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22ThetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgarisI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的本文件主要起草人：张东鸣、陈玉珂、蔺丽丽、王秋举、郭志欣、刘洪建、赵云龙、高永1小球藻发酵培养技术规范4仪器设备与耗材b)恒温干燥箱，不低于2000W；d)高速离心机，转速不低于5000r/min，离心体积不小于50025培养基5.1扩大培养用BG-11培养基，主要成分见表1。配制体积(mL)工作液体积(mL)22324251贮存液1用2mol/L的NaOH调pH到7.4～8.0;贮存液2易生菌，高压灭菌后保存于4℃;“贮存液6为保种时用，平时培养可不加。5.2发酵培养的培养基主要成分见表2。123456CaCl₂母液783小球藻纯度≥99.99%。无菌环境下，将已无菌的600mLBG-11培养基装入1L已灭菌处理的玻璃三角烧瓶中，然后将200mL密度达到10⁶ind/mL的小球藻接种于BG-11培养基中。pH6.5,培养温度28℃,充气量1.5L/min,培养时间为96h。在50L发酵罐中进行发酵培养，接种量为10%,将3L扩大培养的小球藻藻种接入27L发酵装料体积30L,温度28℃,搅拌速度150r/min～300r/min,发酵时间96h。在发酵培养达36h时向发酵罐内补充30g/L葡萄糖；在发酵培养达60h时向发酵罐内补充10g/L尿素，培养至满96h结束。取8mL藻液装入10mL离心管中以8000r/min离心10min,弃上清，再用蒸馏水混悬藻泥，离心弃上清，重复三遍。将藻泥用少量蒸馏水洗入预先称重的培养皿中敞口置于80℃烘箱中烘至恒重，培养体积较大时可通过加入絮凝剂絮凝，过滤后干燥

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