鸡屎藤抗氧化活性部位的筛选

综述鸡屎藤REF_Ref14727\n\h[1]Paederiascandens(Lour)Merr.(PsM)作为茜草科传统药用植物，其药用价值在中医和民间医学中应用已久。鸡屎藤REF_Ref11702\r\h[2]在世界上分布于越南、印度、尼泊尔、不丹、孟加拉国、缅甸、老挝、柬埔寨、马来西亚、印度尼西亚、朝鲜、日本等国家。在中国，主要分布于秦岭南坡以南的各省区及台湾，鸡屎藤REF_Ref12388\r\h[3]全草及根皆可入药，临床应用广泛。其核心功效涵盖祛暑利湿、消积解毒，临床可用于调理中暑、风湿痹痛、食积、小儿疳积、痢疾、黄疸、肝脾肿大、瘰疬、肠痈、脚气、烫伤、湿疹、皮炎、跌打损伤、蛇虫咬伤等病症。以配伍应用为例，鸡屎藤与络石藤联合可用于风湿关节痛的治疗；与百部、枇杷叶同用适用于慢性气管炎的调理；取鲜叶捣烂外敷，对带状疱疹、热疖肿毒、跌打肿痛及毒蛇咬伤等症具有治疗作用。此外，鸡屎藤水煎馏液有镇痛作用，其醇制剂有降压作用，印度产鸡屎藤提取物有类似可的松样作用。现有研究显示REF_Ref21258\r\h[4]，鸡屎藤提取物具备一定抗氧化能力。鸡屎藤化学成分复杂，目前已分离鉴定的活性成分主要涵盖酚酸类、黄酮类、萜类及挥发油成分。其中，酚酸类REF_Ref15003\r\h[5]化合物作为植物中常见抗氧化成分，可通过清除自由基、抑制氧化酶活性发挥作用；黄酮类REF_Ref18019\r\h[6]化合物具有较强自由基清除能力，并能通过调控Nrf2/ARE信号通路增强细胞抗氧化防御系统；萜类化合物REF_Ref21173\r\h[7]兼具抗氧化与抗炎双重作用，其抗氧化机制可能与抑制脂质过氧化反应相关。近年来，随着天然抗氧化剂研究的兴起，鸡屎藤抗氧化活性成为热点，而抗氧化活性部位筛选是开发其药用价值的关键。国内外学者围绕此开展了广泛研究，本文综述鸡屎藤抗氧化活性部位筛选方法，以期为相关研究提供参考。国内外研究动态国内研究REF_Ref18119\r\h[8]聚焦于鸡屎藤抗氧化活性成分的提取工艺优化与活性评价。国内学者REF_Ref22297\r\h[9]利用化学发光法、分光光度法等技术系统评价发现，鸡屎藤提取物对羟基自由基、DPPH自由基等均有显著抑制效果。国外REF_Ref18978\r\h[10]对鸡屎藤的研究虽起步较晚但近年逐渐增多，主要围绕活性成分分离鉴定及抗氧化机制展开。研究者REF_Ref22443\r\h[11]通过HPLC、质谱等色谱技术，从中分离并鉴定出黄酮类、酚酸类、生物碱类等多种抗氧化成分，证实其通过直接清除自由基、螯合金属离子等多重机制发挥作用，为医药和食品领域应用提供了理论支撑。通过对国内外研究的对比分析，国内鸡屎藤抗氧化活性部位筛选研究聚焦于提取工艺优化、多模型活性评价及产地差异分析，并通过柱层析、LC-MS等技术分离鉴定活性成分；国外研究起步较晚，侧重成分鉴定（黄酮、萜类）与机制初探（自由基清除、脂质过氧化抑制），提取技术偏向超临界萃取等前沿方法，但整体研究深度与系统性弱于国内。依据国内外研究现状，鸡屎藤不同极性部位抗氧化活性部位筛选研究比较少，为了科学的筛选鸡屎藤抗氧化活性部位，开展了本次研究。l.2本选题的创新性和研究意义

本研究以鸡屎藤抗氧化活性部位筛选为核心，现有研究REF_Ref21800\r\h[11]多关注粗提取物的抗氧化活性，而本研究的创新点在于系统比较了不同极性部位（石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位）的抗氧化能力，弥补了传统研究对部位细分不足的局限，通过差异化的研究视角、跨学科的方法整合与多维度的价值挖掘，既突破该物种现有研究的局限性，也为传统中药的现代化研究提供方法论借鉴。研究成果不仅有望揭示鸡屎藤的抗氧化物质基础与作用机制，更将为天然抗氧化剂开发、中药资源利用及质量评价体系优化提供科学依据与技术路径，兼具学术创新性与产业应用前景。该研究传统药物与现代抗氧化机制的深度关联，鸡屎藤虽在传统医学中应用广泛，但其抗氧化活性成分REF_Ref22182\r\h[12]的系统筛选与机制解析仍属新兴领域。在理论价值的研究方面的意义有利于完善传统药物现代化研究体系，通过科学手段验证鸡屎藤抗氧化活性的物质基础，为其他民间草药的研究提供了方法论参考，推动中医药理论的科学化阐释，拓展天然抗氧化剂资源库，丰富天然抗氧化剂的化学多样性，为新药物REF_Ref22251\r\h[13]的发现提供了先导化合物。

在应用价值的研究意义，有利于天然抗氧化REF_Ref22711\r\h[14]产品开发，鸡屎藤提取物可作为食品防腐剂、功能性饮料添加剂或抗衰老护肤品原料，替代合成抗氧化剂（如BHT、BHA），满足消费者对“天然、安全”产品的需求。有疾病防治潜力，针对氧化应激相关疾病（如糖尿病、阿尔茨海默病），鸡屎藤活性成分REF_Ref22551\r\h[15]可通过调节氧化还原平衡发挥辅助治疗作用，并且为创新药物研发提供候选分子。

在研究特色与突破点有，可以解决行业痛点，合成抗氧化剂存在安全性质疑，天然抗氧化剂活性部位的筛选，提供天然、低毒的抗氧化剂替代方案，减少化学合成品引发的健康风险。理论依据和技术模板，同时助力大健康产业升级，兼具学术前瞻性与实践指导意义。

实验内容2.1实验材料2.1.1实验原料实验原料为鸡屎藤，于2024年6月采摘，在湘南学院后山的阴湿地采摘，经过湘南学院药学院刘芳老师鉴定后，确定为茜草科鸡屎藤属蔓生草本植物。采摘后的鸡屎藤经过清洗去杂、沥干、低温烘干（40-50℃）干燥，于干燥、通风、阴凉处储存。2.1.2实验试剂与仪器表1实验仪器一览表仪器生产厂家型号旋转蒸发仪郑州长城科工贸有限公司N-1300-DW-B水浴锅郑州长城科工贸有限公司WB-2000电子调温电热套上海力辰西仪器科技邮箱公司DZTW分级连续投喂粉碎机温州顶力医疗器械有限公司DLF-20电热鼓风干燥箱上海一恒科学仪器有限公司DHG-9123AIModel实验室超纯水仪上海和泰仪器有限公司ModelMD酶标仪湖南力辰科技邮箱公司M2中文液晶超声波清洗器昆山美美超声仪器有限公司KM-500DE电子天平岛津菲律宾工厂AW120D表2实验试剂一览表试剂纯度生产厂家批号无水乙醇AR湖南汇虹试剂有限公司202312012过硫酸钾AR湖南汇虹试剂有限公司202211284磷酸二氢钠AR北京鼎国昌盛生物科技有限公司20250224过氧化氢AR深圳必达环保科技有限公司B62482BA水杨酸AR天津市科密欧化学试剂有限公司Q12/HB七水硫酸亚铁AR天津市北辰方正试剂厂B2107232六水合三氯化铁AR西陇化工有限公司B2210207三氯乙酸AR西陇化工有限公司2211261铁氰化钾AR广州化学试剂厂8506034DPPHAR合肥博美生物科技有限责任公司RY393054ABTSAR合肥博美生物科技有限责任公司AK112915L-抗坏血酸AR上海易恩化学技术有限公司RH187667无水磷酸氢二钠AR国药集团化学试剂有限公司20140820三氯甲烷AR衡阳市凯信化工试剂股份有限公司20201104正丁醇AR天津市致远化学试剂有限公司20160309乙酸乙酯AR成都市科龙化工试剂厂202901082.2实验方法2.2.1鸡屎藤提取物的制备鸡屎藤若干，粉碎，取200克于5000ml圆底烧瓶中，加入2升75%乙醇适量，充分混匀后，用冷凝回流连续提取两次，让有效成分充分被提取，提取温度为50℃，冷凝回流提取60min。用布氏漏斗进行趁热抽滤，并将两次滤液进行合并，并用旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，得到鸡屎藤膏状提取物。2.2.2鸡屎藤各极性部位的萃取将鸡屎藤膏状提取物用纯净水稀释至300ml，接下来，在室温（20-25℃）下，添加等体积的石油醚，封闭分液漏斗颠倒混匀1分钟，静置10分钟待分层后，分离水层与石油醚层，每次均向留存水层加留存水层等体积的石油醚，首先对石油醚层进行七次重复操作直至其呈无色状态，进而获取石油醚萃取物。接下来，向水层中加入等体积的三氯甲烷，待静置分层后分离两层液体，如此操作四次直至三氯甲烷层变为无色，得到三氯甲烷萃取物。随后，在水层中加入等体积的乙酸乙酯，静置分层后进行分离，重复此操作四次以获取乙酸乙酯萃取物。最后，向水层内加入等体积的正丁醇，静置分层后分离，通过五次重复操作得到正丁醇萃取物。剩下的为水层萃取物，将各层萃取物蒸发浓缩。并将各萃取部位用75%的乙醇定容成不同的浓度梯度，1000µg/mL、500µg/mL、250µg/mL、125µg/mL、62.5µg/mL和31.25µg/mL。2.2.3反应试剂溶液的配制表3各类反应试剂的配置试剂配置方法0.2mMDPPH溶液准确称取5.00

mg

DPPH自由基粉末，以无水乙醇为溶剂定容至64

mL，避光条件下储存备用。0.9mmol/LFeSO4溶液称取0.125

g七水合硫酸亚铁（FeSO₄·7H2O）并溶解于蒸馏水，定容至50

mL。9mmol/L水杨酸溶液将0.12

g水杨酸溶解于无水乙醇，以无水乙醇定容至100

mL。7mMABTS+溶液精密称量ABTS粉末192.00mg，在用蒸馏水在避光条件下定容至10mL，保存备用4.96mMK2S2O8溶液用蒸馏水溶解25.00mg的K2S2O8，定容至94mL9mmol/L的H2O2溶液量取了90µg的30%H2O2溶液，用蒸馏水定容至100mL1mg/mL的Vc标准溶液精密称取10.00mgVc粉末，用蒸馏水溶解，定容至10mL1%三氯乙酸精密称取1.00g三氯乙酸，用用蒸馏水溶解，定容到100mL1%铁氰化钾精密称取1.00g铁氰化钾，用用蒸馏水溶解，定容到100mL2.2.4鸡屎藤不同极性部位提取液的DPPH自由基清除率的测定参考文献REF_Ref23753\r\h[16]，维生素C作为阳性对照。取鸡屎藤不同极性部位不同梯度提取液（1000µg/mL、500µg/mL、250µg/mL、125µg/mL、62.5µg/mL和31.25µg/mL）测定其DPPH自由基清除率。表4DPPH自由基清除实验各吸光度的测定吸光度样品溶液A0100µLDPPH自由基乙醇溶液＋100µL75%乙醇溶液A1100µL鸡屎藤不同极性部位不同浓度提取液＋100µLDPPH自由基乙醇溶液A2100µL鸡屎藤不同极性部位不同浓度提取液＋100µL无水乙醇测定条件：将样品充分混匀后，于避光条件下静置30分钟，在96孔板内使用酶标仪于517nm波长处测定吸光度值。针对鸡屎藤不同极性部位的不同浓度样品，需进行3次平行测定，其计算方式如公式（1）所示：DPPH自由基清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100%

（1）2.2.5鸡屎藤不同极性部位提取液ABTS+清除率的测定参考文献REF_Ref24184\r\h[17]，取鸡屎藤不同极性部位不同浓度梯度的提取液（1000µg/mL、500µg/mL、250µg/mL、125µg/mL、62.5µg/mL和31.25µg/mL）测定其ABTS+清除率。取4mLABTS+(7mM）溶液于4mLK2S2O8（4.96mM）溶液避光过夜反应12至16个小时制备ABTS+溶液，使用前将ABTS+用无水乙醇稀释，使其在波长734nm处获得为0.7000+0.0200的吸光度值。并且参考文献，以维生素C作为阳性对照。表5ABTS基清除实验各吸光度的测定吸光度样液A0100µLABTS+自由基溶液＋100µL水溶液A1100µL鸡屎藤不同极性部位不同浓度提取液＋100µLABTS+自由基溶液A2100µL鸡屎藤不同极性部位不同浓度提取液＋100µL水溶液测定条件如下：在96孔板中充分混匀样品，随后避光静置30分钟，借助酶标仪于734nm波长处测定吸光度值。针对鸡屎藤不同极性部位的不同浓度样品，需平行测定3次，其计算公式如（2）所示：ABTS自由基清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100%

（2）2.2.6鸡屎藤不同极性部位提取液羟基自由基抑制率的测定以维生素C作为阳性对照REF_Ref31387\r\h[18]，取鸡屎藤不同极性部位不同梯度提取液（1000µg/mL、500µg/mL、250µg/mL、125µg/mL、62.5µg/mL和31.25µg/mL）测定各浓度下羟基自由基的抑制率。体系1：取1

mL过氧化氢溶液（8.8

mmol/L）与1

mL硫酸亚铁溶液（9

mmol/L）混合均匀，加入1

mL水杨酸乙醇溶液（9

mmol/L），于37℃恒温水浴反应15分钟。体系2：取1

mL硫酸亚铁溶液（9

mmol/L）与1

mL水杨酸乙醇溶液（9

mmol/L）混合，在37℃恒温水浴中反应15分钟。表6羟基自由基清除实验各吸光度的测定吸光度样品溶液A0100µL体系1＋100µL75%乙醇溶液A1100µL鸡屎藤不同极性部位不同浓度提取液＋100µL体系1A2100µL鸡屎藤不同极性部位不同浓度提取液＋100µL体系2测定条件：在96孔板内将样品充分混匀后，使用酶标仪于510

nm波长处测定吸光度值。鸡屎藤醇提液中不同极性部位的不同浓度样品需平行测定3次，其计算公式如（3）所示：羟基自由基清除率（%）=[1-（A1-A2）/A0]×100%

（3）2.2.7鸡屎藤提取液不同极性部位总还原力的测定参考文献REF_Ref31214\r\h[19]，以维生素C作为阳性对照。取鸡屎藤不同浓度梯度的提取液（1000µg/mL、500µg/mL、250µg/mL、125µg/mL、62.5µg/mL和31.25µg/mL）测定其总还原力。各取不同梯度的提取液1ml，分别加入2ml，2mol/ml的PBS溶液和2ml1%的K3Fe(CN)6混匀，首先在50℃水浴环境下加热反应30分钟，反应结束后迅速冷却，接着加入2

mL

1%三氯乙酸溶液并混匀。随后，依次加入2

mL蒸馏水和0.5

mL

0.1%

FeCl₃溶液，充分混匀后继续反应10分钟，最后在700

nm波长处测定吸光度值A1。另取样品加入2.5

mL蒸馏水，混匀静置10分钟后，在相同波长下测定吸光度A2。参考相关文献，以蒸馏水作为空白对照调零，维生素C（Vc）设置为阳性对照组。表7总还原力实验各吸光度的测定吸光度样品溶液A1200µL加0.1%FeCl₃的样品液A0200µL加蒸馏水的样品液鸡屎藤醇不同极性部位不同浓度的样品平行测定三次，其计算如（4）公式所示：总还原力的计算公式：A=A1-A2（4）2.3统计学处理方法实验数据运用SPSS、Excel、Origin等软件完成处理，其中涵盖统计分析。、图像绘制及相关性分析等操作。所有实验数据均重复测定3次，最终结果以均值表示。实验结果表8鸡屎藤不同极性部位不同浓度DPPH自由基清除率的测定浓度（µg/mL)维生素C（%）石油醚（%）三氯甲烷（%）乙酸乙酯（%）正丁醇（%）水相（%）31.2574.51.514.8537.55157.6462.579.568.7920.3447.2418.359.1812588.7313.734.4157.452412.3625089.0523.0670.7577.9336.1414.5650091.1136.2284.5884.2950.1320.7100093.5358.5693.8996.2867.5127.3图1鸡屎藤不同极性部位不同浓度梯度的DPPH自由基清除率表9鸡屎藤不同极性部位不同浓度ABTS自由基清除率的测定浓度（µg/mL)维生素C（%）石油醚（%）三氯甲烷（%）乙酸乙酯（%）正丁醇（%）水相（%）31.2595.837.3615.8883.3247.4229.8662.597.1515.7922.9589.3568.6532.1112598.7337.734.4191.4574.2234.3625099.0551.0660.7593.5381.5448.34500100.0166.2274.5895.6985.1391.041000105.1378.5683.8998.8490.5195.35图2鸡屎藤不同极性部位不同浓度梯度的ABTS自由基清除率表10鸡屎藤不同极性部位不同浓度总还原力的测定浓度（µg/mL）维生素C（%）石油醚（%）三氯甲烷（%）乙酸乙酯（%）正丁醇（%）水相（%）31.2555.074.715.7513.776.484.7462.569.939.1612.6119.067.178.9812587.1319.4820.0432.3811.9612.5625098.3733.0643.4156.7918.2614.76500105.3441.2271.0291.1131.3520.471000112.4557.5388.04103.7847.9024.43图3鸡屎藤不同极性部位不同浓度梯度的总还原力表11鸡屎藤不同极性部位不同浓度羟基自由基的清除率测定浓度（µg/mL)维生素C（%）石油醚（%）三氯甲烷（%）乙酸乙酯（%）正丁醇（%）水相（%）31.2573.634.873.8419.768.176.9362.576.177.1514.5321.549.169.0812577.9610.7517.6629.7111.239.9825089.5814.8324.5434.4518.2611.7850096.6117.6626.4439.7714.7115.04100098.8524.8132.9444.9417.5723.94图4鸡屎藤不同极性部位不同浓度梯度的羟基自由基清除率4结果讨论根据图1和表8的数据进行分析，鸡屎藤各极性部位对DDPH自由基清除率作用均能被显著观察到，经计算石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相的IC50（半数抑制浓度）分别为798.42µg/mL、197.15µg/mL、98.32µg/mL、1002.31µg/mL，通过对比乙酸乙酯相的IC50最低，对DPPH自由基的清除能力最优，且各部位清除能力均随浓度升高而增强。根据图2和表9分析，各极性部位对ABTS自由基清除能力能被显著观察，经计算其石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相，水相的IC50（半数抑制浓度）分别为240.08µg/mL、199.09µg/mL、5.88µg/mL、35.05µg/mL、259.71µg/mL，因此对ABTS自由基清除能力最强的仍为乙酸乙酯部位。根据图3和表10分析，乙酸乙酯部位的总还原力最高，其次为三氯甲烷和石油醚部位，正丁醇与水相的总还原力较低（均低于50%）。分析图4和表11可知，羟基自由基清除率以乙酸乙酯部位最强，但所有的极性部位清除率均低于50%，清除能力相对较弱。综上，乙酸乙酯相的清除率能力最强，抗氧化能力最高，经查阅文献REF_Ref22443\r\h[20]，乙酸乙酯相抗氧化活性最高，可能与黄酮成分富集有关，因为黄酮类化合物在极性溶剂乙酸乙酯中的溶解度大。羟基自由基组实验数据未达预期，可能是因为羟基自由基半衰期短、反应体系没有避光等。可以在试验过程中缩短反应时间、精准控制条件、适当提高Fe2+和H2O2浓度，避光操作以稳定自由基生成。该研究存在局限性，因为研究活性研究单一，仅采用体外试验，未验证细胞或动物模型活性。未来的研究方向建议进行活性成分的鉴定，构建细胞、动物多层次活性评价体系。5结论鸡屎藤作为一种传统的药用植物，有很高的药用价值。本实验以鸡屎藤为原料，依次用石油醚、三氯甲烷、正丁醇，无水乙醇萃取，得到不同极性部位的萃取液，使用四种不同的检测方法检测鸡屎藤不同极性部位的抗氧化活性，研究结果显示，75%乙醇鸡屎藤提取物中，其乙酸乙酯萃取液的抗氧化活性表现最优。针对乙酸乙酯萃取部位，不同浓度梯度的各抗氧化指标均呈现出相应的活性特征，指标的清除率均大于50%，且清除率随着浓度的增加而增大，呈现剂量相关性。故乙酸乙酯萃取部位为最适的抗氧化活性部位。参考文献黄泽,杨春亮.不同干燥方式对鸡屎藤中酚类代谢物及抗氧化活性的影响[J].南方农业学报,2024,55(07):1992-2005.陈冉,雷雨彩,赵柳双,等.正交试验优化鸡矢藤总环烯醚萜苷的提取工艺[J].广州化工,2024,52(14):49-52.史锐,王琪瑶,黄晓彤,等.HPLC法测定不同产地鸡屎藤叶中鸡屎藤苷、鸡屎藤苷酸含量[J].现代盐化工,2023,50(04):32-34.贤景春,赖秋河,陈明真.鸡屎藤总黄酮提取及其抗氧化性分析[J].南方农业学报,2013,44(12):2071-2074.黄泽,杨春亮.不同干燥方式对鸡屎藤中酚类代谢物及抗氧化活性的影响[J].南方农业学报,2024,55(07):1992-2005.张国燕,陈海娟,马永贵,等.荨麻总黄酮提取工艺的优化及体外抗氧化活性研究[J].中国野生植物资源,2024,43(12):43-51.徐雯娟.