。5结果与分析(1)拍摄照片记录实验结果。(2)将原始数据记录在表7-6中。(3)绘制标准曲线,并计算水样中钾含量。6思考题①简述原子吸收光谱法的基本原理。②使用原子吸收光谱法分析为何要用待测元素的空心阴极灯做光源?能否用氢灯或钨灯代替,为什么?③在什么条件下使用标准曲线法,该方法有什么优缺点?实验四

苯甲酸红外光谱测定与谱图分析1实验目的(1)学习利用红外吸收光谱仪进行化合物的定性分析。(2)掌握压片法制备固体样品片的技术。(3)熟悉红外分光光度计的工作原理及使用方法。傅里叶变换红外光谱仪是一种基于光的相干性原理设计的分子吸收光谱测量仪器,属于干涉型光谱仪。其主要由光源、干涉仪(迈克尔逊干涉仪)、吸收池(样品室)、检测器、计算机和记录系统等组成。傅里叶变换红外光谱仪将不同频率的光信号经过干涉作用后调制成干涉图,即时间域光谱图,然后用计算机进行快速傅里叶变换,转换成频率域光谱图,即红外光谱图。当一定频率(一定能量)的红外光照射分子时,如果分子某个基团的振动频率和外界红外辐射频率一致,二者就会产生共振。此时,光的能量通过分子偶极矩的变化传递给分子,这个基团就吸收一定频率的红外光,产生振动跃迁(由原来的基态跃迁到较高的振动能级),从而产生红外吸收光谱。当红外光的振动频率与分子中各基团的振动频率不一致时,该部分红外光不会被吸收。若用连续改变频率的红外光照射某试样,将分子吸收红外光的情况用仪器记录下来,即可得到试样的红外光谱图。由于振动能级的跃2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料苯甲酸粉末、光谱纯KBr粉末。3.2仪器设备傅里叶变换红外光谱仪、压片机、模具、干燥器、玛瑙研钵。4实验步骤(1)压片制样①准备a.保持使用压片机的房间湿度较低。b.将压片机配件放入干燥器备用。c.用玛瑙研钵研磨适量KBr晶体,放入干燥器备用。d.为避免手汗对压片的影响,研磨和压片过程中需戴手套。4实验步骤②压片操作a.取200mg备用KBr粉末于玛瑙研钵中,加入1%干燥的样品,在红外灯下研细混匀。b.使用无水乙醇浸润的无尘棉清洗模具等。c.将样品和KBr混合粉末放到模具中,用抹刀铺平,将装配好的压片模具移至压片机下。d.压片机阀门旋至“LOCK”,加压至60kN,停留适当时间使压片透明,脱模,样品基本透明为合格。e.将样品装入样品架。(2)测试①将样品架放入仪器内,点击测试按钮。②测试结束,保存文件。③取出样品架,卸下样品。(3)整理①清洁模具等制样器具。②如有需测试样品则进入下一样品的制备,如无样品则整理物品、清洁台面后离开。4实验步骤※注意事项:①操作规范,轻举轻放,不要敲击。②研钵材质为玛瑙,易碎需防跌落。③实验全过程要求干燥防水。④将KBr研磨至细度2μm左右。⑤控制KBr与样品的比例。⑥注意保持室内清洁、干燥。⑦避免振动光学台。⑧取、放样品时,样品盖应轻开轻盖。⑨眼睛切勿直视氦-氖激光,以免受到损伤。苯甲酸的标准红外光谱(图7-1)。6思考题①KBr压片法制备红外吸收光谱固体试样的注意事项有哪些?②为什么红外光谱实验室要求温度和相对湿度维持一定的指标?③怎样进行红外吸收光谱的定性分析?5结果与分析(1)对样品纯度、来源、元素分析及其他物理性质、谱学性质等方面进行了解。(2)对特征基团频率、特征宽强峰、倍频(泛频)及合频特征峰进行初步分析。(3)初步确定为某类化合物后,与标准谱图进行核对。实验五

气相色谱法测定食用酒中乙醇含量1实验目的(1)了解气相色谱仪的基本结构。(2)学习和掌握使用氢火焰离子化检测器的基本操作。(3)掌握以内标法进行色谱定量分析的方法及特点。(4)学习气相色谱法测定乙醇含量的分析方法。气相色谱法是一种高效、快速且灵敏的分离分析技术。当液体样品由进样口注入后立即被汽化,并被载气带入色谱柱。经过多次分配,各个组分得以分离,逐一流出色谱柱进入检测器。随时间变化而产生的电信号经由记录仪得到气相色谱图。通过对气相色谱图进行数学分析,即可对样品进行定性定量分析。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料白酒样品(市售)。3.2仪器设备气相色谱仪、色谱柱、检测器、气化室、容量瓶、微量注射器、移液管。3.3试剂无水乙醇、丙酮、正丁醇。4实验步骤(1)实验样品的准备①内标样的配制称取10g正丁醇、10g无水乙醇,用蒸馏水溶解至100mL(此标样中乙醇与正丁醇的质量分数均为50%)。由于乙醇的密度为0.802g/mL,而正丁醇的密度为0.795g/mL,两者的密度相近,因此,可用移液管量取10mL乙醇和10mL正丁醇来配制内标液。②内标样测样的配制a.无水乙醇6g+10g正丁醇,定容至100mL,此溶液乙醇质量分数为37.5%。正丁醇为62.5%。b.无水乙醇8g+10g正丁醇,定容至100mL。此溶液乙醇质量分数为44.44%,正丁醇为58.8%。c.无水乙醇7g+10g正丁醇,定容至100mL,此溶液乙醇质量分数为41.18%,正丁醇为55.6%。d.无水乙醇9g+10g正丁醇,定容至100mL,此溶液乙醇质量分数为47.37%,正丁醇为52.7%。e.无水乙醇11g+10g正丁醇,定容至100mL,此溶液乙醇质量分数为52.38%,正丁醇为47.6%。(以上溶液用于工作曲线的绘制)f.测试液:白酒20mL+10mL正丁醇,定容至100mL。4实验步骤(2)色谱条件的设定①接通电源,开启气相色谱仪。②开启气路阀门,调节N2和H2压力至0.3~0.4MPa。打开气体压缩机,进行气路流量调节。各气路流量分别为载气(N2):1.5~2mL/min,H2:60~70mL/min,空气:250~300mL/min。③温度控制系统的调节,调整气化室温度为150℃。检测器的温度为200℃,柱温箱温度调至40℃。待仪器温度稳定后,点燃检测器氢火焰,完成仪器的准备工作,即可进行样品分析。(3)样品分析①校正因子测量:准确称取10g正丁醇和10g无水乙醇,用蒸馏水定容至100mL。作为标准液。②内标样色谱分析:进样量为0.2μL。测定乙醇和正丁醇的校正因子。③绘制校正曲线:以乙醇质量浓度(g/mL)为横坐标、相对校正因子(乙醇/正丁醇)为纵坐标作图。④对白酒样进行分析。⑤色谱峰定性方法:在1mL左右的内标样中加入3~4滴无水乙醇。进行色谱测定,观察哪个峰的乙醇含量增大,则该峰为乙醇峰。6思考题色谱仪的开启顺序和关机顺序是什么?如果顺序错误会产生什么后果?5结果与分析将实验结果记录在表7-7中。实验六

高效液相色谱法测定槐花中芦丁含量1实验目的(1)了解高效液相色谱法分离有机化合物的基本原理及操作条件。(2)掌握高效液相色谱仪的基本结构及作用。(3)了解HPLC法测定槐花中芦丁含量的方法。高效液相色谱分离基于试样中各组分在色谱柱的流动相(淋洗液)和固定相之间分配系数的差异。当试样随着流动相进入色谱柱后,组分在两相之间进行反复多次(102~106)的分配(吸附-脱附-溶解)。由于固定相对不同组分的吸附能力(保留作用)存在差异,各组分在色谱柱中的迁移速度不同,经过一定柱长后逐步分离,依次离开色谱柱进入检测器。检测器将产生的信号放大后,在记录系统中描绘出各组分的色谱峰。芦丁是豆科植物槐树花的主要有效成分之一,具有维生素P样活性,可保护和恢复毛细血管弹性,调节其渗透性。在医药领域,芦丁可作为高血压、脑出血的辅助治疗药物;在化妆品工业中可用作防晒剂原料;同时也是合成乙基芦丁的原料。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料槐花。3.2仪器设备日本岛津高效液相色谱仪、电子天平、恒温干燥箱、超声提取器。3.3试剂甲醇(色谱级)、冰醋酸、芦丁、乙醇、双蒸水。4实验步骤(1)色谱条件设置固定相:ODS色谱柱;流动相:甲醇-1%冰醋酸溶液(40∶60);流速:1.0mL/min;进样量:10μL;柱温:30℃;检测波长:257nm。(2)芦丁标准品的制备精密称取芦丁标准品10mg,置于50mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制成每1mL含芦丁0.2mg的对照品储备液。(3)供试品溶液的制备精密称取干燥的槐花粉末(过40目筛)约100mg,置于50mL量瓶中,加入甲醇至刻度,浸泡1h,超声波处理(功率250W,频率25kHz)40min,放冷至室温,用甲醇补足减失的量至刻度,摇匀,滤过。精密量取滤液2mL,置于10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得供试品溶液。(4)标准曲线的绘制取适量对照品储备液,配制成浓度依次为10、20、40、60、80、100μg/mL芦丁溶液。按前述色谱条件,精密吸取10μL各浓度溶液注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以芦丁浓度为横坐标,对应峰面积为纵坐标,进行线性回归分析,绘制标准曲线。(5)样品测定吸取供试品溶液10μL,按上述色谱条件,采用工作曲线法测定,计算芦丁的含量。6思考题高效液相色谱仪主要由几部分组成?流动相用什么输送?液相色谱的检测器类型有哪些?哪些是通用型检测器?哪些是选择型检测器?5结果与分析(1)标准曲线及线性范围。按上述色谱条件分析,以对照品浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归,得出标准曲线。(2)分析测得的芦丁色谱图,计算槐花中的芦丁含量。实验七

薄层色谱法测定苏丹红1实验目的(1)掌握薄层色谱法的基本原理。(2)熟悉薄层色谱法的基本操作。(3)样品中苏丹红的测定。薄层色谱法(薄层层析法)的分离原理基于吸附色谱或分配色谱。其操作是将吸附剂(固定相)均匀地铺在玻璃板上制成薄层,把要分离的试样点加在薄层上,然后用合适的溶剂展开。通过化合物自身颜色或显色剂显色后,在板上出现一系列斑点,从而达到分离、鉴定和定量测定的目的。通常用比移值(Rf

)表示溶质(样品)移动和展开剂(流动相)移动的关系。物质间的

Rf

值相差越大,分离效果越理想。良好的分离,比移值应在0.15~0.75,否则应该调换展开剂重新展开。2实验原理3实验材料及设备3.1实验材料辣椒粉:取1.0g样品于试管中,加入3~5mL正己烷,振摇提取2min,静置3min。3.2仪器设备层析缸、高效硅胶G板、毛细管、研钵、铅笔、格尺、容量瓶(100mL)、试管、试管架。3.3试剂及其配制方法正己烷、乙醚、氯仿、苏丹红、甲酸。①苏丹红标准溶液:准确称取苏丹红0.005g,用少量乙醚溶解后,转移至50mL容量瓶中,用正己烷定容至刻度线,摇匀。此溶液浓度为100μg/mL。②展开剂的配制:石油醚-无水乙醚-甲酸(体积比80∶20∶10)4实验步骤(1)薄层板的活化将薄层板置于110℃烘箱中活化30min,取出稍冷后置于干燥器中干燥密封保存,备用。(2)点样在层析板下端1.5cm处,用铅笔轻划水平横线作为起始线,并将点样位置标记为原点。用微量毛细管吸取苏丹红溶液,点样于起始线原点处。每两个样点之间的距离应不小于1cm。若颜色过浅,可重复点样,但需待前次样点自然晾干或用冷风吹干后进行,确保斑点直径控制在1~2mm。(3)展开用石油醚-无水乙醚-甲酸(体积比为80∶20∶10)作为展开剂。待样点干燥后,小心放入已加入展开剂的250mL层析缸中进行展开。点样一端应浸入展开剂0.5cm。观察展开剂前沿上升至距离板上端1cm处时,取出薄层板,立即用铅笔标记溶剂前沿位置。晾干后找出各斑点中心,用尺量出各斑点中心到原点的距离和溶剂前沿到原点的距离,计算各样品的比移值Rf,并定性确定混合物中各物质名称。将实验结果记录在表7-8中。4实验步骤※注意事项:①点样时,点要细,直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上,浓度不可过大,以免出现拖尾、混杂现象。②展开用的层析缸要洗净烘干,放入薄层板之前,要先加展开剂,盖上表面皿,使层析缸内形成一定的蒸气压。5结果与分析(1)用图片记录实验结果。(2)将数据记录在表7-9中。(3)分析样品成分。计算各样品的比移值Rf

并定性确定混合物中各物质名称。6思考题①什么是

Rf,为什么可以利用

Rf来鉴定化合物?②在混合物薄层色谱法实验中,如何判定各组分在薄层板上的位置?③展开剂的高度若超过了点样线,对薄层色谱有何影响?实验八

气相色谱法测定藿香正气水中乙醇的含量1实验目的(1)掌握用气相色谱法测定中药制剂中乙醇含量的方法。(2)熟悉气相色谱定量分析操作方法。藿香正气水为酊剂,由苍术、陈皮、广藿香等十味药组成,制备过程中以乙醇为溶剂。由于制剂中乙醇含量直接影响有效成分的溶出量、杂质的类型与数量,以及制剂的稳定性等关键质量属性,因此《中华人民共和国药典》明确规定需对该类制剂进行乙醇含量测定。乙醇具有挥发性,《中华人民共和国药典》采用气相色谱法测定各种制剂在20℃时乙醇(C2H5OH)的含量(%,mL/mL)。由于中药制剂中并非所有组分都能全部出峰,因此采用内标法定量。色谱条件如下:填充柱或毛细管柱,以直径为0.18~0.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体,柱温为120℃~150℃,流动相为氮气,检测器为氢火焰离子化检测器。2实验原理3实验材料及设备3.1样品藿香正气水(市售)。3.2仪器设备气相色谱仪、微量注射器。3.3试剂无水乙醇、正丙醇。4实验步骤(1)标准溶液的制备精密量取恒温至20℃的无水乙醇和正丙醇各5mL,加水稀释至100mL,混匀,即得。(2)供试品溶液的制备精密量取恒温至20℃的藿香正气水10mL和正丙醇5mL,加水稀释至100mL,混匀,即得。(3)测定法①校正因子的测定:取标准溶液2μL,连续注样3次,记录对照品无水乙醇和内标物质正丙醇的峰面积,可计算校正因子为式中

As———内标物质正丙醇的峰面积;AR———对照品无水乙醇的峰面积;Cs———内标物质正丙醇的浓度;CR———对照品无水乙醇的浓度。取3次计算的平均值作为结果。②供试品溶液的测定:取供试品溶液2μL,连续注样3次,记录供试品中待测组分乙醇和内标物质正丙醇的峰面积,并计算含量式中

Ax供试品溶液峰面积;Cx———供试品的浓度。取3次计算的平均值作为结果。藿香正气水乙醇含量应为40%~50%。6思考题①内标物应符合哪些条件?②实验过程中可能引入误差的因素有哪些?5结果与分析(1)计算校正因子。(2)计算样品中的乙醇含量。实验九

高效液相色谱法测定阿司匹林片剂中乙酰水杨酸含量1实验目的(1)了解高效液相色谱法分离有机化合物的基本原理及操作条件。(2)掌握高效液相色谱仪的基本结构及作用。(3)了解高效液相色谱法测定阿司匹林药片中水杨酸的方法。高效液相色谱法是20世纪70年代迅速发展起来的一项高效、