西洋参煮散剂制备工艺研究

方法：通过多成分含量测定对西洋参饮片及过药典1-7号筛的西洋参饮片粉末进行提总皂苷，总黄酮，总多糖提取率之和的影响，通过酶标仪，利用香草醛-高氯酸法，苯酚-硫酸法，亚硝酸钠-硝酸铝法分别测定西洋参的总皂苷，总多糖，总黄酮含利用响应面分析法(ResponseSurfahnken)试验设计原理，采用三因素三水平考察西洋参煮散Objective:TostudytheoptimalextractionproPanacisQuinquefoliiRadixandthepowdepassedthesieveNo.1-7ofthepharmacopoeia,toobtaintheoptimumcrushingstrength;onthisbasis,theeffectsofthreextractiontime,ontheextractionrateoftotalsaponins,totalpolysaccharidesinPanaxquinquefoliumwereinvestigatedbysinglefacThecontentsoftotalsaponins,totalpolysaccharidesandtotalflavonoidsinquinquefoliumweredeterminedbyvanillinperchloricacidmethod,phenol(Box-Benhnken)theprincipleofexperimentaldesign,threefactorsandthreelevelswereTakingthecontentsoftotalsaponins,totalpolysaccharidesandtotalflavonoKeywords:Americanginseng;Pr学术声明 错误!未定义# I I 5 51.1实验材料 51.1.1实验仪器 51.1.2实验试剂 6 71.2.1总皂苷含量测定 71.2.1.1标准溶液的制备 71.2.1.2供试品溶液的制备 71.2.1.3含量测定 71.2.2总多糖含量测定 81.2.2.1标准溶液的制备 81.2.2.2供试品溶液的制备 81.2.2.3含量测定 81.2.3总黄酮含量测定 91.2.3.1标准溶液的制备 91.2.3.2供试品溶液的制备 91.2.3.3含量测定 91.2.4综合评分计算 91.2.5粉碎力度的考察 91.2.5.1样品制备 91.2.5.2总皂苷含量测定 1.2.5.3总多糖含量测定 1.2.5.4总黄酮含量测定 1.2.6单因素实验 1.2.6.1加水倍量的考察 1.2.6.2浸泡时间的考察 1.2.6.3提取时间的考察 1.2.7响应面设计 2.1.1总皂苷含量测定结果 2.1.2总多糖含量测定结果 2.1.3总黄酮含量测定结果 2.1.4综合评分计算结果 132.2单因素实验结果 2.2.1加水倍量考察实验结果 2.2.2浸泡时间考察实验结果 2.2.3提取时间考察实验结果 2.3响应面分析实验结果 2.3.1实验设计方案及结果 182.3.2回归拟合与分析 192.3.3响应面结果分析 202.3.4最佳工艺的预测与验证 24 苏里州和威斯康星州地区。中国于20世纪80年代后期引种栽培，目前黑龙江、不如中药汤剂13,这也导致大众渐渐忽略了这一剂型，但有研究表明中药煮散剂也有研究利用单因素实验结合正交试验考察总多糖及总皂苷的最佳提取工艺81,液中总皂苷、总多糖、总黄酮含量的影响来确定西洋参煮散剂的最佳制备工艺。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验仪器型号厂家高速粉碎机中辕仪器有限公司电子天平常熟市意欧仪器仪表有限公司电热恒温水浴锅上海博迅医疗生物仪器股份有限公司电热鼓风干燥箱上海博迅实业有限公司医疗设备厂中山市雕牌电器有限公司保定市倚天超声波科技有限公司上海安亭科学仪器厂多功能微孔板分析仪药典筛1-7号浙江上虞市道墟仪器筛具厂1.1.2实验试剂药品与试剂生产批号厂家西洋参饮片人参皂苷Re标准品甲醇(分析纯)高氯酸(分析纯)冰醋酸(分析纯)无水葡萄糖标准品6390安徽益生源中药饮片科技有限公司上海源叶生物科技有限公司天津新通精细化工有限公司上海麦克林生化科技有限公司天津政成化学制品有限公司广东光华科技股份有限公司上海源叶生物科技有限公司苯酚(分析纯)硫酸(分析纯)芦丁标准品无水乙醇(分析纯)亚硝酸钠硝酸铝(分析纯)氢氧化钠(分析纯)67218北京化工厂成都市科隆化学品有限公司上海源叶生物科技有限公司广东光华科技股份有限公司天津市福晨化学试剂厂天津市大茂化学试剂厂天津市永大化学试剂有限公司1.2实验方法精密称取人参皂苷Re对照品2mg,加70%甲醇1mL配制成2.0mg/mL的标1.2.1.2供试品溶液的制备精密称取样品20mg,加70%甲醇定容至1mL,称重，超声(600W、40kHz)提取1h后再次称重，加70%甲醇补足，在1200r/min下离心15min,精密吸取30min进行显色反应。冷却后向显色液中加入5mL冰醋酸并充分振荡。将标准溶液及样品溶液各100μL转移至96孔组织培养板中，使用多功能微孔板分析仪在560nm波长处测定吸光度值。最终通过吸光度(Y,A)与总皂苷含量(X,mg)构建标准曲线。同法测定供试品溶液吸光度，并依据先前建立的标准曲线1.2.2.1标准溶液的制备1.2.2.2供试品溶液的制备设置功率为600W、频率为40kHz,提取1h。提取结束后再次称重，若有质量损失则加蒸馏水补足。将溶液置于离心机中，以1200r/min的转速离心15min。准确吸取10μL上清液，加蒸馏水补足至1mL,制得供试品溶液。1.2.2.3含量测定于具塞试管内，通过添加蒸馏水将所有溶液定容至1mL,并依次向各试管中加溶液避光冷却至室温后，将标准溶液及样品溶液各100μL转移至96孔组织培养板中，使用多功能微孔板分析仪在490nm波长处测定吸光度值。最终通过吸光度(Y,A)与总多糖含量(X,mg)构建标准曲线。同法测定供试品溶液吸光1.2.3总黄酮含量测定1.2.3.1标准溶液的制备精密称取芦丁对照品1.5mg,加入2mL50%乙醇配制为0.75mg/mL的标准溶精确称取10mg样品，加50%乙醇将其定容至1mL后称重。采用超声提取法，设置功率为600W、频率为40kHz,提取1h。提取结束后再次称重，若有质1.2.3.3含量测定同体积的标准溶液(分别为0、100、200、300、400、500μL),供试品溶液取静置6分钟。随后依次加入150μL10%硝酸铝，再次混匀后静置6分钟。最后加入2mL4%氢氧化钠溶液，混合均匀后用蒸馏水定容至5mL,混匀后将标准溶液及样品溶液各100μL转移至96孔组织培养板中，使用多功能微孔板分析仪在508nm波长处测定吸光度值。最终通过吸光度(Y,A)与总黄酮含量(X,mg)1.2.5粉碎力度的考察将西洋参饮片粉碎，分别得到过药典1-7号筛饮片粉末。称取西洋参饮片及过药典1-7号筛饮片粉末各10g于锥形瓶中，平行称定三组，以三组数据的平均每次40min,趁热滤过，合并两次滤液，将滤液放入70℃电热鼓风干燥箱中，烘1.2.5.2总皂苷含量测定1.2.5.3总多糖含量测定1.2.5.4总黄酮含量测定1.2.5.5综合评分计算1.2.6单因素实验1.2.6.1加水倍量的考察定西洋参饮片粉末的浸泡时间为30min,提取时间为40min,加水倍量分别为6合并两次滤液，将滤液放入70℃电热鼓风干燥箱中，烘干，粉碎得到不同加水1.2.6.2浸泡时间的考察定西洋参饮片粉末的加水倍量为10倍，提取时间为40min,浸泡时间分别为热滤过，合并两次滤液，将滤液放入70℃电热鼓风干燥箱中，烘干，粉碎得到1.2.6.3提取时间的考察定西洋参饮片粉末的加水倍量为10倍，浸泡时间为30min,提取时间分别为热滤过，合并两次滤液，将滤液放入70℃电热鼓风干燥箱中，烘干，粉碎得到1.2.7响应面设计理对提取工艺进行优化，从加水倍量(A)、浸泡时间(B)、提取时间(C)三个2数据分析2.1粉碎力度考察实验结果2.1.1总皂苷含量测定结果吸光度为纵坐标(Y,A)绘制标准曲线，得到线性回归方程为Y=0.7329X-0.0009(单位：mg/g)如图3.1所示。总皂苷含量/总皂苷含量/mg/g饮片2号筛2.1.2总多糖含量测定结果吸光度为纵坐标(Y,A)绘制标准曲线，得到线性回归方程为Y=1.□总多糖含量/mg/g1号筛2号筛3号筛5号筛6号筛7号筛图3.2不同粉碎条件下西洋参提取液中总多糖含量2.1.3总黄酮含量测定结果吸光度为纵坐标(Y,A)绘制标准曲线，得到线性回归方程为Y=0.5431X-0.0006(单位：mg/g)如图3.3所示。粉碎力度过药典2号筛的西洋参饮片粉末的提取液的综合评分相对最高，为543.75055,碎力度为过药典2号筛。2.2单因素实验结果2.2.1加水倍量考察实验结果苷、总多糖、总黄酮含量及综合评分如图3.5、图3.6所示。整体呈现下降的趋势，而加水倍量为6倍、8倍、10倍时的综合评分较高，分别为474.06417,465.07517,451.7657,即西洋参提取液中总皂苷、总多糖、总黄总多糖/mg/g总皂苷/mg/g综合评分图3.6不同加水倍量条件的综合评分结果2.2.2浸泡时间考察实验结果苷、总多糖、总黄酮含量及综合评分如图3.7、图3.8所示。评分相对处于最高水平，为441.79818,即西洋参提取液中总皂苷、总多糖、总浸泡时间/min总黄酮/mg/gI图3.7不同浸泡时间条件下西洋参提取液中的总皂苷、总多糖、总黄酮含量浸泡时间/min图3.8不同浸泡时间条件的综合评分结果2.2.3提取时间考察实验结果苷、总多糖、总黄酮含量及综合评分如图3.9、图3.10所示。评分相对处于最高水平，为452.7784,即西洋参提取液中总皂苷/mg/g提取时间/min2.3响应面分析实验结果2.3.1实验设计方案及结果 (A)、浸泡时间(B)、提取时间(C)三个因素，以各实验单因素倍、8倍、10倍；浸泡时间选择20min、30min、40min;提取时间选择30min、表3.1所示。根据设计出的实验方案中的不同条件进加水倍量(倍)A提取时间(min)B浸泡时间(min)C6081序号B:浸泡时间C:提取时间1234567866669888888888项式进行回归拟合，得到综合评分值对实验因素的回归方程为：综合评分=488.*C²。回归模型方差分析结果如下表3.3所示，***表示P<0.001,差异极显著;*数据来源平方和自由度均方显著性模型9工*B-浸泡时间1C-提取时间1工*1*1工*117失拟项纯误差总离差34值均小于0.05(*),C、B2、C2的P值均小于0.001(***),说明加水倍量的一次泡时间、提取时间的交互项均存在显著性差异,而提取时间的一次项、二次项及根据二次多项式模型,采用Design-Expert13软件绘制等值线图与3D响应面曲图。响应面曲图的陡峭程度可以反映各因素对响应值影响的大小,响应面图越陡峭,两因素间交互作用越强;两因素间交互作用的强弱也可由等高线的形状反映,等高线图形状越趋向于椭圆形且椭圆形的轴线和坐标轴存在角度,说明两因素间由图3.11、图3.12、图3.13可以得出,加水倍量的响应面曲线陡峭程度高于浸泡时间,这表明加水倍量对西洋参提取液中总皂苷、总多糖、总黄酮含量之和的影响比浸泡时间更为显著;提取时间的响应面曲线陡峭程度同样高于加水倍量,这表明提取时间对西洋参提取液中总皂苷、总多糖、总黄酮含量之和的影响比加水倍量更为显著;此外,提取时间的响应面曲线陡峭程度高于浸泡时间,这综上所述,各因素对西洋参总皂苷、总多糖、总黄酮含量之和的影响程度依次排列为:提取时间>加水倍量>浸泡时间,与方差分析结果一致;各因素交互mmc图3.11加水倍量(A)与浸泡时间(B)的响应面等值线图与3D曲面图图3.12加水倍量(A)与提取时间(C)的响应面等值线图与3D曲……图图3.13浸泡时间(B)与提取时间(……图借助Design-Expert13软件进行分析，确定西洋参煮散剂的最佳提取工艺参数如下：加水倍量为6.490倍，浸泡时间为27.045min,提取时间为31.396min。为了方便起见，确定西洋参煮散剂的最佳提取工艺条件为：加水倍量为6倍、浸泡时间为30min、提取时间为30min,为了验证模型方程的适用性和可靠性，根据所确定的提取工艺条件设计实验，平行操作三组[17,所得结果如下表试验号综合评分123由以上数据可以得出，综合评分平均值为484.664,RSD=0.12%,表明所建利用香草醛-高氯酸法、苯酚-硫酸法、亚硝酸钠-硝酸铝法分别测定在不同粉碎含量之和为综合评价指标，其中过药典2号筛的西洋参最高，即确定西洋参煮散剂的最佳粉碎力度为过药典2号筛。以过药典2号筛的西洋参饮片粉末为实验原料，进行单因素实验，分别考察当浸泡时间与提取时间一定时，加水倍量为6倍、8倍、10倍、12倍、14倍对提取时间一致时，加水倍量为6倍、8倍、10倍时的总含量相对较高；当加水倍当加水倍量与浸泡时间一致时，提取时间为30min、40min、50min时的总含量为了优化提取工艺，结合单因素实验结果，利用Desi