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45DB45/T2804—2023猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术规程Technicalcodeondiagnosisofbacterialcankerdiseaseofkiwifruitby2023-12-26发布2024-02-01实施广西壮族自治区市场监督管理局发布I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结1本文件确立了猕猴桃细菌性溃疡病PCR诊断技术的程序，给出了缩略语、诊断原理，规定了样品采本文件适用于广西壮族自治区行政区域内猕猴桃属植物感染猕猴桃细菌性溃疡2规范性引用文件猕猴桃细菌性溃疡病bacterialcankerdiseaseofkiwifrubp：碱基对DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReactiopH：氢离子浓度指数（Hydrogenionconcentrati利用猕猴桃细菌性溃疡病菌DNA特异性扩增引物，在热稳定DNA聚合酶的作用下，合成大量目标DNA片段，最终通过凝胶电泳分离检测出特定大小的猕猴桃细菌性溃疡病菌特异性DNA谱带，根据该谱带的26.1.1采有典型和疑似症状的植株叶片样品（参见1234567PCR缓冲液[×10，含15mMMg2+]89DNA分子量标准（DNAmaker，可区分100bp～31PCR扩增仪23456789PCR反应管采集的样品经处理后，在2℃~8℃条件下保存应不超过2周，若需长期保存，应置于-70采用商用植物基因组DNA提取试剂盒（推荐使用按照其操作步骤和方法提取样品总DNA，或者选用其他能达到PCR扩增质量要求的方法提取样品总DNA，4），束后，将琼脂糖凝胶放入凝胶成像系统中拍照保存，正向引物5’-CAGAGGCGCTAACGAGG反向引物5’-CGAGCATACATCAACAGGTCA1-2PCR缓冲液[×10]11-按表3，依次向PCR反应管中加入超纯水、dNTPs、PCR缓检测时设置空白对照、阳性对照（猕猴桃细菌性溃疡病菌基因组DNA）和阴性对照（健康猕猴桃植分子量作为片段大小的标准，在120V电压下电泳约60min。5电泳结束后，将琼脂糖凝胶放入凝胶成像系统中拍照保存8诊断后样品处理DNA提取液放置于-20℃以下，以备复检。用于猕猴桃细菌性溃疡病菌检测的植物样品、用具，以67定容至1000mL，调节pH为8.0，高温灭菌），8bp注：
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