生物药品制剂菌种与细胞株建库保藏管理手册

生物药品制剂菌种与细胞株建库保藏管理手册第1章建库前的准备工作1.1菌种与细胞株的筛选与鉴定1.2菌种与细胞株的保藏条件与环境要求1.3菌种与细胞株的保藏方法与技术1.4菌种与细胞株的登记与编号管理1.5菌种与细胞株的实验记录与档案管理第2章菌种与细胞株的建库流程2.1菌种与细胞株的采集与制备2.2菌种与细胞株的纯化与分离2.3菌种与细胞株的基因型鉴定2.4菌种与细胞株的保藏与入库2.5菌种与细胞株的复核与确认第3章菌种与细胞株的保藏管理3.1保藏环境的控制与维护3.2保藏容器与储存设备的管理3.3保藏过程中的质量控制与监控3.4保藏期间的定期检查与记录3.5保藏材料的保存与发放管理第4章菌种与细胞株的使用与管理4.1菌种与细胞株的使用规范4.2菌种与细胞株的使用记录与管理4.3菌种与细胞株的使用审批与授权4.4菌种与细胞株的使用培训与考核4.5菌种与细胞株的使用过程监控第5章菌种与细胞株的鉴定与评估5.1菌种与细胞株的形态学鉴定5.2菌种与细胞株的生化鉴定5.3菌种与细胞株的分子生物学鉴定5.4菌种与细胞株的稳定性评估5.5菌种与细胞株的遗传多样性分析第6章菌种与细胞株的档案管理6.1菌种与细胞株的档案分类与编号6.2菌种与细胞株的档案内容与格式6.3菌种与细胞株的档案存储与备份6.4菌种与细胞株的档案查阅与借阅6.5菌种与细胞株的档案更新与维护第7章菌种与细胞株的应急预案与处理7.1菌种与细胞株的突发情况处理7.2菌种与细胞株的保藏事故应对7.3菌种与细胞株的应急储存与转移7.4菌种与细胞株的应急培训与演练7.5菌种与细胞株的应急资源保障第8章附录与参考文献8.1附录一：菌种与细胞株的分类标准8.2附录二：菌种与细胞株的保藏技术规范8.3附录三：菌种与细胞株的使用操作规程8.4附录四：菌种与细胞株的管理考核与评价8.5附录五：相关法规与标准参考文献第1章建库前的准备工作1.1菌种与细胞株的筛选与鉴定菌种筛选应基于生物安全标准和功能需求，选择生长良好、遗传稳定、生产性能优良的菌株，通常采用形态学、生理生化及分子生物学方法进行综合鉴定。采用DNA条形码技术可提高鉴定准确性，如16SrRNA基因测序，可有效区分近缘菌株，确保菌种来源的可靠性。筛选过程中需建立菌种表型观察记录表，包括菌落形态、生长速率、代谢产物等特征，为后续保藏提供基础数据。对于工业级菌种，需通过菌种性能测试（如发酵能力、产物产量等）评估其工业化应用潜力，确保其符合工艺要求。筛选结果应记录于菌种档案，包括来源、编号、筛选依据及实验数据，为后续建库提供科学依据。1.2菌种与细胞株的保藏条件与环境要求保藏环境应保持恒定温湿度，一般采用-80℃超低温冷冻保存，或在4℃恒温箱中短期储存，具体取决于菌种特性。超低温保存时，需使用专用的冻存液（如甘油-氯化铵混合液）以维持细胞活性，保存时间通常为2-3年，但需定期复苏检测。高湿环境（>70%RH）可能影响菌种活性，因此需在无菌条件下进行保藏，避免微生物污染。保藏容器应为惰性材料（如玻璃、塑料），并定期更换冻存液，防止冻存液污染或结晶析出。保藏期间需记录温湿度、保存时间及菌种状态，确保数据可追溯。1.3菌种与细胞株的保藏方法与技术常见保藏方法包括冷冻保存、液氮保存、干燥保存及菌种银行保存。冷冻保存是通用方法，适用于多数菌种，但需注意冻存液的配比与保存周期。液氮保存适用于短期保存，可延长保存时间至10年以上，但需在液氮罐中操作，且需配备专用设备。干燥保存（如真空冷冻干燥）适用于抗逆性强的菌种，但需在无菌条件下操作，避免污染。菌种银行保存需建立标准化流程，包括菌种编号、存储条件、操作记录等，确保菌种可长期稳定保存。保藏过程中需定期进行活菌检测，确保菌种活性未下降，必要时进行复苏实验。1.4菌种与细胞株的登记与编号管理菌种需赋予唯一编号，通常采用“菌株编号+年份+实验室编号”格式，确保编号系统化、可追溯。登记内容包括菌株来源、培养基、保存条件、实验数据及操作人员信息，确保信息完整、准确。采用电子化管理系统（如LabArchives、GeneBank）进行登记，实现菌种信息的数字化存储与共享。菌种编号需符合国家或行业标准，避免重复或混淆，确保管理规范。登记时需留有操作记录，包括保存日期、操作人员、检查人等，确保可审计性。1.5菌种与细胞株的实验记录与档案管理的具体内容实验记录应包括菌种来源、筛选方法、鉴定结果、保存条件、实验操作步骤及结果，确保可重复性。档案管理需建立菌种档案数据库，包含菌株信息、保存状态、实验数据及历史记录，便于查询与调阅。档案应定期更新，记录菌种的生长情况、保存状态及实验变更，确保信息动态更新。档案需由专人负责管理，确保数据安全，避免丢失或篡改。档案应保存至少5年，以备后续研究或应用需求，确保可追溯性。第2章菌种与细胞株的建库流程1.1菌种与细胞株的采集与制备采集菌种应遵循无菌操作规范，使用无菌接种环、无菌培养皿等工具，确保采集过程无污染。采集的菌种需在4℃以下冷藏保存，避免微生物活性下降。采集的菌种需进行初步培养，通常在液体培养基中培养24-48小时，观察菌体生长情况，确保菌种处于稳定状态。采集后需进行菌种编号与登记，包括菌株名称、来源、采集日期、操作人员等信息，确保信息可追溯。采集的菌种需进行形态学观察，包括菌落形态、颜色、大小、质地等，作为菌种鉴定的初步依据。采集的菌种需进行初步的生化试验，如糖发酵试验、蛋白质分解试验等，以辅助判断菌种的分类。1.2菌种与细胞株的纯化与分离纯化菌种通常采用平板划线法或斜面接种法，通过多次划线分离菌种，去除杂菌污染。纯化后的菌种需在无菌条件下进行培养，确保菌种处于稳定状态，避免在培养过程中发生变异。纯化后的菌种需进行菌落形态观察，确保菌落一致、无杂菌污染。纯化后的菌种需进行菌种活力检测，如菌体活性、生长速率等，确保其可用于后续实验。纯化后的菌种需进行菌种编号与登记，确保每个菌种都有唯一的标识，并记录其生长特性。1.3菌种与细胞株的基因型鉴定基因型鉴定可通过分子生物学方法，如PCR、DNA测序等，确定菌种的遗传组成。常用的基因型鉴定方法包括16SrRNA基因测序、菌株指纹图谱分析等，能够准确识别菌种的分类。基因型鉴定需在实验室条件下进行，确保实验结果的准确性和可重复性。基因型鉴定结果需与菌种的形态学特征相结合，以确认菌种的准确性。基因型鉴定结果需记录在菌种档案中，并作为菌种保藏的重要依据。1.4菌种与细胞株的保藏与入库菌种保藏通常采用沙土管、甘油管或冻存液等方法，确保菌种在低温下保持活性。保藏的菌种需在-80℃恒温箱中保存，避免反复冻融导致菌种活性下降。保藏的菌种需进行定期检查，包括菌种活性、形态变化等，确保其处于良好状态。保藏的菌种需按照规定的保存期限进行管理，确保其在保藏期间不会发生污染或变异。保藏的菌种需进行登记，包括保存日期、保存方法、保存人员等信息，确保可追溯性。1.5菌种与细胞株的复核与确认复核包括菌种编号的准确性、保藏记录的完整性、实验数据的合理性等。复核需由两名以上人员进行，确保复核结果的客观性和公正性。复核过程中需检查菌种的生长特性、基因型鉴定结果、保藏条件等是否符合标准。复核结果需形成书面报告，作为菌种入库的依据。复核后，菌种方可正式入库，并纳入菌种数据库进行长期管理。第3章菌种与细胞株的保藏管理3.1保藏环境的控制与维护保藏环境应保持恒温恒湿，通常控制在20-25℃，湿度50%±5%，以避免微生物生长和细胞活性下降。此条件符合《微生物菌种保藏管理办法》中的标准要求。采用恒温恒湿箱或生物安全柜进行环境控制，确保温湿度稳定，避免温差波动对菌种活性的影响。定期监测温湿度，使用数字温湿度计或智能温控系统，确保数据可追溯，符合ISO14644-1标准。对于高活性菌种，需在低温（如4℃）环境下保藏，以减少代谢活动，延长保藏周期。保藏环境应定期消毒，避免杂菌污染，定期更换过滤器，确保环境洁净度符合GB14934-2011标准。3.2保藏容器与储存设备的管理保藏容器应为惰性材料，如玻璃瓶、不锈钢罐或专用保藏袋，避免有机材料对菌种产生污染。采用无菌操作技术，确保容器在使用前灭菌，符合《微生物菌种保藏规范》中的要求。保藏设备如恒温箱、冷藏箱应定期校准，确保温控精度在±1℃以内，符合GB14934-2011标准。保藏设备应有明确标识，包括菌种名称、编号、保藏日期、保藏人等信息，便于追溯。定期检查设备运行状态，确保无漏电、漏气、漏液等安全隐患，符合《生物安全实验室管理规范》。3.3保藏过程中的质量控制与监控保藏过程中应严格遵循操作规程，避免人为操作失误导致菌种污染或活性丧失。每次保藏前需进行菌种活性检测，如通过MTT法或比色法评估菌株生长状态，确保保藏材料符合要求。保藏过程中应记录菌种的生长特性、代谢产物、基因型等信息，形成电子档案，便于后续研究。对于高价值菌株，应采用冷冻干燥或超临界干燥等方法，减少水分含量，延长保藏时间。定期进行菌种的遗传稳定性检测，确保其在保藏期间保持遗传不变性，符合《微生物菌种保藏与使用规范》。3.4保藏期间的定期检查与记录保藏期间应定期检查菌种的生长状态、活性及是否出现异常现象，如颜色变化、菌落形态异常等。每月进行一次菌种的菌落计数、生长速率及代谢产物检测，确保其保持稳定。保藏记录需详细记录保藏日期、温度、湿度、操作人员、检查人员及结果，形成电子或纸质档案。对于高活性菌种，应采用动态监测方法，如实时荧光定量PCR或基因测序，确保其遗传稳定性。建立保藏档案数据库，实现菌种信息的数字化管理，便于查询与追溯。3.5保藏材料的保存与发放管理保藏材料应按照分类存放，如菌种培养物、细胞株、基因组DNA等，避免交叉污染。保藏材料应使用专用标签，标明菌种名称、编号、保藏日期、保藏人、操作人员等信息，确保可追溯。保藏材料发放需经审批，确保仅用于指定研究项目，避免误用或滥用。保藏材料应定期进行质量验证，如通过菌落形态、生长速率、遗传稳定性等指标评估其有效性。保藏材料的发放应有记录，包括发放日期、使用人、用途及使用情况，确保管理规范。第4章菌种与细胞株的使用与管理4.1菌种与细胞株的使用规范菌种与细胞株的使用应遵循“先鉴定、后使用”原则，确保菌株来源可靠、鉴定准确，符合GMP（良好生产规范）要求。使用前需进行菌种溯源，包括菌株编号、来源、培养基、传代次数及保存条件等信息，确保可追溯性。菌种使用应遵循“最小化使用”原则，避免不必要的重复传代，减少菌种污染风险。对于高价值或关键菌株，应建立专属使用权限，确保仅限授权人员操作，防止误用或滥用。使用过程中需记录菌种名称、使用日期、用途及操作人员，确保数据完整，便于后期审计与追溯。4.2菌种与细胞株的使用记录与管理建立菌种使用记录档案，包括菌种编号、来源、培养条件、使用日期、操作人员等信息，确保数据可追溯。使用记录需定期归档，按时间顺序或类别分类存储，便于查阅与审计。建议采用电子化管理系统，实现菌种使用数据的实时记录与共享，提升管理效率。每次使用后需进行菌种状态评估，包括菌落形态、生长情况及污染风险，确保菌种健康。对于长期保存的菌株，应定期进行活菌计数及遗传稳定性检测，确保其保持原有特性。4.3菌种与细胞株的使用审批与授权菌种使用需经审批，包括使用目的、使用范围、使用人员及使用期限等，确保操作规范。对于高风险菌株或关键工艺用菌株，应由技术负责人或质量负责人审批，确保使用符合质量要求。菌种使用授权应记录在案，包括授权人、授权日期、使用权限及使用限制，确保权限清晰。授权人员需定期接受培训，确保其具备相应操作能力和知识水平，防止操作失误。对于临时性或非关键菌株，可由实验室负责人批准，但需记录审批过程及依据。4.4菌种与细胞株的使用培训与考核实验室应定期组织菌种使用培训，内容涵盖菌种特性、操作规范、安全注意事项等。培训需结合实际操作，如菌种接种、培养、传代等，确保理论与实践结合。培训后需进行考核，考核内容包括知识掌握及操作能力，确保员工具备合格操作水平。考核结果应记录并作为员工资格认证依据，确保操作人员能力符合岗位要求。对于关键菌株的操作人员，应定期进行复训与考核，确保操作技能持续有效。4.5菌种与细胞株的使用过程监控的具体内容使用过程中应实时监控菌种生长状态，包括菌落形态、生长速度、培养基pH值等，确保菌种健康。定期进行菌种传代操作，记录传代次数、培养条件及菌种状态，避免菌种衰退或污染。对于高风险菌株，应加强监控，包括菌种污染检测、遗传稳定性分析及生长性能评估。使用过程中需记录所有操作步骤，包括菌种编号、操作人员、操作时间及结果，确保可追溯。对于长期保存的菌株，应定期进行活菌计数和基因型检测，确保菌种的稳定性和安全性。第5章菌种与细胞株的鉴定与评估5.1菌种与细胞株的形态学鉴定形态学鉴定是确定菌种和细胞株基本分类的重要手段，包括菌体形状、大小、颜色、菌落形态、革兰氏染色结果等。常用方法有显微镜观察、微生物培养和染色技术，如革兰氏染色、瑞氏染色等。通过显微镜观察菌体形态和细胞结构，可初步判断菌种是否为革兰氏阳性或阴性，以及是否具有特殊结构如芽孢、荚膜等。菌落形态的观察包括颜色、透明度、大小、形状及是否具有粘性、是否产生色素等，这些特征有助于区分不同菌种。采用显微镜下的细胞染色技术，如孔雀绿染色、革兰氏染色，可进一步确认菌种的分类。通过培养基的生长情况，如菌落的生长速度、菌体的形态变化等，可辅助判断菌种的生理特性。5.2菌种与细胞株的生化鉴定生化鉴定是通过检测菌种的生化反应，如糖发酵、氧化还原反应、酶活性等，来确定其分类。常用的生化试验包括糖发酵试验（如葡萄糖、蔗糖、乳糖等）、氧化酶试验、过氧化物酶试验等。通过生化试验可以判断菌种是否属于特定属或种，例如乳糖发酵试验可帮助区分肠杆菌属与葡萄球菌属。有些生化试验需要特定的培养条件和时间，如产气肠杆菌的产气试验需要特定的培养基和温度。生化鉴定结果需与已知菌种的生化特性进行比对，以确认菌种的准确性。5.3菌种与细胞株的分子生物学鉴定分子生物学鉴定是利用DNA分析技术，如聚合酶链式反应（PCR）、基因测序、PCR-RFLP等，对菌种进行精确分类。通过PCR扩增特定基因片段（如16SrRNA基因），可快速鉴定菌种的分类地位。基因测序技术可提供菌种的完整基因组信息，有助于识别菌株之间的遗传差异。PCR-RFLP技术可检测特定基因的多态性，用于菌株的分类和鉴定。分子生物学鉴定结果通常需要结合形态学和生化结果，以提高鉴定的准确性。5.4菌种与细胞株的稳定性评估稳定性评估是确保菌种保藏质量的重要环节，包括菌种的存活率、遗传稳定性、生长状态等。通过定期培养和观察菌体的生长情况，可评估菌种的存活率和生长能力。稳定性评估还涉及菌种的遗传变异，如通过PCR检测菌株的DNA是否稳定，避免因突变导致的分类错误。一些菌种在保藏过程中可能因环境因素（如温度、湿度、pH）而发生变异，需定期检测其生长状态。稳定性评估的标准通常包括菌种的存活率、生长速度、菌落形态等指标，确保其在保藏期间保持一致。5.5菌种与细胞株的遗传多样性分析的具体内容遗传多样性分析是通过分子标记技术，如随机扩增多态性DNA（RAPD）、微卫星标记、全基因组测序等，评估菌种的遗传变异情况。RAPD技术利用随机引物进行DNA扩增，可检测菌株间的遗传差异，适用于快速评估菌株的遗传多样性。微卫星标记（SSR）具有高灵敏度和重复性，常用于菌种的遗传分类和亲缘关系分析。全基因组测序可提供菌种的完整遗传信息，有助于识别菌株之间的遗传关系和进化关系。遗传多样性分析结果需结合菌种的形态学和生化特性，以全面评估其遗传稳定性与分类准确性。第6章菌种与细胞株的档案管理6.1菌种与细胞株的档案分类与编号菌种与细胞株的档案应按品种、来源、培养条件、实验阶段等进行分类，通常采用“品种-菌株-编号”三级编码体系。每个菌株应有唯一编号，编号需包含菌株名称、来源、培养基、实验编号等信息，确保可追溯性。国际标准如ISO13485和GMP对菌种档案的编号有明确规定，需遵循相关规范，避免混淆。一般采用数字编码（如菌株编号：B-001）或字母加数字组合（如B-001-01），并记录于档案中。档案编号需定期更新，确保信息准确无误，避免重复或遗漏。6.2菌种与细胞株的档案内容与格式档案应包含菌种基本信息，如名称、来源、培养条件、遗传背景、保藏机构、保藏日期等。每个菌株应有详细的培养记录，包括培养基、培养条件、接种量、培养时间、菌落形态等。档案需记录菌株的遗传特性，如基因型、基因序列、突变信息等，必要时引用文献如《微生物学原理》中的描述。档案应包含菌株的实验数据，如发酵数据、产量、活性等，用于后续研究和应用。档案格式应统一，包括菌株名称、编号、保藏机构、保藏日期、责任人、审核人等字段，便于信息检索。6.3菌种与细胞株的档案存储与备份档案应存储于专用服务器或云存储系统中，确保数据安全和可访问性。建立多副本备份机制，包括本地备份、云备份和异地备份，防止数据丢失。备份频率应根据数据重要性确定，一般为每日、每周或每月一次，确保数据持续更新。备份文件应使用加密技术，防止未经授权的访问和数据泄露。档案存储环境应符合温湿度要求，避免微生物污染或设备损坏，确保长期保存。6.4菌种与细胞株的档案查阅与借阅档案查阅需由授权人员进行，通常由实验负责人或生物安全管理人员审批。借阅时需填写借阅申请表，注明查阅目的、时间、人员及用途，确保规范操作。借阅档案应登记在借阅系统中，记录借阅人、借阅日期、归还日期及使用情况。借阅档案应遵循“谁借谁还”原则，归还后需及时归档，确保档案完整性。档案查阅应遵循保密原则，涉及商业或敏感信息时需特别审批。6.5菌种与细胞株的档案更新与维护的具体内容档案需定期更新，包括菌株的培养状态、实验数据、遗传信息等，确保信息时效性。每次菌株传代或实验结束后，应记录菌株的生长状态、实验结果及操作人员签名。档案维护需由专人负责，定期检查档案完整性，及时补充缺失内容。档案应与菌株的培养记录、实验记录、文献资料等同步更新，确保信息一致。档案维护应纳入实验室管理流程，与菌种保藏、实验记录、质量控制等环节联动。第7章菌种与细胞株的应急预案与处理7.1菌种与细胞株的突发情况处理菌种与细胞株在生产过程中可能遇到的突发情况包括污染、灭活、变异、灭失等，需根据具体情况采取应急措施，例如立即停止相关操作，启动应急预案流程，确保生产安全与质量。根据《生物安全法》及相关行业规范，突发情况处理应遵循“预防为主、应急为辅”的原则，确保在突发情况下能够快速响应，减少对生产、质量及人员安全的影响。对于菌种污染，应立即隔离受污染的菌株，并进行彻底的灭菌处理，必要时进行基因测序和菌株鉴定，以确定污染来源并采取相应措施。在处理突发情况时，应记录全过程，包括时间、操作人员、处理方式及结果，确保可追溯，便于后续分析与改进。建议定期开展突发情况模拟演练，提高相关人员的应急处理能力，确保在实际发生时能够迅速、有效地应对。7.2菌种与细胞株的保藏事故应对菌种与细胞株的保藏事故可能包括冻存不当、运输过程中的损坏、存储环境失衡等，需根据事故类型采取针对性措施，如重新冻存、修复或重新培养。根据《微生物保藏规范》（GB15196-2014），保藏事故应对应遵循“快速响应、科学处理、防止扩散”的原则，确保菌种的完整性与活性。若菌种因冻存不当出现活性下降，应采用适当的方法进行复苏，如使用特定的复苏培养基或低温复苏技术，以恢复其生长能力。对于严重损坏的菌株，应进行基因组测序分析，确认其是否仍具有活性或是否需要重新建库。建议建立保藏事故应急处理流程，明确责任人与处理步骤，确保在事故发生时能够迅速启动应急响应机制。7.3菌种与细胞株的应急储存与转移应急储存是指在突发情况下，为保障菌种的活性和稳定性，采取临时存储措施，如在低温恒温箱中进行短期保存。根据《微生物储存与运输规范》（WS/T511-2019），应急储存应符合特定的温度、湿度和时间要求，确保菌种在应急状态下仍能保持活性。菌种转移应遵循“安全、快速、高效”的原则，采用专用运输工具和冷链系统，确保菌种在转移过程中不受损。转移过程中应记录温度、时间、人员操作等关键信息，确保可追溯。建议建立菌种应急储存与转移的标准化操作流程，确保在突发情况下能够快速、安全地完成菌种的转移。7.4菌种与细胞株的应急培训与演练应急培训是确保相关人员掌握菌种与细胞株管理知识和应急处理技能的重要手段，应定期组织培训，提高操作规范性和应急反应能力。根据《生物安全培训规范》（GB/T33214-2016），培训内容应包括菌种管理、应急处理、操作规程等，确保相关人员熟悉相关流程。演练应模拟实际突发情况，如菌种污染、保藏事故、运输中断等，通过实战演练提升团队的应变能力。建议每半年开展一次应急演练，结合实际案例进行模拟，并记录演练过程和结果，用于后续改进。培训与演练应纳入年度计划，确保相关人员持续提升应急处理能力，降低突发情况带来的风险。7.5菌种与细胞株的应急资源保障的具体内容应急资源保障应包括菌种保藏库的基础设施、设备、试剂、培养基、检测仪器等，确保在突发情况下能够正常运作。根据《生物制剂生产与质量控制规范》（ICHQ7A），应急资源应具备足够的数量和多样性，以应对不同突发情况的需求。应急资源应定期进行检查和更新，确保其有效性，如培养基、试剂、检测设备等应保持良好状态。应急资源应建立台账，明确责任人和使用流程，确保在突发情况下能够迅速调用。应急资源保障应与生产、质量、安全等相关部门协同配合，形成统一的应急体系，提高整体应对能力。第8章附录与参考文献8.1附录一：菌种与细胞株的分类标准菌种与细胞株的分类应依据其生物学特性、遗传背景、用途及保存条件等进行科学划分，通常采用国际通用的菌种分类系统，如《国际菌种分类命名原则》（ISO11292-1:2013）所规定，确保分类的科学性和可追溯性。根据其生长特性，可将菌种分为原核型、真核型、转基因型等，同时根据其应用目的分为生产型、研究型、临床型等，以明确其用途和管理要求。本手册建议采用“菌种编号系统”进行统一管理，如采用“菌株编号=菌种名称+菌株编号+年份”格式，确保编号的唯一性和可查性。对于高价值或敏感菌种，应建立专属的分类档案，记录其来源、遗传背景、保存条件、实验记录等关键信息，确保数据的完整性与可追溯性。根据《微生物菌种保藏与管理规范》（GB15196-2017），应定期对菌种进行分类更新，确保分类标准与实际应用保持一致。8.2附录二：菌种与细胞株的保藏技术规范保藏菌种应采用合适的保存方法，如液氮超低温保存、冻干保存、菌种冷冻保存等，根据菌种特性选择最佳保存方式，以保证其遗传稳定性。液氮保存的温度应控制在-196℃，保存时间一般不超过1年，但需根据菌种的代