木薯脱毒种茎生产技术规程

2木薯脱毒种茎生产技术规程本文件规定了木薯脱毒种茎的外植体培养、脱毒、组织培养、繁育基地建设、移栽与田间管理、收获与贮藏、生产档案管理等技术要求。本文件适用于木薯脱毒种茎生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5084农田灌溉水质标准GB8321（所有部分）农药合理使用准则GB15618土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准（试行）GB/T28096木薯细菌性萎蔫病菌检疫鉴定方法NY/T356木薯种茎NY/T496肥料合理使用准则通则NY/T2046木薯主要病虫害防治技术规范NB/T10065木薯种茎贮藏与处理技术规程DB46/T606木薯园草害防控技术规程3术语和定义3.1木薯健康种茎Healthycassavaseedstems经过严格控制的繁殖过程，确定不携带病、虫，可用于生产的木薯种茎。3.2外植体explant从活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。4外植体准备4.1种茎选择应满足以下要求：——符合NY/T356要求；——符合待生产品种主要特征特性要求。4.2外植体培养选择的健壮种茎，在防虫网室或者大棚内栽植培养到植株高度30cm左右。5脱毒5.1外植体选择选取健壮植株的嫩芽，长度2cm～3cm。35.2外植体表面清洗、消毒将嫩芽置于流动清水中冲洗3min～5min，在洁净环境中用75%体积比酒精溶液浸泡10s～15s，无菌水冲洗1～2次，再用1%～2%有效氯的次氯酸钠溶液消毒8min～10min，最后用无菌水冲洗4～5次，用灭菌纸吸去表面水分。5.3热处理将处理后的嫩芽放入恒温培养箱中，在48℃±0.5℃条件下处理60min～90min。处理过程中确保材料受热均匀。5.4茎尖剥离经热处理后的嫩芽，切取茎尖约0.5cm，在体视镜下用无菌解剖刀小心逐层剥离外层，直至露出长约0.3mm～0.5mm的茎尖，然后更换为无菌且未使用过的解剖刀将茎尖材料切下，立即接种于初代培养基中。5.5病毒检测5.5.1检测对象经脱毒后的初代组培材料。5.5.2检测病毒种类本文件检测病毒包括木薯细菌性萎焉病和斯里兰卡木薯花叶病毒病。5.5.3检测方法木薯细菌性萎焉病按照GB/T28096方法执行，斯里兰卡木薯花叶病毒病可采用酶联免疫吸附测定（ELISA）或分子检测（如PCR）等方法进行检测。5.5.4脱毒材料确认经检测不携带检测病毒的木薯组培材料即被确认为脱毒材料。5.5.5不合格材料处理不合格材料应在121℃、101kPa灭菌30min后再废弃。6组织培养6.1增殖培养将脱毒材料初代培养诱导形成的幼芽或丛生芽，转接到增殖培养基中进行培养。增殖培养周期为30d～45d，增殖数量根据需求确定。从初代培养算起，增殖总代数不超过10代。6.2生根培养将增殖的腋芽茎段接种到生根培养基中，培养20d～30d后幼苗基部长出新根。6.3组培苗炼苗6.3.1室内炼苗将生根完成的组培苗连同培养容器移至人工气候室或光照培养箱，在温度25～28℃、光照强度2000lux～3000lux、每日光照12h～14h条件下，逐步打开瓶盖或封口膜锻炼5d～7d，使幼苗适应有菌环境。6.3.2大棚炼苗将经室内炼苗的幼苗取出，洗净根部培养基，移栽到由草炭、蛭石、珍珠岩（体积比约2:1:1）等配制的无菌基质穴盘中。置于防虫大棚内，保持温度20～30℃、相对湿度70%～85%，前期适度遮阴，后期逐渐增加光照。炼苗15d～20d，待幼苗长出新根和新叶，生长健壮后，即可移栽。47繁育基地建设7.1基地条件7.1.1土壤环境及条件土壤环境应符合GB15618要求。土壤耕作层厚度≥50cm，排灌方便，适宜农机作业。7.1.2气候条件无霜期≥10个月，年均温度≥15℃,年均降雨量1000mm～2500mm。7.1.3隔离条件应选择生态隔离条件好的区域，周边1km范围内不应种植其他木薯。7.1.4前作要求前作不宜为木薯，宜与花生、大豆等作物进行轮作。7.2整地一犁二耙，犁地深度≥30cm，犁地后晒地≥15d，然后耙碎耙匀耙平。8移栽与田间管理8.1移栽8.1.1时间在当地气温稳定、雨季来临前后，宜选择阴天或晴天的傍晚进行。8.1.2株行距单秆直立品种60cm×80cm，中位分支品种80cm×80cm，低位分支品种100cm×100cm。8.2田间管理原则8.2.1水肥管理使用的水、肥应符合GB5084、NY/T496要求。以基肥为主，追肥为辅。移栽成活后（约4周可结合灌溉或降雨追施提苗肥。生长中期视苗情追施壮秆肥。提倡测土配方施肥和施用腐熟有机肥。8.2.2病虫草害防控坚持“预防为主，综合防治”的植保方针。以农业防治为基础，协调运用物理防治、生物防治和化学防治措施。化学农药的使用应符合GB8321的规定，按照NY/T2046和DB46/T606执行，注意轮换用药和安全间隔期。9收获与储藏9.1收获9.1.1收获时间霜冻来临之前，上部叶色转黄，下部老叶脱落，中下部茎杆老熟，即可开始收获种茎。9.1.2质量标准应符合NY/T356中关于种茎质量的要求，且不携带5.5.2规定的病毒。9.1.3收获方法按照NY/T356进行种茎分级，每捆种茎长度一致、数量相同。59.2贮藏按照NB/T10065要求执行。不同品种、不同批次的种茎分开贮藏并清晰标识。贮藏期间定期检查，确保温度15～18℃,相对湿度≥85%。10生产档案管理生产档案按照附录A的要求记录，所有生产档案应指定专人管理，记录应