药物所研究生课件皂苷详解

药物所研究生课件皂苷详解演示文稿第一页，共30页。（优选）药物所研究生课件皂苷第二页，共30页。一、概述2.研究概况：1927年出了第一部专著：SaponinebyKofler书中详细地论述了皂苷的性质和药理作用，但在当时没有一种皂苷的结构被确定。50年代至70年代末共发现皂苷（已确定结构）仅数十种。其原因：分离、结构测定均有相当难度。70年代以后，随着分离技术的更新（反相层析、液液层析DCCC），尤其13CNMR及其随后的各种波谱新技术出现，使皂苷的分离纯化、结构测定（主要是指多糖皂苷）成为可能。至今共发现新皂苷1600余种。3*第三页，共30页。冰醋酸、浓H2SO4、醋酐试剂（Liebermann-Burchard反应）Molish反应（浓H2SO4，α-萘酚）溶血试验泡沫试验磷钼酸或硅钨酸试剂碘蒸汽二、皂苷的检识4*第四页，共30页。根据苷元的不同可分为以下三类三萜皂苷甾体皂苷甾体生物碱皂苷三、分类5*第五页，共30页。三、分类Triterpeneclass328SteroidclassSteroidalkaloidclass6*第六页，共30页。由于皂苷分子量较大，且极性也大。总苷为结构极相似的类似物，如糖的种类、苷元均相同，只是糖连接的位置或次序不同。皂苷的纯度不易检查：不结晶，难以用熔点、旋光和其他物理常数来判断是否纯。通常只能用TLC、HPTLC、HPLC四、皂苷的提取与分离7*第七页，共30页。四、皂苷的提取与分离1、提取：注意：水浸提取易酶解醇提时会引起酯化（酸性皂苷）不稳定酯基的水解酰基的转位8*第八页，共30页。四、皂苷的提取与分离药材甲醇或乙醇或水或醇-H2O（70%EtOH）浓缩药渣浸膏石油醚脱脂（或在提取之前脱脂）脱脂后的浸膏溶于或悬浮于水中水液水饱和正丁醇萃取，回收正丁醇粗皂苷总皂苷溶于水中丙酮或乙醚沉淀XAD-2,8大孔吸附树脂柱D：101，RA水洗净，不同浓度醇洗总皂苷9*第九页，共30页。2、分离普通柱层硅胶吸附层析，粗分CHCl3:CH3OH:H2O不同比例85:11:1→70:30:5→50:50:0葡聚糖凝胶：SephadexLH20G（不用）大孔吸附树脂AmberliteXAD-2（Pharmacia）D101，RA（北京化工七厂）四、皂苷的提取与分离10*第十页，共30页。四、皂苷的提取与分离离心薄层层析（CTLC，Centrifugalthin-layerChromatography）闪柱（flashchromatography）Sumple：3.3g6.0×4cmcolumnsilicagel（63～200μm）（Rpmaterial）ataflowrateof15ml/min2barsatthetopofthecolumn11*第十一页，共30页。低压柱层析（low-pressureliquidchromatography，LPLC）40～60μmsilicagel10～40μm硅胶H（青岛海洋化工厂）Rp8，Rp18→Methanol：H2O（9:1;8:2;7:3;6:4;5:5;4:6)Labar柱（E.Merk）40～63μmupto10bar四、皂苷的提取与分离CHCl3:MeOH:H2O12*第十二页，共30页。中压层析（Medium-pressureliquidchromatography，MPLC）不同的量均可分离粒径：40～60μm压力：40bar更值得一提的是HPLC的分离条件可直接在MPLC上用吸附剂：正相（硅胶），*反相（Rp8，18）溶剂系统：相似于低压柱层析四、皂苷的提取与分离13*第十三页，共30页。高效液相层析（High-performanceliquidchromatography，HPLC）semi-preparativeHPLCsorberto：5～30μm常用：10～20μm举例：Rp-8column（250×16mm）acetonitrile–water（38：62）flowrate：10ml/min四、皂苷的提取与分离14*第十四页，共30页。液滴逆流层析（Dropletcountercurrentchromatography，DCCC）原理：利用皂苷化合物在两相分配系数的不同而得以分开。样品：极性较大，其他杂质较少。许多用液固层析难以分离的皂苷化合物，可以用DCCC将他们分开。常用的溶剂系统——氯仿：甲醇：水（7:13:8）四、皂苷的提取与分离15*第十五页，共30页。皂苷的结构测定包括以下几个方面：苷元的结构确定糖链的组成和糖连接的顺序糖链中单糖之间的连接位置糖的端基构型糖链与苷元的连接位置结构测定16*第十六页，共30页。1、简述糖与三萜或甾体→苷键（醚键、酯键）糖链糖与糖→苷键2、酸水解（Acidichydrolysis）酸的浓度2～4MHCl时间：4h水溶液或醇水溶液H2SO4→封管水解（ampoule）5%H2SO4for2h薄层板上酸蒸汽水解（参看：“药学学报”1987，22，70）特点：用量少，速度快，不同的糖（五碳、六碳糖）具不同的颜色，可检识。

缺点：葡萄糖与半乳糖就难以区别，必须用纸层析皂苷苷键的裂解反应

（cleavagereactions）17*第十七页，共30页。1）酸水解苷元的结构分析TLCGC-MSHPLC若苷元是新化合物进行结构测定（MS、IR、NMR、CD或X-ray）注意：苷元结构的变化2）酸水解糖的检识：用碱中和，水液用纸层析检识（溶剂系统有：正丁醇：醋酸：水4:1:5）HPLC、GC皂苷苷键的裂解反应

（cleavagereactions）已知苷元18*第十八页，共30页。皂苷苷键的裂解反应

（cleavagereactions）3、碱水解：主要是水解糖链接在羧基上的苷键通常用0.5MKOH10～20%EthanolicorMethanolicSolutions回流2～4h注意：碱性醇液易使苷元上游离羧基甲基化或乙基化。19*第十九页，共30页。皂苷苷键的裂解反应

（cleavagereactions）0.5MKOH3h，酸中和+糖PCHPTLC检识R1=XylR2=Glc6—1Glc4—1Rha20*第二十页，共30页。4、酶水解：专属性高，可确定苷键构型5、微生物水解土壤微生物水解6、温和选择性裂解方法两相中的酸水解Smith降解碘化锂水解皂苷苷键的裂解反应

（cleavagereactions）21*第二十一页，共30页。皂苷苷键的裂解反应

（cleavagereactions）326432+MeO—Glc6—Glc4—RhaLiI2,6-lutidine22*第二十二页，共30页。化学反应1、3-羟基脱水反应2、氧化反应oppenauer氧化异丙醇铝环乙酮23*第二十三页，共30页。化学反应铬酐-冰醋酸氧化CrO3HAcUVλmax250nm24*第二十四页，共30页。3、还原醋、酮→Wolff-kishner-黄鸣龙反应，还原成甲基、次甲基。羧基羟甲基羟基甲基或次甲基化学反应LiAlH4LiAlH4对甲基苯磺酰化25*第二十五页，共30页。化学反应PyTsClLiAlH4THF26*第二十六页，共30页。4、内酯化反应五环三萜化合物在17位有羧基取代，如在羧基的γ、δ位有双键，很容易在酸催化下生成内酯。若以溴甲醇溶液作用，则生成溴代内酯。化学反应27*第二十七页，共30页。化学反应浓HCl-冰醋酸Ac2O/PyBr2/CH3OH28*第二十八页，共30页。结构测定中的波谱和其他