医疗器械检验检测方法验证指南（试行）

医疗器械检验检测方法验证指南（试行）1范围本指南规定了医疗器械注册、生产过程确认、质量控制、监督检验等场景下，非法定检验方法、经变更的法定检验方法、实验室首次采用的引进检验方法的验证流程、技术指标与判定要求，适用于医疗器械生产企业、检验检测机构、临床试验机构开展医疗器械检验检测方法的验证活动，法定检验方法的实验室确认可参照本指南执行。2术语和定义2.1检验检测方法：指对医疗器械的安全性、有效性、质量可控性进行评价的标准化检测程序，包括理化检验、微生物检验、生物学评价试验、电气性能检测、软件功能测试、包装密封性检测等类别。2.2方法验证：指通过实验室系统研究，证明检验检测方法符合预定检测目的和预期用途要求，证实方法各项性能指标满足检测需求的过程。2.3法定检验方法：指国务院药品监督管理部门或者标准化行政主管部门颁布的医疗器械强制性标准、推荐性标准、注册检验规范中载明的检验方法。2.4非法定检验方法：指未纳入法定标准，由申请人/生产企业自行开发或者引用文献、其他机构公开的用于医疗器械质量控制、注册申报的检验方法。2.5准确度：指检验检测方法获得的检测结果与真值或者参考值之间的一致程度，定量方法一般用回收率表示，定性方法用识别正确率表示。2.6精密度：指在规定条件下，对同一均匀样品进行多次独立检测结果之间的一致程度，分为重复性、中间精密度、重现性三类。2.7专属性：指检验检测方法在样品中存在其他干扰组分（辅料、杂质、降解产物、基质成分等）时，对被测物准确、特异性检测的能力。2.8检测限：指样品中被测物能够被稳定检出的最低浓度或者含量，仅需判定检出与否，无需准确定量。2.9定量限：指样品中被测物能够满足准确度、精密度要求的准确定量检测的最低浓度或者含量。2.10线性：指在给定范围内，检测响应结果与样品中被测物浓度或者含量呈正比例关系的程度。2.11范围：指能够满足准确度、精密度、线性要求的，被测物浓度或者含量的区间。2.12耐用性：指检验检测方法在测定条件发生微小、正常变动时，检测结果不受明显影响的承受能力，体现方法的环境适应性。3验证分类与触发场景3.1验证分类按方法来源与性质分为三类：（1）新开发非法定方法验证：指企业/机构自主开发的全新检测方法，用于新增质量控制项目、新产品特有性能检测；（2）法定方法变更验证：指因新产品特性不符合现有法定方法适用范围，对法定方法的样品前处理、检测参数、仪器条件等进行修改调整后开展的验证；（3）引进方法验证：指实验室首次采用文献、行业公开、其他机构开发的非法定方法开展检测前，针对本实验室条件开展的验证。3.2触发验证的场景存在下列情形之一的，必须开展方法验证：（1）医疗器械注册申报时，采用非法定检验方法完成注册研究、注册检验的；（2）法定检验方法不能覆盖医疗器械新产品性能要求，对方法参数进行修改调整的；（3）医疗器械生产工艺变更、产品技术要求变更，涉及检验方法变更的；（4）实验室搬迁、核心仪器设备更新换代、场地环境改变，导致原方法运行条件发生实质性变化，可能影响检测结果准确性的；（5）医疗器械监督抽检中，对异议结果复检需采用非法定方法的；（6）质量管理体系内部审核、外部审核发现检验方法系统偏差超出允许范围，需要重新确认性能的；（7）法规要求开展方法验证的其他情形。4验证技术指标与通用要求4.1准确度准确度为验证核心指标，不同类型检测接受要求如下：（1）主成分含量测定：待测物含量＞10mg/g（百分之一以上水平），平均回收率要求95%~105%；含量10μg/g~10mg/g（ppm到百分之一水平），平均回收率要求90%~110%；含量1~100μg/g（ppm级及以下），平均回收率要求80%~120%，且95%置信区间需落在要求范围内；（2）杂质定量测定：杂质含量介于报告限与定量限之间，平均回收率要求70%~130%；杂质含量大于定量限10倍以上，平均回收率要求80%~120%；残留溶剂、有害残留物检测的回收率要求为80%~110%；（3）微生物限度、菌落计数等定量微生物检测：回收率要求不低于70%，符合《中华人民共和国药典》相关要求；（4）定性检测（如微生物鉴别、理化鉴别）：要求对已知阳性、阴性样品的识别正确率达到100%。准确度试验要求至少制备低、中、高3个不同浓度水平的加标样品，每个水平平行测定至少3次，计算平均回收率与置信区间。4.2精密度4.2.1重复性：指同一操作人员、同一仪器、同一实验室、短时间间隔内的测定精密度，要求至少完成9次测定（3个浓度各3次重复，或1个目标浓度至少6次重复）。接受标准：主成分含量测定相对标准偏差（RSD）不超过2.0%；杂质含量＜0.1%时RSD不超过10%；杂质含量0.1%~1%时RSD不超过5%；菌落计数RSD不超过30%；定性检测要求重复结果一致率100%。4.2.2中间精密度：考察不同日期、不同操作人员、不同仪器设备等随机变动因素对精密度的影响，要求至少变动2个影响因素，测定至少9份均匀样品。接受标准：中间精密度RSD不超过重复性RSD要求的1.5倍，两次测定结果的绝对偏差不超过方法允许误差的2倍。4.2.3重现性：指不同实验室之间测定的精密度，用于注册申报的非法定方法必须开展重现性验证，要求至少3家不同实验室参与测定。接受标准：主成分含量测定RSD不超过4.0%；杂质含量＜0.1%时RSD不超过20%，符合要求。4.3专属性不同类型检测要求：（1）理化鉴别方法：要求能够区分被测物与结构相似、工艺过程中可能存在的其他组分，阳性样品出特征信号/特征反应，阴性空白样品无干扰信号；（2）含量测定方法：要求在基质、辅料、中间体、降解产物存在的情况下，测定结果偏差不超过2%，可准确定量；采用色谱法测定的，要求主峰与相邻杂质峰分离度R≥1.5；（3）杂质测定方法：要求各杂质峰之间、主峰与杂质峰之间完全分离，色谱法分离度R≥1.5，薄层色谱法要求各斑点无拖尾重叠；（4）生物学试验：要求非特异性干扰率低于5%，不会产生假阳性、假阴性结果。专属性试验要求设置阴性对照、阳性对照，对于可降解产品需采用高温、高湿、酸碱、氧化处理的强制降解样品，验证干扰组分不影响被测物检测。4.4检测限常用测定方法包括信噪比法、目视法、标准偏差法，其中：有色谱、光谱连续响应信号的方法采用信噪比法，要求信噪比（S/N）≥3即为检测限；定性检测采用目视法，以能够稳定检出被测物的最低浓度作为检测限；采用公式法计算时，检测限LOD=3.3×σ/S（σ为空白样品响应值的标准偏差，S为校准曲线斜率）。接受标准：检测限低于方法要求的最低检出水平，重复测定10次，检出率不低于90%；杂质检测的检测限不得高于杂质报告限（一般为0.05%），有害残留物检测的检测限不得高于残留限量的1/3。4.5定量限信噪比法要求信噪比（S/N）≥10，公式法计算定量限LOQ=10×σ/S。接受标准：定量限浓度水平样品重复测定6次，平均回收率在70%~130%之间，RSD不超过10%；杂质检测的定量限不得高于杂质限定值，有害残留物的定量限不得高于残留限量的1/10，满足定量要求。4.6线性线性试验要求至少制备5个浓度水平的标准溶液，每个浓度测定1次，计算线性回归方程。接受标准：主成分含量测定相关系数r≥0.99，杂质定量测定相关系数r≥0.98；y轴截距不超过100%浓度响应值的2.0%，不存在显著截距偏差。线性范围要求覆盖被测物规定浓度的80%~120%，满足测定区间要求。4.7范围范围为满足准确度、精密度、线性要求的被测物浓度区间，不同项目要求：（1）主成分含量测定：范围为规定含量的80%~120%；（2）杂质定量测定：范围为定量限到杂质规定限度的120%；（3）溶出度、释放度测定：范围为规定限度的±20%；（4）有害残留物测定：范围为定量限到残留限量的150%；接受标准：范围内任意浓度测定的准确度、精密度均符合本指南上述要求即为合格。4.8耐用性耐用性需考察方法运行中可能出现的微小变动，常见变动因素包括：样品前处理时间变动±10%、流动相比例变动±5%、流动相pH变动±0.2、柱温变动±5℃、不同批次色谱柱、仪器波长变动±5nm、不同品牌培养基、灭菌温度变动±2℃、环境温湿度变动±10%等。要求至少考察2种常见变动因素，接受标准：测定结果RSD不超过2.0%，回收率落在要求范围内，定性检测结果不发生改变；若微小变动导致结果不符合要求，需在方法操作文件中明确规定测定条件的允许偏差范围，限定适用条件。5不同类别检验方法的特殊验证要求5.1理化检验方法色谱、光谱、质谱、滴定等定量理化检验需验证全部8项指标；定性理化鉴别仅需验证专属性、检测限、耐用性，无需验证定量指标；微量元素、重金属残留等痕量检测需额外验证基质效应，基质效应偏差不超过20%即为符合要求。5.2微生物检验方法无菌检查、微生物限度、细菌内毒素检查等定性微生物检验，需验证专属性、检测限、耐用性、回收率（准确度）；定量微生物检验需额外验证精密度、线性、范围。无菌检查要求检测限不得高于10CFU/样品，专属性要求阴性对照无杂菌污染，阳性对照菌生长良好，回收率符合《中华人民共和国药典》要求。5.3生物学评价试验方法细胞毒性、皮肤刺激、致敏、血液相容性等体内外生物学试验，需验证专属性（排除假阳性假阴性）、准确度（与参考品结果偏差不超过10%）、重复性（同一实验室重复试验结果一致率不低于90%）、耐用性（不同批次细胞、不同批次试剂试验结果偏差不超过15%）；定量生物学试验（如细胞增殖率测定、蛋白吸附量测定）需额外验证线性、范围。5.4有源医疗器械性能检测方法电气安全、输出参数、电磁兼容等物理性能检测，需验证准确度（测量值与标准计量值的偏差不超过方法允许误差，如输出电压偏差不超过±1%，输出功率偏差不超过±5%）、精密度（多次测量RSD不超过允许误差的1/2）、专属性（能够区分被测参数与其他干扰参数，无误判）、耐用性（不同环境温湿度下结果偏差在允许范围内）；软件功能测试需验证测试用例覆盖度，核心功能覆盖度100%，边界条件覆盖度不低于95%。5.5包装密封性检测方法无菌医疗器械包装密封性检测，要求验证检测限、准确度、假阳性率、耐用性；植入性无菌医疗器械要求检测限不得高于3μm孔径的模拟漏孔，普通无菌医疗器械要求检测限不得高于5μm孔径的模拟漏孔，准确度要求对已知漏孔样品的检出率不低于99%，假阳性率不高于1%，符合GB/T19633《最终灭菌医疗器械包装》要求。6验证实施与管理要求6.1验证实施流程（1）方案制定：开展验证前必须制定验证方案，明确验证目的、方法来源、检测对象、验证指标、试验设计、人员分工、接受标准、进度安排，经技术负责人审核批准后方可实施；（2）试验准备：所有仪器设备需经计量校准合格，标准物质、参考品需溯源，试验样品需均匀性合格，均匀性试验RSD不超过5%方可用于验证；（3）试验实施：严格按照方案开展试验，如实记录原始数据，不得篡改，异常结果需开展偏差分析，记录原因与处理过程；（4）结果分析：按本指南要求统计各验证指标结果，判断是否符合接受标准；（5）报告出具：验证完成后出具正式验证报告，明确验证结论，说明方法是否符合预期用途要求，经批准签字后生效。6.2结果判定与变更管理所有关键指标（准确度、专属性、线性）均符合要求，非关键指标经评估不影响检测准确性的，判定为验证通过；关键指标不符合要求的，需修改方法后重新验证。已经验证合格的方法，发生下列变更需重新验证：产品基质、生产工