CN114929340B 用于青光眼的方法和药剂 （奥夫博医疗创新有限公司）

PCT/US2019/0523102019.092022.05.19PCT/US2020/0245922020.03.25WO2021/055013EN2021.03.25US2002002185A1,2002.01.03US2008153903A1,2008.06.26版社,1983,908.眼中影响眼内压和增加眼液流出的组合物和方受试者的眼内压和/或减少受试者的眼的细胞外21.一种水性药物组合物在制备用于减少人体或动物体的眼的细胞外囊泡复合物的药8.根据权利要求1所述的用途，其中所述组合物通过眼内注射或眼周注射施用于所述3[0004]青光眼的形式被描述为开角型青光眼或闭角型青光眼。原发性开角型青光眼以及相应的视野丧失。IOP升高与视网膜神经节细胞(RGC)死亡以及最终视野(VF)丧失有[0013]本发明的多个实施方案提供了用于测量和表征青光眼聚集特征以及眼内压和眼4(salinomycin)、阿奇霉素(azithromycin)、雷帕霉素(rapamycin)、庆大霉素霉素(dactinomycin)、丝裂霉素(mitomycin)、普卡霉素(plicamycin)、双氢链霉素(dihydrostreptomycin)、卡那霉素(kanamycin)、纳他霉素(natamycin)、利福霉素[0026]图3显示了用于检测通道中的流体组合物的流量和压力的装置的实施方案的图。[0027]图4显示了用于检测各种化合物、组合物和物质对通道中流体组合物的流量和压[0028]图5显示了用于检测通道中流体组合物的流量和压力的装置和系统的实施方案。5[0029]图6显示了利用常规固定技术对细胞外囊泡进行成像由于EV不能附着而导致效率后用UA和柠檬酸铅溶液固定在铜网格上的分离的牛玻璃体EV的代表性显微照片显示了在低(左)放大倍率下的少数的负染色的EV(箭头)，以及在其他照片中，没有观察到EV(中和(b)示意图显示施加至电子显微镜网格表面的溶液中的EV未能连接。EV存戊二醛固定、负染色和TEM成像后分离的牛玻璃体EV的代表性TEM显微照片反映了在低(左)、中(中)和高(右)放大倍率下可视化的EV明显更多。(g)平均值和±标准差的图示(log2)显示，与Glut固定的网格相比，来自EDC固定的试样的每张图像计数的EV显著更多代表性透射电子显微镜照片显示了用EDC、戊二醛固定在铜网格上然后用UA溶液染色的6[0034]图11显示了当与未治疗的青光眼样品相比时，已知的青光眼治疗比马前列素[0035]图12显示了用缓冲盐水处理青光眼患者的房水对被诊断为青光眼的第二位受试比马前列素处理的受试者#2样品的POAG房水显示出大的电子致密的青光眼相关的EV聚集体，其大小为几微米。在健康对照中未观察到这些聚集体。该图显示了与健康对照相比，POAG中青光眼相关的EV聚集体的大小存[0039]图16显示了图15中的数据的曲线图。与具有较少的彼此接触的EV的健康对照相7获得的人房水中的EV群体的图示。我们用EDC固定来固定房水，并用透射电子显微镜术成彼此接触的EV或青光眼相关的EV聚集体)。数据显示青光眼相关的EV聚集体中存在的个体[0042]图19显示了从被诊断为原发性开角型青光眼(POAG)的人类受试者获得的房水中[0043]图20显示了表示与其他EV接触并且位于图19的患者的“青光眼相关的EV聚集体”内的EV的大小和频率的图。很大数量的EV在36nm至300nm之间，并观察到少数更大的游离者获得的人房水中EV群体的图示。我们用EDC固定来固定房水，并用透射电子显微镜术成义为彼此接触的EV)或游离EV(彼此不接触的EV)。数据显示青光眼相关的EV聚集体内存在[0045]图22显示了两个单独的青光眼患者的细胞外囊泡显示出相似大小和数量的位于体的图示。我们用EDC来固定每位受试者的房水，并用彼此接触的EV)。数据显示了受试者#1(灰条)或受试者#2(黑条)的青光眼相关的EV聚集体内存在的EV的大小和数量。对数据进行归一化，并显示这两个样品具有相似的存在于青光眼相关的EV聚集体内的EV分布。的细胞外囊泡的大小和频率不同。(a)从诊断为POAG的受试者和正常健康对照获得的人房8[0047]图24显示了细胞外囊泡POAG聚集体的大小和频率与健康人类受试者相似。(a)从健康对照(游离EV)或POAG受试者(聚集的EV)获得的人类受试者房水得到的EV群体的图示。[0048]图25显示与对照相比，药剂氯化十六烷基吡啶(cetylpridiniumchloride)降低存在。该结果表明，药剂氯化十六烷基吡啶在降低青光眼模型中的IOP方面出乎意料地有[0052]图29显示化合物十二烷基硫酸钠是青光眼模型中的眼内压(IOP)的阴性对照。通9过使用在微流体装置微流体中控制流动和测量相对IOP来测试该化合物。通过在牛玻璃体液(BVH)中制备每个样品并在37℃下预孵育24小时，将该化合物与安慰剂(缓冲盐水)进行[0057]本发明的多个实施方案提供了用于测量和表征青光眼聚集特征以及眼内压和眼[0059]本发明的多个实施方案可以基于本文鉴定的独特且可靠的超微结构生物标志物[0060]本发明的多个实施方案可以提供纯化和/或合成用于治疗和生物学方法的该超微[0061]本发明的多个实施方案可以提供用于POAG的治疗剂和治疗以及用于测试POAG房[0063]在另外的实施方案中，本发明的组合物和方法可以降低眼内压和/或增加眼液流[0065]在某些方面，可以通过施用用于影响EV复合物的表面活性剂来治疗青光眼疾[0070]青光眼患者房水中的超微结构特征或组合物在物理上大于JCT出口的窗孔或其他泡(micro-vesicles)和约1-5μm的凋亡小体(apoptoticbodies)。EV可能与疾病的病理生[0076]在其他实施方案中，基于EV的超微结构特征和组合物用于减少眼液中聚集特征、[0078]在另外的实施方案中，基于EV的超微结构特征和组合物用于鉴定受试者的青光[0081]可以用本文所述的方法和组合物治疗的青光眼病症，在本文中称为“青光眼(glaucoma)”，包括但不限于青光眼前期开角型伴边界性发现(preglaucomaopenanglenarrowangleprimaryangleclosuresuspect)、类固醇反应者(s高眼压症(ocularhypertension)、无青光眼性损伤的原发性房角关闭(primaryangle角型青光眼(unspecifiedopen-angleglaucoma)、原发性开角型青光眼(primaryopen-膜性青光眼(capsularglaucomawithpseudo-exfoliationoflens)、开角型青光眼残余期(residualstageofopen-angleglaucoma)、未特指的原发性闭角型青光眼(unspecifiedprimaryangle-closureglaucoma)、急性闭角型青光眼发作(acuteangle-closureglaucomaattack)、慢性闭角型青光眼(chronicangle-closure部症状后的病症、赘生物、良性赘生物或恶性肿瘤。还包括药物继发性青光眼(glaucomasecondarytodrugs)、青光眼伴巩膜浅层静脉压增高(glaucomawithincreased流恶性青光眼(aqueousmisdirectionmalignantglaucoma)、其他分类的疾病中的青光(buphthalmos)、儿童青光眼(glaucomaofchildhood)、新生儿青光眼(glaucomaof眼(congenitalglaucomamacrocorneawithglaucoma)、先天性青光眼中的巨眼畸形(macrophthalmosincongenitalglaucoma)、巨角膜伴青光眼(megalocorneawith剂量不足的眼科药物和制剂的不良作用。(depotperiocularinjecti戊二醛选择性交联剂(glutaraldehyde-alternativ的纯化的EV复合物可用于测定和检测可与眼内压和眼液流出相关的EV超微结构组分的变青光眼的合成EV复合物可用于测定和检测可与眼内压和眼液流出相关的EV超微结构组分[0113]本公开的装置可具有压力源，该压力源用于向流体储器中的流体组合物施加压它们中的任何一个都可以用于接收和/或传输数据并执行所存储的指令。处理器还可以转性机器可读存储介质、一个或多个处理器、一个或多个存储装置和/或一个或多个用户界[0136]在某些实施方案中，青光眼参考值可以是每个样品中细胞外囊泡复合物(其包含实施方案中，青光眼参考值可以是每个样品中细胞外囊泡复合物(其包含10个或更多个聚囊泡复合物(其包含10个或更多个聚集的细胞外囊泡)的数[0137]在某些实施方案中，青光眼参考值可以是每个样品中细胞外囊泡复合物(其包含案中，青光眼参考值可以是每个样品中细胞外囊泡复合物(其包含10个或更多个聚集的细是每个样品中细胞外囊泡复合物(其包含10个或更多个聚集的细胞外囊泡，其中所述复合泡复合物(其包含10个或更多个聚集的细胞外囊泡，其中所述复合物大于360nm)的数量为[0138]在某些实施方案中，青光眼参考值可以是每个样品中大于360nm的细胞外囊泡复眼部病理(例如青光眼)的受试者的房水中的EV复合物超微结构与健康对照(例如除了白内障以外没有眼部病理的受试者)比较。青光眼受试者的房水中EV复合物的水平可能超过健[0149]在另外的实施方案中，[0153]在一些实施方案中，纯化的EV复合物可以提供用于葡萄膜网状结构的大小的颗[0155]在另外的实施方案中，纯化的EV复合物可以提供小管旁网状结构的大小的颗[0161]在另外的实施方案中，合成[0162]在一些实施方案中，合成的EV复合物可提供用于葡萄膜网状结构的大小的颗用于葡萄膜网状结构的合成的EV复合物可以为约10,000nm至约25,000nm，或15,000nm至颗粒。用于角膜巩膜网状结构的合成的EV复合物可以为约1,000nm至约15,000nm，或2,[0164]在另外的实施方案中，合成的EV复合物可提供用于小管旁网状结构的大小的颗粒。用于小管旁网状结构的合成的EV复合物可以为约360nm至约1,000nm，或360nm至2,列素(travoprost)、他氟前列素(tafluprost)、拉坦前列素(latanoprost)、乌诺前列酮[0189]活性剂的实例包括碳酸酐酶抑制剂，例如乙酰唑胺(acetazolamide)、醋甲唑胺雷(glatirameracetate)、补体C5aR阻滞剂、睫状神经营养因子(ciliaryneurotrophic单抗(cetuximab)、伊马替尼(imatinib)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、吉非替尼沙替尼(dasatinib)、舒尼替尼(sunitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、尼洛替尼[0195]活性剂的实例包括抗细菌剂，例如磺胺类药(sulfonamides)、磺胺醋酰[0197]活性剂的实例包括抗病毒剂，例如三氟胸苷(trifluorothymidine)、阿昔洛韦(acyclovir)、更昔洛韦(ganciclovir)、DDI、AZT、膦甲酸(foscamet)、阿糖腺苷(vidarabine)、三氟尿苷(trifluorouridine)、碘苷(idoxuridine)、利巴韦林[0199]活性剂的实例包括抗炎药，例如氢化可的松(hydrocortisone)、地塞米松(dexamethasone)、氟轻松(fluocinolone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙[0200]活性剂的实例包括减充血剂，例如苯肾上腺素(phenylephrine)、萘甲唑啉(naphazoline)和四氢唑啉(tetrahydrazoline)；缩瞳剂(miotics)和毒蕈碱剂[0201]活性剂的实例包括抗胆碱酯酶，例如毛果芸香碱(pilocarpine)、卡巴胆碱[0202]活性剂的实例包括散瞳剂(mydriatics)，例如硫酸阿托品(atropinesulfate)、[0209]活性剂的实例包括抗糖尿病剂，包括醋酸己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、妥拉磺脲[0211]活性剂的实例包括去污剂，例如牛磺胆酸(Taurocholicacid)、甘氨胆酸(Glycocholicacid)、甘氨鹅脱氧胆酸(GlycochenodeoxycholicAcid)、苯甲羟胺米松(Alclometasone)、阿替普酶(Alteplase)、氨苄西林(Ampicillin)、阿奈可他奇霉素(Azithromycin)、苯呋洛尔(Befunolol)、苄达酸(Bendazac)、苄基青霉素(Benzylpenicillin)、贝西沙星(Besifloxacin)、倍他米松、倍他洛尔、铋溴酚甲酰胆碱(Carbamoylcholine)、卡替洛尔(Carteolol)、头孢呋辛(Cefuroxime)、因(Cinchocaine)、环丙沙星(Ciprofloxacin)、氯倍他松(Clobetasone)、可乐定酯、环孢菌素(Cyclosporine)、半胱胺(Cysteamine)、达哌唑(Dapiprazole)、地美溴铵(Demecarium)、地奈德(Desonide)、地塞米松、右泛醇(Dexpanthenol)、双溴丙脒(Dihydrostreptomycin)、地匹福林、多佐胺(Dorzolamide)、二乙氧膦酰硫胆碱(Echothiophate)、依地酸钠(Edetatesodium)、依美斯汀(Emedastine)、麻黄碱(Ephedrine)、依匹斯汀(Epinastine)、肾上腺素(Epinephrine)、红霉素、乙基吗啡比洛芬(Flurbiprofen)、福米韦生(Fomivirsen)、福莫可他(Formocortal)、新霉素B透明质酸(Hyaluronicacid)、氢化可的松、羟丙甲纤维素(Hypromellose)、异波帕胺(Ibopamine)、碘苷、吲哚美辛、肌苷(Inosine)、卡那霉素(Kanamycin)、酮咯酸(Levocabastine)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、利多卡因(Lidocaine)、立他司特(Lifitegrast)、洛度沙胺(Lodoxamide)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯替泼诺明(Neostigmine)、奈帕芬胺(Nepafenac)、奈妥舒迪(Netarsudil)、奈替米星(Netilmicin)、呋喃西林(Nitrofural)、诺氟沙星(Norfloxacin)、奥克纤溶酶(Ocriplasmin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、奥洛他定(Olopatadine)、奥布卡因果芸香碱、吡罗昔康(Piroxicam)、多粘菌素B、碘化钾(PotassiumIodide)、聚维酮碘汀(estramustine)、依托泊苷(etoposide)、依曲替酯(etretinate)、非尔司亭(fluorouracil)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、戈舍瑞林左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、氮芥(nitrogenmustard)、美法仑(melphalan)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素霉素(plicamycin)、甲基苄肼(procarbazine)、沙格莫丁(sargramostin)、链佐星[0229]本发明的实施方案进一步考虑了活性剂用于治疗青光眼病症的用途。在一些方如本文所用，术语表面活性剂(surfaceactiveagent)广泛地指表[0230]活性剂的实例包括表面活性剂，包括芦西纳坦(Lucinactant)、卡尔法坦(Calfactant)、贝拉克坦(Beractant)、泰洛沙泊、月桂醇磺基乙酸钠(Sodiumlauryl[0231]活性剂的实例包括如本文所述的药剂，其可以针对递送或代谢可接受性进行修的活性剂或聚乙二醇化或具有其他链修饰的抗原结合片段的实例包括结合并优先阻断或降低与疾病相关的整联蛋白活性的抗体或抗的CDR环相似的裸露环(exposedloop)中的氨基酸结合其靶抗原。抗体模拟物包括adnectins、脂钙蛋白类(lipocalins)、基于Kunitz域的粘合剂、avimers、扭结菌素类在Weidle等人TheEmergingRoleofNewProteinScaffold-basedAgentsfortheTreatmentofCancer,CancerGenomics&Proteomics10:155-168(2013)中给出了一些实(Procyclidine)、普拉克索(Pramipexole)、恩他卡朋(Entacapone)、比哌立登普罗加比(Progabide)、加巴喷丁(Gabapentin)、美金刚(Memantine)、邻甲苯海明艾芬地尔(Ifenprodil)、奥匹卡朋(Opicapone)、苄丝肼(Benserazide)、美噻吨[0240]活性剂的实例包括前列腺素类，例如依前列醇(Epoprostenol)、地诺前列素(Dinoprost)、卡前列素氨丁三醇(Carboprosttromethamine)、地诺前列素氨丁三醇(Dinoprosttromethamine)、地诺前列酮(Dinoprostone)、前列腺素D2(ProstaglandinSepetaprost、比马前列素、芬前列林(Fenprostalene)、拉坦前列素硝酸酯E1(ProstaglandinE1)、氯前列醇、曲前列尼尔(Remodulin)、群勃龙环己甲基碳酸酯(TrenboloneCyclohexylmethylcarbonate)、前列腺素F2a、伊洛前列素、米索前列醇酸(MisoprostolAcid)、吉美前列素、9-去氧-9-亚甲基-16,16-二甲基前列腺素E2、[0241]活性剂的实例包括维生素，例如1-α,25-二羟基[0243]活性剂的实例包括类固醇，例如氢化可的松环戊丙酸酯(Hydrocortisonecypionate)、氢化可的松戊酸酯(Hydrocortisonevalerate)、氢化可的松丁酸酯曲洛司坦(Trilostane)醋酸氢化可的松(Hydrocortisoneacetate)、胆固醇亚油酸酯化醇(Eldecalcitol)醋酸孕烯醇酮(Pregnenoloneacetate)、丙酸睾酮(Testosteronepropionate)屈螺酮(Drospirenone)克拉考特酮(Clascoterone)炔诺酮庚酸酯羟孕酮(Hydroxyprogesteronecaproate)、乙酸去甲雄三烯醇酮(Trenboloneacetate)、氟前列醇(Fluprostenol)醋酸阿奈可他(Anecortaveacetate)夹竹桃苷(Oleandrin)醋酸酯(Dimethylcarbate)、钙泊三醇lα,24S-二羟基维生素D2(Calcipotriol1alpha,24S-DihydroxyvitaminD2)、双醋炔诺醇(Ethynodioldiacetate)、葵酸诺龙(Nandrolonedecanoate)、环戊丙酸睾酮(Testosteronecypionate)、十一烷酸睾酮(Testosteronealpha-ol-hemisuccinate)、依普利酮(Eplerenone)、琥珀酸睾酮(Testosteronesuccinate)和宝丹酮十一烯酸酯(Boldenone(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀[0245]活性剂的实例包括聚集抑制剂，例如己酮可可碱(Pentoxifylline)、阿加曲班[0248]活性剂的实例包括内酯，例如ReidispongiolideA和SoraphenA，以及坎利酮[0251]活性剂的实例包括脂质，例如赤霉[0263]可以通过将组合物溶解在水中以产生水溶液并使该溶液无菌来制备活性剂的制[0267]眼科制剂可以是用于局部施用的溶液或悬浮液。组合物可以是粘性或半粘性凝[0276]本发明的组合物的剂型可以是液体或乳剂。本发明的组脱水山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸[0279]本发明的多个实施方案可以有利地在显著低于常规剂量水平的剂量水平下提供[0284]载体、赋形剂和添加剂的一些实例在以下文献中给出：美国药典国家处方集(U.S.PharmacopeiaNationalFormulary)(2014)；HandbookofPharmaceuticalExcipients(2013年第7版)；HandbookofPreservatives(2004，SynapseInformationResources)；Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(2013年第22版)；实例在以下文献中给出：Goodman和Gilman，ThePharmacologicalBasisof氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。[0328]描述了细胞外囊泡的分离和纯化。我们采用了从流体中分离细胞外囊泡的方对于牛玻璃体液或房水，将约8ml玻璃体液(或100μl房水)放入15ml管中，并于4℃下以布和颗粒浓度。创建图形。在帧之间跟踪每个颗粒的布朗运动，最终通过应用Stokes-[0330]描述了用于电子显微镜术的液体样品的常规仅戊二醛固定。用常规TEM固定方法量了0.96ml的0.1M1-甲基咪唑缓冲溶液，并添加了13mg的5-(乙硫基)-1H-四唑(ETT，的TBS(pH8.0)中，并保持在4℃下。我们获得了弗姆瓦/碳涂布的EM网格(Electron液出气泡来去除戊二醛溶液。通过将15μl的双蒸馏水置于网格上并在室温下孵育5分钟来[0334]描述了透射电子显微镜成像。在100kV下运行的JEM1400电子显微镜(JEOL,USA,包埋在Embed812树脂(ElectronMicroscopySciences)中。在LeicaUltracutT超微切片机(LeicaMicrosystems)上使用Diatome金刚石刀(Diatome)以60-65nm切割组织切片。将切片用柠檬酸铅对比21，并在于100kV下运行的JEM1400电子显微镜(JEOL,USA,Inc)上[0354]4.用胶带或重物将一张羊皮纸向下固定到一个[0370]用比马前列素处理POAG房水样品以及用EDC固定流体、负染色和TEM成像的方[0371]卢美根(Lumigan)直接从分配瓶中获得，且未经稀释。将10ulPOAG样品与10ul[0385]4.用胶带或重物将一张羊皮纸向下固定到一个液、methacam、乙醇福尔马林(alcoholicformalin)和甲醛乙酸乙醇(formolacetic比较所述受试者的包含用不可逆交联剂和含醛固定剂固定的青光眼相关的细胞外囊泡复泡是细胞外囊泡的聚集体或直径大于300纳米的个体细胞外囊泡；使候选药剂与青光眼相利要求的范围内无需过度实验就可以实施，所附权利要求通过说明而非限制的方式提出。发现此技术导致不一致的结果或经常是阴性的结果。当检查施加至溶液的已知量的EV时，了可视化悬浮在流体中的玻璃体EV的超微结构，我们遵循常规的基于戊二醛的TEM成像方了确定丢弃的溶液中是否存在大量的EV，我们测量并比较了从4T1乳腺癌细胞系中分离并重悬在缓冲盐水中的EV的数量和大小。我们发现4T1EV的浓度为8.63x108个颗粒/ml(±[0456]表2显示细胞外囊泡与电子显微镜网格的附着性差。我们测定了施加到网格表面小鼠乳腺肿瘤细胞系4T1细胞培养基中分离出EV，并使用纳米颗粒跟踪分析(NTA)使用NTA成像。我们假设EV与TEM网格的结合差，并试图通过添加热稳定性固定剂EDC(一种碳二亚胺)在蛋白的带正电荷的氨基侧链与羧基之间产生不可逆的交联，从而永久性地将悬浮在何青光眼相关的EV聚集体。我们假设与健康对照(除了白内障以外没有其他眼部病理的受择性白内障手术的健康对照患者(对照组)或2)从诊断为青光眼的患者(POAG组)获得了房样品分配了数字研究ID代码以对其进行去识别(de-identify)，并立即将其从OR转移到实[0466]实施例8.对POAG房水的超微结构的原位成像显示相当大的青光眼相关的EV复合了确定使用EDC固定方法可视化的青光眼相关的EV聚集体是否确实是POAG的潜在介导物，我们假设用已知的青光眼药物对其进行处理会改变青光眼相关的EV聚集体的形态。因此，理的POAG样品相比，POAG-比马前列素样品中青光眼相关的EV复合物的数量大幅减少(图[0468]实施例10.青光眼患者的房水包含较大为了定量青光眼相关的EV聚集体中发现的EV数量，我们对图像中存在的EV总数进行计数，的直径在100-200nm之间(图17)。此外，我们观察到对照组中的大多数EV没有与其他EV接[0471]实施例13.诊断为POAG的受试者房水中的细胞外囊泡位于青光眼相关的EV聚集体相关的EV聚集体。我们观察到存在于聚集体内的EV(定义为彼此接触的EV)或游离EV(彼此[0472]实施例14.当与健康对照受试者的房水[0473]实施例15.存在于青光眼相关的EV聚集体内的来自POAG房水的细胞外囊泡与从健[0474]实施例16.用于治疗青光眼的活[0477]通过在微量离心管中称量化合物并将固体物质溶解在pH7.2的1xPBS缓冲液中℃)和涡旋混合以促进溶解。[0479]为了确定该化合物对眼内压(IOP)的影响，在微流体芯片装置中在牛玻璃体液[0480]通过用PBS缓冲液稀释100％的均质化BVH来制备25％的均质化牛玻璃体液(BVH)[0481]将测试BVH溶液引入装置的储器中。将流体探针连接到微流体芯片的入口，并用PBS作为源流体来建立2ul/min的流速。一旦流体开始从芯片的出口流出并达到2ul/min的[0482]图25显示，与对照相比，药剂氯化十六烷基吡啶降低了青光眼模型中的眼内压化十六烷基吡啶在降低青光眼模型中的IOP方面[0483]实施例17.用于治疗青光眼的活性剂[0485]通过在微量离心管中称量化合物并将固体物质溶解在pH7.2的1xPBS缓冲液中℃)和涡旋混合以促进溶解。[0487]为了确定该化合物对眼内压(IOP)的影响，在微流体芯片装置中在牛玻璃体液[0488]通过用PBS缓冲液稀释100％的均质化BVH来制备25％的均质化牛玻璃体液(BVH)[0489]将测试BVH溶液引入装置的储器中。将流体探针连接到微流体芯片的入口，并用PBS作为源流体来建立2ul/min的流速。一旦流体开始从芯片的出口流出并达到2ul/min的[0491]实施例18.用于治疗青光眼的活性剂可以是[0493]通过在微量离心管中称量化合物并将固体物质溶解在pH7.2的1xPBS缓冲液中℃)和涡旋混合以促进溶解。[0496]通过用PBS缓冲液稀释100％的均质化BV