3.1 重组DNA技术的基本工具课件-高二下学期生物人教版选择性必修3

第三章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具（第一课时）目录/CONTENTS01基因工程的诞生和发展02重组DNA技术的基本工具03DNA的粗提取与鉴定04习题检测学习目标：1.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。2.简述重组DNA技术所需的三种基本工具及其作用，基因工程载体需要具备的条件。3.进行DNA的粗提取与鉴定。旧识回顾优良供体母牛受体母牛受体发情同期发情处理超数排卵处理发情配种或人工受精移植胚胎收集胚胎并检查对受体进行妊娠检查具有优良性状的后代优良公牛冲卵正常繁殖或两三个月后进行另一次移植①②③⑤

④目录01一、基因工程的诞生和发展苏云金杆菌毒蛋白基因毒蛋白杀死害虫棉花细胞抗虫棉的培育什么是目的基因？什么是受体细胞？什么是目的基因的表达产物？基因工程的概念

基因工程是指按照人们的愿望，通过体外_________等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做__________技术。

例如，通过转基因技术，可以实现利用大肠杆菌生产人的胰岛素。在此实例中，目的基因是_______________，受体细胞是_______________，目的基因的表达产物是__________。

转基因重组DNA人胰岛素基因大肠杆菌细胞人胰岛素一、基因工程的诞生和发展1.基因工程的概念

是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做重组DNA技术（转基因技术）。操作对象及环境操作水平操作原理结果基因DNA分子水平赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因重组优点：

①与杂交育种相比：能克服远缘杂交不亲和的障碍；②与诱变育种相比：定向改造生物的遗传特性。理论基础1.DNA的基本组成单位相同(都是四种脱氧核苷酸)2.都遵循碱基互补配对原则3.DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构

理论基础1.基因是控制生物性状的结构与功能单位2.遗传信息传递都遵循中心法则3.生物界几乎共用一套遗传密码1’2’3’4’5’A

腺嘌呤C

胞嘧啶G

鸟嘌呤T

胸腺嘧啶1分子脱氧核苷酸=____________+________________+_________________。1分子磷酸1分子脱氧核糖1分子含氮碱基含Ｎ碱基脱氧核糖磷酸O（氧原子）ATGC3’,5’-磷酸二酯键1951年，剑桥大学的科学家通过数据分析得知，相邻脱氧核苷酸之间的聚合方式——脱水缩合p=OOHO碱基3′2′1′4′CH2OOHHHHHH5′p=OHOOHO碱基3′2′1′4′CH2OHHHHH5′OHOOHH2O磷酸二酯键ATGC3’,5’-磷酸二酯键p=OOHO碱基3′2′1′4′CH2OOHHHHHH5′p=OHOOHO碱基3′2′1′4′CH2OHHHHH5′OHOOHH2O磷酸二酯键化学里，酯键是由一个酸和一个醇发生反应，脱去一分子水形成的化学键，结构是

-COO-

（羧酸酯），而生物大分子里的酯键是磷酸形成的，叫磷酸酯键。在DNA的骨架里，一个磷酸分子，会同时连接两个脱氧核糖分子：

一边和上一个脱氧核糖的3'-羟基（-OH）形成一个磷酸酯键；另一边和下一个脱氧核糖的5'-羟基（-OH）再形成一个磷酸酯键。一个磷酸，形成了两个酯键，所以叫磷酸二酯键。DNA的结构两条单链反向平行链

数：方

向：OCH2OHH磷酸基团碱基3′2′HH1′4′5′HH3′5′5′3′磷酸基团端称作5’-端羟基(-OH)端称作3’-端双螺旋结构结

构：新课导入我国是棉花的生产和消费大国，棉花在种植过程中常常会受到棉铃虫的侵袭，使棉花大量减产，严重时甚至绝收。如果能培育出自身就能抵抗虫害的棉花新品种，就能减少农药污染的解决这一问题。棉花本身不具有“杀虫基因”苏云金杆菌有一种“杀虫基因”如何得到抗虫棉新品种？基因工程实例：基因工程培育抗虫棉抗虫棉的培育有哪些关键步骤？苏云金杆菌提取抗虫基因普通棉花(无抗虫特性)棉花细胞(含抗虫基因)与载体拼接，导入棉花植株(有抗虫特性)表达解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？

分子手术刀、分子运输车、分子缝合针一、基因工程的诞生和发展DNA拼接DNA切割DNADNA导入DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作，是一项非常精细的工作，更需要专门的“分子工具”。那么，科学家究竟用到了哪些“分子工具”这些“分子工具”各具有什么特征呢？一、基因工程的诞生和发展重组DNA技术所需的三种工具：“分子手术刀”准确切割DNA分子“分子缝合针”“分子运输车”将DNA片段连接起来将体外重组好的DNA分子导入受体细胞限制性内切核酸酶DNA连接酶基因进入受体细胞的载体【易错警示】工具酶≠工具目录02二、重组DNA技术的基本工具二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶——“分子手术刀”切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶。（1）来源：（2）种类：主要从原核生物中分离纯化出来迄今分离的限制酶有数千种（限制酶不是一种酶，而是一类酶）二、重组DNA技术的基本工具资料卡—限制酶的命名：用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如，一种限制酶是从大肠杆菌(Escherichiacoli)的R型菌株分离来的，就用字母EcoR表示；如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶，则进一步表示成EcoRI。（3）命名：EcoRⅠEscherichiacoli属名(大写)种名(小写)属名的头一个字母种加词的头两个字母大肠杆菌的R型菌株分离来的R型菌株中分离出来的第一种限制酶练习：粘质沙雷氏杆菌（Serratiamarcesens）中分离的第一种限制酶即_______；SmaⅠ磷酸酯键二、重组DNA技术的基本工具（4）作用：“两个特定”磷酸二酯键切点磷酸二酯键—AGTC——TCAG—5’3’3’5’磷酸二酯键

限制酶的专一性体现在：一种限制酶能够识别双链DNA分子的______________，并且使每一条链中特定部位的两个__________之间的_____________断开。特定核苷酸序列核苷酸磷酸二酯键二、重组DNA技术的基本工具识别序列：大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成；也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。特点1：都可以找到一条中（心）轴线；特点2：中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的，称为回文序列。正向读与另一条链反向读的碱基顺序完全一致（4）作用：中轴线5'5'3'3'限制酶所识别的序列，呈现碱基互补对称。EcoRⅠ限制酶中轴线5'5'3'3'SmaⅠ限制酶大肠杆菌中的一种叫做EcoRI的限制酶，能够专一识别DNA中的__________序列，并在G和A之间将这段序列切开（实质是在____________与______________之间切断磷酸二酯键）。GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸二、重组DNA技术的基本工具SmaI能够专一识别DNA中的___________序列，并在________之间将这段序列切开（实质是在鸟嘌呤脱氧核苷酸与胞嘧啶脱氧核苷酸之间切断磷酸二酯键）。

当限制酶在它识别序列的__________________将DNA的两条链分别切开时，产生的是______末端，而当限制酶在它识别序列的_____________切开时，产生的则是平末端。EcoRI切割DNA产生______末端，SmaI切割DNA产生______末端。GGGCCCG和C中心轴线两侧黏性中心轴线处黏性平二、重组DNA技术的基本工具（5′）黏性末端5′5′平末端5′3′5′3′中心轴线EcoRⅠ5′3′5′3′SmaⅠ二、重组DNA技术的基本工具（5）切割结果：形成________末端

或_____末端黏性平二、重组DNA技术的基本工具（5）切割结果：形成________末端

或_____末端黏性平现学现用：写出下列限制酶切割形成的黏性末端BamHⅠ________EcoRⅠ________HindⅢ________BglⅡ________GATCAATTAGCTGATC*思考：不同种限制酶切出的黏性末端一定不同吗？不同的限制酶也可能切割形成相同的黏性末端。（同尾酶）同种限制酶产生的黏性末端相同，二、重组DNA技术的基本工具请判断：以下黏性末端是由

种限制酶作用产生的。①②③3方法：①找到第一个限制酶的识别序列：

；

②找到切割位点是：

之间二、重组DNA技术的基本工具请结合限制酶的作用特点，回答以下问题：（1）限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？不能（2）请结合右图，推断限制酶切一次可断开

个磷酸二酯键，产生

个游离的磷酸基团，产生

个黏性末端，消耗

分子水。

限制酶只能识别并切开双链DNA分子2222中轴线5'5'3'3'EcoRⅠ限制酶二、重组DNA技术的基本工具【P71旁栏思考题】限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、起防御作用。原核细胞DNA中不存在限制酶的识别序列或能被识别的序列被修饰了。【P74拓展应用1】为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？同尾酶限制酶的识别序列通常为6个核苷酸，也有的为4个核苷酸或8个核苷酸二、重组DNA技术的基本工具（5）切割结果：形成________末端

或_____末端黏性平TCCTAGAATTCCATACAGGATCTTAAGGTATGGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG活动一：模拟使用EcoRI剪切目的基因。（剪刀模拟限制酶）TCCTAGAATTCCATACAGGATCTTAAGGTATGGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG

目的基因黏性末端要想从一个DNA上获得目的基因一般要用限制酶切，切断

个磷酸二酯键，一共产生

个黏性末端？44限制酶作用形成黏性末端过程有出现氢键的断裂，是否需要解旋酶？不需要CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG

切割后的DNA片段放一起，产生的相同的黏性末端可以自然黏合，产生氢键。想一想，如何将目的基因插入到DNA分子中？操作：用同一种限制酶同时切割目的基因和运载体思路：让两者产生相同的黏性末端，如果能让两者的黏性末端黏合起来，就可以合成重组DNA分子。CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG

相邻两个脱氧核苷酸之间的缺口通过“分子缝合针”缝合二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”1.作用：将两个双链DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。

注意：不是连接氢键（氢键的形成不需酶的催化）。GCTTAAAATTCG2.DNA连接酶的种类：种类E·coli

DNA连接酶T4DNA连接酶来源功能特性相同点大肠杆菌T4噬菌体既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端；恢复的都是磷酸二酯键又可以连接双链DNA片段的平末端（但E·coli

DNA连接酶连接平末端的效率远远低于T4DNA连接酶）。二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”（1）连接黏性末端的作用两个DNA片段要具有相同（互补）的黏性末端才能连接起来。把两个DNA片段黏性末端间的缝隙“缝合”起来；，DNA连接酶将两个双链DNA片段“缝合”连接起来，形成一个双链DNA分子，恢复被限制酶切开的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”（2）连接平末端的作用①作用部位②作用底物磷酸二酯键DNA片段★注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的两条单链缺口，但不能连接单链DNA！二、重组DNA技术的基本工具2.

DNA连接酶——“分子缝合针”（3）比较DNA连接酶与DNA聚合酶AATTGAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用C①作用部位②作用底物磷酸二酯键脱氧核苷酸二、重组DNA技术的基本工具旁栏思考（P72）：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？DNA连接酶DNA聚合酶相同点作用实质化学本质不同点模板作用对象作用结果用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质

不需要需要DNA的一条链作模板形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制只能将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条与模板互补的DNA链在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键二、重组DNA技术的基本工具拓展：与DNA相关的几种酶的比较名称作用部位作用结果限制酶

DNA连接酶DNA聚合酶DNA(水解)酶DNA解旋酶磷酸二酯键碱基对之间的氢键将双链DNA分子切成两个片段磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸将双链DNA分子局部解旋为单链1.根据所学知识，完成以下填空：①限制酶②解旋酶③DNA连接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶baA.切断a处的酶为_______

B.连接a处的酶为_______C.切断b处的酶为_______①③②a：磷酸二酯键；b：氢键④二、重组DNA技术的基本工具(1)通过基因工程产生的变异是不定向的(

)(2)限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核苷酸序列()(3)DNA连接酶能将两碱基间通过氢键连接起来()(4)限制酶和解旋酶的作用部位相同()

××××2、怎样才能将Bt蛋白基因送入棉花细胞呢？1、能否直接将目的基因送入受体细胞？

游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，就算可以进行转录并翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。通常是利用质粒作为载体，将基因送入细胞。Bt蛋白基因5’3’3’5’拟核DNA质粒质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。细菌结构示意图二、重组DNA技术的基本工具问题1：目的基因是否可以直接导入受体细胞？为什么？问题2：什么DNA分子可以进入宿主细胞并复制且正常表达？游离的DNA片段进入受体细胞，一般会被直接被分解，就算可以进行转录并翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。大肠杆菌细胞内的质粒二、重组DNA技术的基本工具3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”（1）作用：作为运输工具，与外源/目的基因的DNA片段结合，将重组DNA分子导入受体细胞中。（2）种类：质粒（最常用的载体）动植物病毒噬菌体如：λ噬菌体的衍生物(一种经过人工改造的λ噬菌体,可用于基因工程的载体，遗传物质是DNA,专门侵染大肠杆菌。)二、重组DNA技术的基本工具3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”大肠杆菌及质粒结构模式图真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。①作为运输工具，将外源基因导入受体细胞。②质粒携带外源DNA片段在细胞内大量复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制二、重组DNA技术的基本工具3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”思考：分析归纳载体需要具备的条件：思考1：载体要与外源基因连接，需要具备什么条件？条件①：具有一个或多个限制酶切割位点；（以便与外源基因相连）思考2：要使携带的外源基因在受体细胞中稳定存在，载体需要具备什么条件？条件②：具复制原点，能在受体细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制；（以便提供大量目的基因）问题3：我们用肉眼看不到载体是否进入受体细胞，为了便于筛选重组DNA分子，载体需要具备什么条件？条件③：具有标记基因（便于重组DNA分子的筛选）条件④：载体DNA必须是安全的，对受体细胞无害。质粒（基因工程中最常用的载体）大肠杆菌质粒分子结构模式图用于筛选（1）化学本质：质粒是一种______的、结构简单的、独立于______________或___________________之外，并具有自我复制能力的_________________分子。（存在于细菌或酵母菌中，一个或多个）裸露真核细胞细胞核原核细胞拟核DNA环状双链DNA（2）特点：

具复制原点，能在细胞中独立复制；具一个或多个限制酶切位点；具标记基因，便于筛选；质粒对宿主细胞无影响；（3）基因工程中使用质粒的特点：

在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是天然质粒的基础上进行过_________的；这些质粒上常有特殊的标记基因，便于__________________；人工改造重组DNA分子的筛选二、重组DNA技术的基本工具【核心探讨】标记基因的筛选原理载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。导入受体细胞培养加入氨苄青霉素只有含有载体，并且载体上的抗性基因表达的大肠杆菌才能存活并增殖含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒）标记基因通常有:①抗生素的抗性基因，如:抗氨苄青霉素基因(ampr)、抗四环素基因(tetr)②荧光蛋白基因，如:绿色荧光蛋白基因(GFP)、红色荧光蛋白基因(RFP)

练习1、已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。

（1）则能被限制酶I切割的DNA，______（能/不能）被限制酶II切割；

（2）能被限制酶II切割的DNA，____________（能/不能/不一定能）被限制酶I切割。

（3）DNA1被限制酶I切割，DNA2被限制酶II切割，加入DNA连接酶可得到DNA1和DNA2的重组DNA片段，该重组DNA片段__________（能/不能/不一定能）被限制酶I切割，_______（能/不能/不一定能）被限制酶II切割。能不一定能能不一定

练习1、已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。（3）DNA1被限制酶I切割，DNA1被限制酶II切割，加入DNA连接酶可得到DNA1和DNA2的重组DNA片段，该重组DNA片段__________（能/不能/不一定能）被限制酶I切割，_______（能/不能/不一定能）被限制酶II切割。能不一定—GGATCX——CCTAGX——XGATCX——XCTAGX——G—CCTAGGATCX—

X——GGATCC——CCTAGG—思考：形成一个重组质粒会形成_____个磷酸二酯键？4

练习2、普通的细菌一般是对抗生素______（敏感/不敏感）的，在含有青霉素或四环素的培养基中______（能/不能）生长。如果给普通细菌导入一个含有四环素抗性基因的质粒，四环素抗性基因的____________可使细菌获得抵抗四环素的性状。敏感不能表达产物1.下列关于下图所示黏性末端的说法，错误的是（）A.甲、乙、丙黏性末端是由各自不同的限制酶切割产生的B.甲、乙可形成重组DNA分子，但甲、丙之间不能C.DNA连接酶的作用位点在b处，催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键D.切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子目录03三、DNA的粗提取与鉴定一、提取的基本思路二、实验原理DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。1.提取原理（1）DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。（2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/LNaCl溶液。2.鉴定原理在一定温度下（沸水浴），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。

——DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定三、材料用具1.选材：DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。思考：能否选用牛、羊、马、猪等哺乳动物的红细胞做实验材料？不能，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑；选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。——DNA的粗提取与鉴定试剂作用研磨液体积分数为95%的酒精2mol/L的NaCl溶液二苯胺试剂蒸馏水析出DNA溶解DNA鉴定DNA，要现配现用溶解并提取DNA研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L,从而析出DNA——DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定三、材料用具2.试剂：研磨加酒精析出溶解与鉴定提取上清液取上清液充分研磨纱布过滤离心离心95%冷酒精沉淀丝状物四、实验步骤——DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定——DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定四、实验步骤取材研磨过

滤DNA析出DNA鉴定称取

，切碎，放入研钵，倒入

，

研磨。洋葱研磨液充分问题：如果研磨不充分会对实验结果产生怎样的影响？研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。研磨液成分作用SDS使蛋白质变性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl缓冲液稳定DNA取材研磨过

滤DNA析出DNA鉴定称取

，切碎，放入研钵，倒入

，

研磨。洋葱研磨液充分DNA的粗提取与鉴定四、实验步骤破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量研磨效果好（有利于充分研磨）(4)研磨不宜太用力(1)研磨的目的：(2)研磨时间不宜太长：(3)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶——DNA的粗提取与鉴定取材研磨过

滤DNA析出DNA鉴定在漏斗中垫上

过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取

；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取

。纱布上清液上清液问题1：过滤能用滤纸代替吗？不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。问题2：上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？可能含有核蛋白、多糖等杂质四、实验步骤——DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定DNA析出DNA鉴定取材研磨过

滤在上清液中加入体积相等的

溶液,静置2~3min，溶液中出现的

就是粗提取的DNA。预冷的酒精白色丝状物问题1：此步骤的目的是？使蛋白质等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。问题2：酒精预冷的作用？①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。问题3：搅拌时应轻缓、并沿一个方向目的？减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子四、实验步骤——DNA的粗提取与鉴定四、实验步骤DNA析出DNA鉴定取材研磨过

滤将丝状物或沉淀物溶于

溶液中，加入

试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。二苯胺2mol/L的NaCl加入2mol/L氯化钠溶液不加入丝状物加入4ml二苯胺试剂加入2mol/L氯化钠溶液加入丝状物加入4ml二苯胺试剂实验组对照组水浴加热评价结果：（1）DNA纯度：看提取物颜色（2）DNA的量：看与二苯胺反应颜色的深浅五、结果分析与评价

二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等。1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？

观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多。——DNA的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定五、结果分析与评价2.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。实验结果不明显的可能原因：①材料中的核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。③二苯胺最好现用现配，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。——DNA的粗提取与鉴定【拓展探究】1.如果选用鸡血细胞进行实验，如何快速破碎细胞？将鸡血细胞置于蒸馏水中，待细胞涨破后，收集滤液。利用蛋白酶分解杂质蛋白，不分解DNA，有利于DNA与蛋白质分开。

进一步纯化DNA——用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。2.有时会在DNA滤液中添加嫩肉粉（木瓜蛋白酶），这样有什么好处？3.有时还会反复利用不同浓度的N