荧光原位杂交 FISH 操作技师考试试卷及答案

荧光原位杂交FISH操作技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.FISH常用荧光标记物包括FITC、Cy3、______等。2.玻片预处理需用______去除RNA干扰。3.杂交前标本与探针需经______变性。4.杂交后洗涤目的是去除______探针。5.玻片需经______处理防止标本脱落。6.FISH信号观察用______荧光显微镜。7.探针浓度一般为______ng/μL（合理范围）。8.杂交时间通常为______小时（常用过夜）。9.DAPI是______复染染料。10.阳性对照验证______。答案1.Cy5（或TexasRed）2.RNaseA3.高温（95℃左右）4.未结合/非特异性结合5.多聚赖氨酸6.落射式7.10-508.8-169.细胞核DNA10.实验体系有效性二、单项选择题（每题2分，共20分）1.染色体特异性探针是？A.基因组探针B.着丝粒探针C.cDNA探针D.RNA探针答案：B2.FISH杂交最佳温度是？A.37℃B.42℃C.55℃D.65℃答案：B3.不会导致荧光淬灭的是？A.强光照射B.室温久放C.避光储存D.封片延迟答案：C4.盐酸预处理作用是？A.去除蛋白B.变性DNAC.脱水D.通透化答案：A5.低严谨度洗涤温度是？A.37℃B.45℃C.50℃D.55℃答案：A6.阴性对照用于验证？A.探针特异性B.杂交体系C.显微镜性能D.标本质量答案：A7.信号计数需至少统计多少细胞核？A.10B.20C.50D.100答案：D8.FISH封片剂需具备？A.抗淬灭B.高折射率C.透明D.以上都是答案：D9.探针最佳储存条件？A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室温答案：C10.杂交前脱水乙醇梯度是？A.70%→80%→95%B.95%→80%→70%C.70%→95%→100%D.100%→95%→70%答案：B三、多项选择题（每题2分，共20分）1.FISH常用荧光标记物包括？A.FITCB.Cy3C.Cy5D.AlexaFluor488答案：ABCD2.玻片预处理步骤包括？A.烤片B.RNaseA处理C.盐酸处理D.脱水答案：ABCD3.杂交步骤包括？A.探针变性B.标本变性C.杂交孵育D.洗涤答案：ABC4.洗涤液作用包括？A.去未结合探针B.降背景C.增特异性D.变性DNA答案：ABC5.信号观察注意事项？A.避光B.快速计数C.调激发光D.记录信号答案：ABCD6.探针设计要求？A.特异性高B.长度合适C.标记效率高D.稳定答案：ABCD7.FISH应用领域？A.染色体异常B.基因扩增C.病毒检测D.肿瘤诊断答案：ABCD8.杂交前标本处理？A.脱蜡B.蛋白酶K消化C.脱水D.变性答案：ABC9.阳性对照类型？A.已知阳性标本B.阳性探针C.阳性细胞系D.阴性标本答案：ABC10.信号弱原因？A.探针浓度低B.杂交时间不足C.洗涤过度D.标本差答案：ABCD四、判断题（每题2分，共20分）1.标本与探针需同时变性后杂交。（）答案：√2.探针储存无需避光。（）答案：×3.杂交后洗涤可省略。（）答案：×4.DAPI特异性结合细胞核DNA。（）答案：√5.FISH可检测染色体易位。（）答案：√6.探针浓度越高效果越好。（）答案：×7.杂交时间越长信号越强。（）答案：×8.洗脱温度越高严谨度越高。（）答案：√9.荧光信号可永久保存。（）答案：×10.阴性对照验证探针特异性。（）答案：√五、简答题（每题5分，共20分）1.简述玻片预处理的主要步骤及目的。答案：步骤包括①60-80℃烤片1-2h（固定标本）；②脱蜡（石蜡切片，二甲苯-梯度乙醇）；③RNaseA处理（37℃30min，去RNA干扰）；④2N盐酸处理（10-20min，去蛋白暴露DNA）；⑤蛋白酶K消化（37℃10-30min，通透细胞）；⑥梯度乙醇脱水（干燥备用）。目的是去除杂质、暴露靶序列、增强粘附性，保障杂交效果。2.简述杂交步骤的关键要点。答案：①探针准备：选特异性探针，稀释至10-50ng/μL；②变性：95℃5-10min（标本+探针同时变性）；③杂交：滴加探针加盖玻片，湿盒42℃孵育8-16h；④避光操作，避免污染；⑤严格控温（变性/杂交温度），防止非特异性结合。3.简述信号观察的注意事项。答案：①仪器校准：落射式荧光显微镜，匹配探针滤光片；②避光操作：避免强光照射，封片后及时观察；③计数规范：每个核至少数100个，记录信号数量/位置；④控激发光：低强度激发，减少曝光；⑤记录保存：拍清晰图像，标注探针/标本信息。4.简述对照设置的目的及类型。答案：阳性对照：验证体系有效性（探针活性、杂交条件），类型为已知阳性标本、阳性探针、阳性细胞系；阴性对照：验证探针特异性，排除非特异性结合，类型为已知阴性标本、无关探针、空白对照。两者保障结果可靠。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论信号弱/无信号的常见原因及解决方法。答案：原因包括①探针：浓度低（补加探针至10-50ng/μL）、标记差（换标记探针）、储存不当（-80℃避光）；②标本：固定过度（缩短固定时间）、蛋白酶消化不足（延长消化）、DNA降解（重制标本）；③杂交：变性不充分（延长变性10min）、温度不当（控42℃）、时间不足（16h）；④洗涤：过度（减少次数）、温度高（降严谨度）；⑤仪器：校准错误（重校滤光片）。2.讨论如何避免信号淬灭及背景过高。答案：避免淬灭：①