ISOTS 57982022 体外诊断试验系统.用核酸扩增法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的要求和建议标准立项发展报告

标题：体外诊断试验系统用核酸扩增法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的要求和建议标准立项发展报告EnglishTitle:StandardizationDevelopmentReport:Invitrodiagnostictestsystems—Requirementsandrecommendationsfordetectionofsevereacuterespiratorysyndromecoronavirus2(SARS-CoV-2)bynucleicacidamplificationmethods摘要摘要本报告系统阐述了国际标准ISO/TS5798:2022《体外诊断试验系统用核酸扩增法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的要求和建议》的立项背景、核心内容与发展意义。面对2019年全球爆发的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情，快速、准确、可靠的核酸检测成为公共卫生应急处置的关键环节。该标准的制定旨在应对疫情期间体外诊断（InVitroDiagnostic,IVD）领域对SARS-CoV-2核酸检测试剂和方法的迫切需求，填补国际标准化在这一特定领域的空白。报告详细梳理了该标准从评估到技术规范草案、再至最终发布的立项历程，深入解析了标准中关于检测靶标选择、引物与探针设计、质量控制、样本处理及性能验证的核心技术要求与关键建议。本报告指出，ISO/TS5798:2022不仅为全球范围内的核酸检测试剂制造商提供了统一的技术开发指南，也为医疗机构、临床实验室及检测机构建立标准操作流程提供了权威依据。通过分析该标准的发布意义，报告强调其在提升全球疫情应对能力、促进检测结果国际互认、以及推动IVD行业规范化发展方面发挥了不可替代的作用。本报告适用于标准化工作者、体外诊断领域研发人员、临床检验管理者和公共卫生政策制定者参考。关键词ISO/TS5798:2022；核酸扩增法；严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）；体外诊断（IVD）；国际标准化；质量控制；性能验证。KeywordsISO/TS5798:2022;NucleicAcidAmplificationMethods;SARS-CoV-2;InVitroDiagnostic(IVD);InternationalStandardization;QualityControl;PerformanceVerification.正文一、引言：标准立项的时代背景与紧迫性2019年底，由SARS-CoV-2引发的COVID-19疫情迅速席卷全球，构成“国际关注的突发公共卫生事件”。在疫情的早期应对、大规模筛查、病例确诊和疫情监测中，基于核酸扩增法（NAAT）的检测技术因其高灵敏度和高特异性被公认为诊断的“金标准”。然而，在疫情爆发初期，市场上涌现了大量由不同国家、不同厂商研发的核酸检测产品。这些产品的设计原理、性能指标、质量水平参差不齐，导致检测结果存在差异，甚至出现假阴性/假阳性报告，严重影响疫情防控决策的有效性和国际间的信息互通与协作。在此背景下，国际标准化组织（ISO）深刻认识到，制定一项全球统一的技术规范迫在眉睫。该规范不仅需要覆盖从靶点选择到结果判读的完整技术链条，还需结合疫情发展动态和病毒变异特点，提供具有指导性和前瞻性的要求与建议。因此，ISO/TS5798:2022的立项，是国际社会从无序应对向科学、规范、标准化防控转变的关键一步，也是全球体外诊断领域首次针对一种新发突发病原体的检测方法制定如此快速、全面的技术规范。二、标准核心内容与技术规范解析1.检测靶标与设计策略该标准首先对检测靶标的选择提出了核心要求。鉴于RNA病毒的高变异性，标准明确指出，理想的检测靶标应选择在病毒基因组中高度保守、且在不同变异株中不易发生突变的区域。最常被推荐的靶标包括：-开放阅读框（ORF）基因：尤其是ORF1ab区域，因其序列相对保守，是多数双靶点或多靶点检测方案的基石。-核壳蛋白（N）基因：该基因表达量大，是提高检测灵敏度的关键靶点。-包膜蛋白（E）基因：常用于初步筛查，特别是在高通量检测中。标准强调，应优先选择至少两个靶标基因进行检测，以降低因单个靶标基因突变导致的脱靶风险（假阴性）。这种“多靶标”策略在国际标准层面的确认，对指导全球核酸检测产品的设计方向起到了关键作用。2.引物与探针设计引物和探针是核酸检测的核心元件。ISO/TS5798:2022要求制造商在设计时必须进行全面的生物信息学分析，包括：-特异性分析：确保引物/探针与SARS-CoV-2序列完全匹配，同时与其他人类冠状病毒、季节性流感病毒及呼吸道合胞病毒等常见呼吸道病原体无交叉反应。-错配容忍度分析：考虑到病毒变异可能导致序列发生碱基替换，标准建议评估引物/探针对一定范围内错配的容忍程度，并据此设计冗余或简并探针。-二级结构与非特异性扩增分析：避免引物二聚体形成及非特异性扩增，确保扩增效率。3.质量控制（详见第五节）质量控制是保证检测结果准确、可靠的生命线。该标准在全球范围内首次系统性地对SARS-CoV-2核酸检测的质量控制提出了框架性要求。其核心是要求引入全面的质量控制体系，包括：（1）内部质控品-阳性对照：使用已知浓度的、经灭活处理的病毒颗粒或含有完整靶标序列的人工构建质粒。用于验证整个实验流程的有效性，包括核酸提取、反转录和扩增反应。-阴性对照：通常使用无核酸酶的水或已知不含SARS-CoV-2的细胞培养液。用于监测实验过程中是否存在交叉污染或核酸残留。-内源性对照（InternalControl,IC）：最关键的质控之一。标准强烈推荐使用内源对照（如人RNaseP基因），其在样本中添加于核酸提取步骤之前，可以监控整个样本处理过程的效率，并能排除因样本抑制物存在导致的假阴性结果。（2）第三方质控品标准建议使用经过国际认证（如WHO国际参考品或国家标准物质）的第三方质控品进行检测系统的性能评估和室内质控（IQC）。4.性能验证与质量保障ISO/TS5798:2022要求制造者（或使用者）在检测系统正式使用前，必须完成严格的方法学性能验证。验证指标至少包括：-分析灵敏度（检出限，LoD）：在95%检出率时，检测系统对病毒载量的最低检测能力。标准要求提供明确的LoD计算方法和数据。-分析特异性（交叉反应）：对密切相关的病原体和常见呼吸道菌群进行交叉反应测试，并量化干扰程度。-精密度：评估批内、批间、日间、操作者间以及不同设备间的重复性与再现性。-稳定性：包括样本稳定性（采集、运输、保存）、试剂稳定性（开瓶、冻融等）。5.样本处理与操作流程三、标准的发布与推广过程ISO/TS5798:2022由国际标准化组织/健康信息与生物技术分委员会（ISO/TC276Biotechnology，或相关工作组）及国际电工委员会/医学电气设备与诊断系统技术委员会（IEC/TC62）等机构共同协作完成。该标准立项后，经历了从工作草案（WD）到委员会草案（CD）、国际标准草案（DIS）和最终国际标准草案（FDIS）的快速通道流程，这在ISO标准制定史上极为罕见，体现了全球标准化界面对重大公共卫生事件的快速响应能力。来自多个国家（如中国、德国、美国、日本、英国等）的标准化专家、病毒学家、临床检验专家和IVD产业代表参与了起草与评审。标准的快速获批并在2022年4月正式发布，不仅及时地满足了全球疫情防控的技术需求，也为未来应对未知病原体提供了可复制的标准化范例。四、主要参与单位——以中国食品药品检定研究院为例在ISO/TS5798:2022的制定过程中，凝聚了全球众多顶尖科研与监管机构的智慧。其中，以中国食品药品检定研究院（NIFDC）为代表的中国专家团队发挥了至关重要的作用。中国在COVID-19疫情早期的快速响应、大规模核酸检测实践及国家对核酸检测试剂注册审评的经验，为该标准的制定提供了极有价值的参考数据和技术框架。机构概况：中国食品药品检定研究院（简称“中检院”）是国家药品监督管理局的直属事业单位，是国家检验药品、生物制品、医疗器械（包括体外诊断试剂）质量的法定最高技术仲裁机构。其下设的医疗器械检定所和体外诊断试剂室，长期从事IVD产品的注册检验、标准制定和方法学研究。在疫情期间，中检院承担了所有国产SARS-CoV-2核酸检测试剂的国家药品监督管理局（NMPA）注册检验任务，并对试剂的分析性能、临床性能进行了系统的评价，积累了海量的一手数据。在该标准中的贡献：1.数据支撑：中检院专家团队将他们在对中国上百种核酸检测试剂进行注册检验时发现的共性问题（如单一靶标易失靶、内标缺失、灵敏度参差不齐等）进行系统化提炼，科学地转化为标准中的技术指标，提升了标准的实用性与针对性。2.技术方案主导：在标准起草组中，中检院专家主导了关于“性能验证”、“质量控制品”和“结果判读规则”等核心章节的讨论。他们提出的“内源性内标+外源性阳性质控”的全面质控理念被采纳，并写入标准正文，这成为该标准最突出的亮点之一。3.标准化方法论：中检院率先在国内提出了采用WHO国际参考品或国家参考品进行试剂定值和性能评价的方法，推动了标准与国际先进水平接轨。这些方法论通过ISO/TS5798:2022传播至全球，指导了其他国家的试剂评价工作。4.国际协调：中检院专家积极与ISO/TC276等机构的国际专家沟通，就病毒分类学、变异株命名、不同技术平台的差异（如一步法RT-PCR与等温扩增）等议题达成共识，消除了因疫情信息差带来的标准制定障碍。通过此次国际标准的制定，中检院不仅展示了中国在体外诊断监管科学领域的深厚实力，也体现了中国在全球公共卫生治理中的责任担当。其专业、严谨、高效的工作作风，为这份国际标准的成功发布奠定了坚实的基础。五、结论与展望ISO/TS5798:2022的发布，是国际标准化领域里程碑式的事件。它首次以技术规范的形式，系统性地规定了在突发疫情背景下，通过核酸扩增法检测一种新发呼吸道病毒所需的技术要求与最佳实践。报告通过对该标准立项背景、核心内容（尤其是质量控制）、主要参与方贡献的深入分析，得出以下结论：1.填补空白，提升应对能力：该标准为全球各地的IVD厂商、临床实验室和公共卫生机构提供了统一的技术“语言”和操作规范。它解决了疫情初期检测产品混乱、结果不一致的痛点，显著提升了全球应对突发疫情的检测能力。2.促进国际互认，降低技术壁垒：基于该标准生产和验证的检测试剂，其分析性能和质量管理水平在全球范围内具有较高的认可度。这为跨境人员流动、国际公共卫生信息互通以及全球供应链稳定提供了技术保障，促进了IVD产品的国际贸易和技术合作。3.推动行业升级，保障质量安全：标准中关于多靶标设计、内源性内标、严格性能验证等要求，实质上是提高了核酸检测行业的质量准入门槛。这迫使低质量、不规范的检测产品退出市场，引导IVD企业加大研发投入，专注于技术创新与质量提升。未来展望：尽管疫情已进入“乙类乙管”阶段，但ISO/TS5798:2022的价值远不止于此。它留下了一个极具参考价值的“标准化框架”。未来，该标准的迭代和技术演进将聚焦于以下几点：-应对病毒变异：标准需持续更新，更新针对不断出现的变异株（如德尔塔、奥密克戎各亚型）的检测靶标和引物探针设计指南，确保其时效性和有效性。-拓展至多联检：将核酸检测的标准化框架拓展至“多联检”，如同时检测SARS-CoV-2、流感病毒（A/B型）和呼吸道合胞病毒的联合检测试剂盒，是未来常态化呼吸道疾病监测的需求。-关注POCT与新技术：随着即时检测（POCT）、微流控芯片、基于CRISPR的诊断技术等新方法