Agilent1260系列HPLC操作维护规程

第4页共5页文件名称Agilent1260系列HPLC操作维护规程编号编制者审核者批准者编制日期审核日期批准日期编制依据高效液相色谱仪说明书备份数分发部门实施日期目的：制定规范的高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程。范围：适用于Agilent1260HPLC。责任：色谱检验工程师负责本规程执行。内容：1开机1.1打开电脑。1.2从泵到检测器依次打开液相色谱各个模块的电源。1.3双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。1.4排气：1.4.1手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。1.4.2右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定”。1.4.3右键单击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。1.4.4右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。1.4.5右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。1.4.6同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制”选项，“ON”打开柱温箱和检测器。2编辑方法2.1点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。2.2选中除“数据分析”外的三项，进入下一选项卡。2.3方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：Thisisfortest!）。进入下一选项卡。2.4泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1.0ml/min，停止时间：如10min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。进入下一选项卡。2.5自动进样器参数设定:选择“洗针进样”可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。2.6柱温箱参数设定:在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。进入下一选项卡。2.7UV检测器参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。2.8在“运行时选项表”中，选中“数据采集”，点击“确定”。2.9从“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。3单次采集3.1从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择合适的路径，在“数据文件”中选择“前缀/计数器”，输入样品瓶的位置，点击“确定”。基线平稳后约10分钟，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。4多次数据采集4.1按照步骤2编辑完整方法。4.2点击“序列”－“序列表”，输入“样品瓶”“样品名称”，“进样次数”，选择合适的“做样方法”4.3点击“序列”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择“前缀/计数器”保存。4.4从“序列”菜单，选中“序列另存为…”，输入一序列名，如“测试”，点击“确定。4.5从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。5数据分析（脱机状态使用）5.1双击“仪器—脱机”图标进入的脱机画面。5.2从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。5.3从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“确定”，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。）5.4做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“确定”。6积分:6.1从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击，自动加载积分参数。6.2点击左边“√”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件”。6.3如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。不要轻易使用手动积分。7标准曲线7.1点击“校正”－“校正设置”，输入“含量单位”。7.2点击“校正”－“新建校正表”，点击确定。输入“化合物名称”和“含量”，点击“确定”，按照提示删除其他组分。7.3至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正”－“添加级别”，点击确定，输入“含量”，依次增加校正级别。8打印报告8.1从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变，点击“确定”。8.2从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”底部的“打印”钮。8.3点击“文件”－“另存为”－“方法”，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“调用”－“方法”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法）9关机9.1关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中）9.2退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。关闭Agilent1260各模块电源开关。10其它注意事项日常开机操作时需要进行系统的初始化和柱平衡，系统初始化的主要目的是移走管路中的气泡。柱平衡的主要目的是使得柱子中的流动相组成真正达到分析条件要求。新装到系统上的色谱柱也需要进行初始化：先断开柱子与检测器间的管路，用流动相将色谱柱中的原有流动相或气泡移出色谱柱，然后再将色谱柱和检测器间的管路重新接好。当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。过滤水相或有机相应该选用合适的滤膜，常用0.45μm的滤膜。纤维素膜主要用于水溶液；尼龙滤膜和PTFE（聚四氟乙烯）膜均是通用型滤膜。不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：避免溶剂瓶直接日照；每两天更换或过滤溶剂；用滤膜过滤溶剂去除微生物。四氢呋喃（THF）、醚类等有机溶剂应放在棕色瓶中，以防光照变质。水也最好放在棕色瓶中，以防长菌（也可以加入少许叠氮化钠或有机溶剂，抑制长菌）。避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液；高浓度的无机酸例如硝酸和硫酸；能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物；含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂；在有机溶剂中一定浓度的有机酸溶液；含有强络合剂的溶液；四氯化碳和异丙醇或四氢呋喃混合液。如果使用PEEK毛细管，还应该注意尽量避免使用二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃等有机溶剂。使用流动相时千万注意溶剂的混溶性，避免形成乳化的小液滴毁坏柱子。可以使用异丙醇作为过渡溶剂。实验室应备有色谱纯的异丙醇，以作为过渡溶剂或用以清洗备件。采集色谱数据时，样品检测波长应至少大于所用溶剂的截止波长20nm以上，否则溶剂可能会干扰信号。保护柱的填料应与分析柱的填料完全一致，以达到真正保护分析柱的目的。如果较长时间不使用该色谱柱