TGXAS-滇桂艾纳香编制说明

团体标准《滇桂艾纳香》（征求意见稿）编制说明一、任务来源、起草单位、主要起草人根据《广西标准化协会关于下达2025年第十二批团体标准制修订项目计划的通知》（桂标协〔2025〕95号）精神，由广西药师协会提出，广西壮族自治区药品检验研究院、广西仙茱中药科技有限公司、云南省食品药品监督检验研究院、梧州市食品药品检验所、广西河丰药业有限责任公司、广西一东盟食品检验检测中心、玉林市食品药品检验检测中心、广西东兰县天然中草药种植有限责任公司、广西柳州百草堂中药饮片厂有限责任公司等单位共同起草的团体标准《滇桂艾纳香》（项目编号：2025-1203），已获立项。为高质量编制团体标准《滇桂艾纳香》，由起草单位成立标准编制工作组并进行如下分工：姓名职务/职称从事专业工作单位主要负责工作林雀跃主任药师中药学广西壮族自治区药品检验研究院统筹主持标准编制工作郑晓霞高级工程师、副主任药师中药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明编写，质量控制滕爱君主管中药师中药学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明编写，方法研究何春花高级工程师、副主任药师中药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写，质量控制周月敏执业药师中药学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明编写，方法研究陈晓璐工程师中药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写罗轶主任药师药学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明的编写朱雪妍主任药师药学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明的编写林春燕副主任药师中药学云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写，标准复核张荣林副主任药师中药学广西一东盟食品检验检测中心参与标准文本及编制说明的编写，标准复核马云菲质量检验专员/工程师微生物与生化药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写罗永强工程师药学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明编写，方法研究罗达龙主任药师药学梧州市食品药品检验所参与标准文本及编制说明的编写周天祥副主任药师药学玉林市食品药品检验检测中心参与标准文本及编制说明的编写唐勇华质量总监药品生产广西河丰药业有限责任公司参与标准文本及编制说明的编写王海总经理药材种植广西东兰县天然中草药种植有限责任公司参与标准文本及编制说明的编写李云乾副总经理饮片生产广西柳州百草堂中药饮片厂有限责任公司参与标准文本及编制说明的编写姚力工程师药学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明的编写苏钰岚工程师植物学广西壮族自治区药品检验研究院参与标准文本及编制说明的编写黄晶晶工程师中药资源开发广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写苏林洁检验员中药检验云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写邓丽丽工程师药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写龙琴药师中药检验云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写李夷君工程师药学梧州市食品药品检验所参与标准文本及编制说明的编写唐莲工程师药学玉林市食品药品检验检测中心参与标准文本及编制说明的编写玉青山研究员/助理工程师中药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写金蒙药师中药检验云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写刘虹虹工程师药学梧州市食品药品检验所参与标准文本及编制说明的编写李金玲研究员/助理工程师中药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写杨红豆药师中药检验云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写姚泳成工程师药学梧州市食品药品检验所参与标准文本及编制说明的编写黄美仙研究员/助理工程师中药学广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写官欣旭药师中药检验云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写黄琳高级工程师药学梧州市食品药品检验所参与标准文本及编制说明的编写黄文丽运营管理部经理/工程师中药资源与开发广西仙茱中药科技有限公司参与标准文本及编制说明的编写马瑞琦药师中药检验云南省食品药品监督检验研究院参与标准文本及编制说明的编写胡盛技术总监药品生产广西河丰药业有限责任公司参与标准文本及编制说明的编写刘晓兰工程师药学玉林市食品药品检验检测中心参与标准文本及编制说明的编写韦忠福质量部长药材种植广西东兰县天然中草药种植有限责任公司参与标准文本及编制说明的编写卓秀香质量部部长药学广西柳州百草堂中药饮片厂有限责任公司参与标准文本及编制说明的编写二、制定标准的必要性和意义滇桂艾纳香为菊科艾纳香属植物假东风草Blumeariparia(Bl.)DC.的干燥全草，为壮瑶民间常用妇科药材，是广西重点壮药材品种。滇桂艾纳香在广西区内使用广泛，它不仅是广西少数民族地区妇女产后调养身体常用的草药，更是滇桂艾纳香片、滇桂艾纳香胶囊、妇血康颗粒、伊血安颗粒等成药中的君药，其年使用量大，总产值高。《广西壮族自治区壮药质量标准（第一卷）》中记载滇桂艾纳香性温，味微苦、淡，归肝、脾经，具有活血、止血、利水的功效，可用于治疗经期提前、产后血崩、产后浮肿、不孕症、阴疮。壮医则认为本品性平，味淡，通火路龙路、祛风毒、除湿毒、止血调经，用于发旺（风湿骨痛）、林得叮相（跌打肿痛）、兵淋勒（崩漏）、月经不调、狠尹（疮疖）。目前仅湖南、广西两省区药材标准收载，且标准制定尚不完善，缺乏指标性成分控制药材质量。近年来，由于滇桂艾纳香的野生资源已无法满足工业生产和临床应用，其同属相近品种常替代使用，滇桂艾纳香的质量评价、质量控制研究已势在必行。滇桂艾纳香现行质量标准检验项目仅有性状及理化鉴别项，缺乏薄层鉴别、检查及含量测定项，究其原因，主要是基础研究较少，缺乏质控指标，无法建立全面的检测项目；同时，与滇桂艾纳香同属的其他植物，不同品种间的性状较相似，极易发生品种混用的风险。目前滇桂艾纳香标准不完善，难以进入国家标准，也进一步制约了以其为君药的成方制剂进入国家标准，限制了相关产业的发展。因此，为科学合理的控制滇桂艾纳香药材及其饮片的质量，进而有效控制以滇桂艾纳香为君药所生产的中成药质量，提高现行滇桂艾纳香的质量标准的工作迫在眉睫。因此，为满足工业生产和临床应用，控制滇桂艾纳香药材质量，完善质量评价项目，促进滇桂艾纳香产业规范化、标准化、产业化高质量发展，制定团体标准《滇桂艾纳香》有重要意义。三、主要起草过程（一）成立标准编制工作组团体标准《滇桂艾纳香》项目任务下达后，由广西壮族自治区药品检验研究院牵头组织成立了标准编制工作组，制定了起草编写方案与进度安排，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由起草单位相关人员配合完成。为了明确标准编制的任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。标准编制工作组下设二个组，分别是资料收集组、草案编写组。资料收集组负责国内外有关滇桂艾纳香的文献资料的查询、收集和整理工作，查阅前期对滇桂艾纳香的有关研究情况和目前科学界滇桂艾纳香的研究进展；草案编写组负责起草标准草案及后续征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明等编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关滇桂艾纳香的相关文献资料。主要有：[1]中药材生产质量管理规范（2022年国家药监局农业农村部国家林草局国家中医药局公告第22号）[2]中华人民共和国药典（2025年版）[3]《广西壮族自治区中药饮片炮制规范》（2007年版）[4]广西壮族自治区壮药质量标准：第一卷[5]广西中药材标准：第二册[6]湖南省中药饮片炮制规范（2021年版）（三）研讨确定标准主体内容及标准创新点标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容为规定滇桂艾纳香的要求、标志、包装、运输和贮存等内容，描述相应的检验方法及检验规则。本标准创新点主要为：1.本标准新增了水分测定项目，规定不得过13.0%，广西现行质量标准：《广西中药材标准》（第二册）及《广西壮族自治区壮药质量标准》（第一卷）均未设水分项目。2.本标准新增了总灰分及酸不溶性灰分测定项目，规定分别不得过10.0%及3.0%，广西现行质量标准：《广西中药材标准》（第二册）及《广西壮族自治区壮药质量标准》（第一卷）均未设总灰分及酸不溶性灰分项目。3.本标准新增了水溶性浸出物测定项目，采用热浸法，规定不得少于18.0%。广西现行质量标准：《广西中药材标准》（第二册）及《广西壮族自治区壮药质量标准》（第一卷）未设浸出物项目。4.本标准新增了含量测定项目，采用高效液相色谱法同时测定绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸三种成分，规定三者总量不得少于0.20%。广西现行质量标准：《广西中药材标准》（第二册）及《广西壮族自治区壮药质量标准》（第一卷）未设任何含量测定项目。（四）调研及形成草案、征求意见稿2025年4～6月，标准编制工作组查阅了大量的国内文献资料，对滇桂艾纳香相关的文件进行系统总结。形成了标准的基本构架，对主要内容进行了讨论并对项目的工作进行了部署和安排。2025年6月～7月，团体标准《滇桂艾纳香》获批立项，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有参考资料中有关滇桂艾纳香的要求，按照简化、统一等原则编制完成团体标准《滇桂艾纳香》（草案）。2025年7月～2026年6月，编制组向已开展药品检验工作的相关科研单位、企业征求技术意见。按照简化、统一等原则编制完成团体标准《滇桂艾纳香》（征求意见稿）和（征求意见稿）编制说明。团体标准《滇桂艾纳香》座谈会现场四、制定标准的原则和依据，与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况（一）编制原则1、实用性原则本标准是在充分收集国内外相关资料和文献、调研分析滇桂艾纳香现状，结合起草单位前期研究工作取得的研究成果及积累的滇桂艾纳香实践经验，并借鉴国内滇桂艾纳香进行总结起草的，符合工作实际，利于滇桂艾纳香技术的实施与推广，具有可操作性和实用性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了与滇桂艾纳香技术相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4、前瞻性原则本文件在兼顾当前区内滇桂艾纳香技术现实情况的同时，还考虑到了滇桂艾纳香的需要，在标准中体现了个别特色性、前瞻性和先进性条款，作为对滇桂艾纳香技术发展的指导。（二）编制依据本标准严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则起草，标准主要内容依据起草单位在滇桂艾纳香技术研究应用过程中的实践经验确定。（三）与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况经查阅，滇桂艾纳香目前尚无国家标准、行业标准及相关团体标准，地方标准有《广西中药材标准》第二册、《广西壮族自治区壮药质量标准（第一卷）》（2008年版）及《广西壮族自治区中药饮片炮制规范(2007)》，三个标准的检验项目均仅有【性状】、【鉴别】项；《湖南省中药饮片炮制规范（2021年版）》为最新发布的地方饮片标准，该标准的药材基原除了滇桂艾纳香原植物假东风草外，还包括了其同属植物东风草，检验项目包括【性状】、【鉴别】、【检查】（水分、总灰分）及【浸出物】。与上述标准相比，本标准新增了酸不溶性灰分、及含量测定等项目，为全面、科学、合理评价滇桂艾纳香药材质量提供依据。本标准的内容与现行的法律、法规及强制性标准无冲突，标准的编写符合GB/T1.1—2020的要求。五、主要条款的说明（一）术语和定义滇桂艾纳香标准编制工作组在查阅总结了相关标准、著作、论文、期刊等文献资料的基础上，对滇桂艾纳香所涉及的概念进行统一定义。滇桂艾纳香为壮族民间习用草药，在广西有较长的使用历史，具有活血、止血、利水之功，常用于治疗经期提前、产后血崩、产后浮肿、不孕症、阴疮等症。查阅建国以来广西地区的本草文献，该药材存在多个别名，如白花九里明、管芽、华艾纳香、中华艾纳香、大头艾纳香、假东风草、东风草、九里明等。《广西中药材标准》第二册、《广西壮族自治区中药饮片炮制规范（2007年版）》及《广西壮族自治区壮药质量标准（第一卷）》均以“滇桂艾纳香”之名收载，规定其功能活血、止血、利水，用量30～60g，外用适量。（二）要求1.感官要求主要规定了滇桂艾纳香的色泽、形态、气味、滋味、质地等项目的要求，感官指标见下表。项目根茎叶花色泽表面棕褐色或棕黄色表面紫褐色或灰绿色、断面髓部白色叶片灰绿色或暗绿色，叶面颜色较深—形态根茎部位膨大，直径0.5cm~3cm。上有2条至数条茎基，下部根呈类圆锥状弯曲。具细根及纵皱纹，可见有突出的点状皮孔茎细长，呈圆柱状，直径0.3cm~1.5cm，上部有分枝，具纵棱，质稍硬。断面髓部发达，老茎木部呈放射状叶互生，多卷缩或破碎，展平后呈椭圆形，长3cm~7cm，宽1.5cm~4cm。边缘有点状锯齿。有时可见头状花序，直径0.5cm～0.8cm，花序柄长0.5cm～1cm气味、滋味气微，味淡质地根及根茎、茎质稍硬，叶质脆性状鉴别标准编制组经过对32批样品进行性状鉴别，总结出如下特征，作为滇桂艾纳香感官指标的确定依据：本品根茎部位膨大，直径0.5～3cm，表面棕褐色或棕黄色，上有2至数条茎基，下部根呈类圆锥状弯曲，具细根及纵皱纹，可见有突出的点状皮孔。茎细长，呈圆柱状，直径0.3～1.5cm，上部有分枝，表面紫褐色或灰绿色，具纵棱，质稍硬，断面髓部发达，白色，老茎木部呈放射状。叶互生，多卷缩或破碎，展平后呈椭圆形，长3～7cm，宽1.5～4cm，边缘有点状锯齿，叶片灰绿色或暗绿色，叶面颜色较深，质脆。有时可见头状花序，直径0.5～0.8cm，花序柄长0.5～1cm。气微，味淡。11234561.药材2.根及根茎3.茎4.叶5.6.花及花序滇桂艾纳香药材图理化指标2.1.水分、灰分（总灰分和酸不溶性灰分）水分按中国药典四部通则0832第二法烘干法测定；总灰分和酸不溶性灰分按中国药典四部通则2302测定。结果见下表：各产地滇桂艾纳香水分、总灰分、酸不溶性灰分测定结果序号批次水分总灰分酸不溶性灰分1JDFC-110.23%7.12%0.99%2JDFC-210.83%10.84%1.68%3JDFC-310.25%12.69%4.60%4JDFC-410.27%9.41%1.89%5JDFC-511.07%12.52%4.47%6JDFC-615.37%8.25%2.35%7JDFC-710.19%9.11%2.36%8JDFC-811.65%10.43%2.07%9JDFC-911.52%12.59%4.44%10JDFC-109.30%6.59%0.35%11JDFC-1110.41%7.00%1.48%12JDFC-1211.49%7.87%1.18%13JDFC-1310.33%8.23%0.61%14JDFC-1410.53%9.66%2.04%15JDFC-159.43%8.34%1.43%16JDFC-169.91%9.63%0.72%17JDFC-1715.21%5.67%0.46%18JDFC-188.50%4.39%0.74%19JDFC-199.47%13.02%2.06%20JDFC-2010.44%7.14%1.39%21JDFC-2110.11%8.44%0.93%22JDFC-2210.27%7.97%2.13%23JDFC-2310.08%5.81%1.04%24JDFC-2410.64%7.57%1.49%25JDFC-2510.05%9.67%1.54%26JDFC-264.85%7.72%1.31%27JDFC-279.73%6.25%0.71%28JDFC-2811.05%8.21%0.61%29JDFC-2910.67%12.45%2.33%30JDFC-3011.37%10.93%1.95%31JDFC-319.66%7.84%1.26%32JDFC-3210.07%8.94%1.23%平均10.47%8.82%1.68%32批样品水分含量范围为4.85%～15.37%，平均10.47%。其中JDFC-6（15.37%）、JDFC-17（15.21%）两批超出13.0%，占比6.25%。参照《中国药典》2025年版四部通则0212“除另有规定外，饮片水分通常不得过13%”的规定，为控制药材贮存质量，防止霉变，拟定水分不得过13.0%。总灰分含量范围为4.39%～13.02%，平均8.82%；酸不溶性灰分含量范围为0.35%～4.60%，平均1.68%。总灰分超过10.0%的有JDFC-2、JDFC-3、JDFC-5、JDFC-8、JDFC-9、JDFC-19、JDFC-29、JDFC-30共8批，占比25.0%；酸不溶性灰分超过3.0%的有JDFC-3、JDFC-5、JDFC-9等3批，占比9.38%。为有效控制药材中泥沙等杂质含量，拟定总灰分不得过10.0%，酸不溶性灰分不得过3.0%。2.2.浸出物2.2.1.浸出物提取溶剂的选择滇桂艾纳香中可能含有多肽、还原糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸、黄酮类、酚类、香豆素、内酯、挥发油等多种化学成分，其中大部分均为极性较大的成分，因此可以考虑采用水为溶剂进行提取。另外，选择水为溶剂，符合用水煎煮的用药习惯，且采用水为溶剂亦非常安全环保。2.2.2.浸出物提取方法的选择取同一批药材粉末（JDFC-43），分别按冷浸法和热浸法进行试验（每种方法平行6份），用统计学方法对比两种提取方法是否存在显著性差异，最终选择最优方法确定为其提取方法。冷浸法：取药材粉末约4g，精密称定，精密加入纯化水100mL，前6小时时振摇，再静置18小时。滤过，精密取续滤液25mL置于恒重的蒸发皿中，蒸干。在105℃中干燥3小时，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。以干燥品计算浸出物含量。结果见下表。热浸法：取药材粉末约2g，精密称定，精密加入纯化水100mL，称定重量，静置1小时，加热回流1小时，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，在105℃烘箱中干燥3小时，置干燥器中冷却30min，迅速称定重量。以干燥品计算浸出物含量。结果见下表。浸出物方法考察结果方法123456均值RSD冷浸法15.39%15.25%15.85%15.84%15.59%15.61%15.59%0.24%热浸法19.66%20.57%19.94%19.94%20.97%20.38%20.27%0.47%利用t检验均值方差分析的方法对以上两种结果进行分析比较，计算得t值为21.83，通过查表可知t0.05=1.81。因为t>t0.05，所以这两种方法存在显著性差异。从实验结果可以直观的看出，热浸法浸出物得出率要高于冷浸法，且热浸法所用的时间短，效率高，又结合相关文献记载的滇桂艾纳香入药方式为煎煮法。最终选用热浸法作为滇桂艾纳香浸出物的方法。2.2.3.浸出物测定以水为溶剂，按《中国药典》2025年版四部通则2201项下的热浸法对32批滇桂艾纳香药材进行浸出物测定，结果见下表。各产地滇桂艾纳香浸出物测定结果序号编号浸出物序号编号浸出物1JDFC-122.40%17JDFC-3336.57%2JDFC-228.37%18JDFC-3522.94%3JDFC-329.04%19JDFC-3816.47%4JDFC-422.42%20JDFC-3926.20%5JDFC-520.55%21JDFC-4023.07%6JDFC-633.73%22JDFC-4225.37%7JDFC-721.76%23JDFC-4321.01%8JDFC-830.32%24JDFC-4421.57%9JDFC-928.87%25JDFC-4523.82%10JDFC-1013.23%26JDFC-4918.35%11JDFC-1115.90%27JDFC-5027.99%12JDFC-1226.20%28JDFC-5915.61%13JDFC-1321.18%29JDFC-6014.51%14JDFC-1427.57%30JDFC-6116.98%15JDFC-1522.94%31JDFC-6223.53%16JDFC-1824.55%32JDFC-6319.89%平均含量23.22%结果如上表所示，32批滇桂艾纳香药材浸出物最高值为33.73%，最低值为13.23%，平均值为23.22%，浸出物限度小于18.0%的有JDFC-10、JDFC-11、JDFC-38、JDFC-59、JDFC-60、JDFC-61，占比18.75%；《中国药典》2025年版四部通则2201规定，水溶性浸出物测定法（热浸法）是评价中药材质量的重要指标之一，为合理控制该药材质量，按照平均值下浮20%限度计算，拟定本标准中该药材的浸出物限度应不得少于18.0%。3.含量测定滇桂艾纳香为菊科植物，菊科植物普遍含有咖啡酰基奎宁酸类化合物，经LC-MS及HPLC预实验，发现滇桂艾纳香中含有新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸，4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸，1,3,5-O-三咖啡酰基奎宁酸，质谱数据如下（见下表、图）：对照品及滇桂艾纳香样品质谱数据对照表序号名称对照品样品保留时间[M+H]+碎片保留时间[M+H]+碎片1新绿原酸6.516355.1014163.03866.513355.1021163.03872绿原酸9.803355.1014163.03869.806355.1023163.03893隐绿原酸10.295355.1009163.038410.319355.1016163.038743,4-O-二咖啡酰基奎宁酸19.621517.1321—19.614517.1335—53,5-O-二咖啡酰基奎宁酸21.651517.1319—21.751517.1340—64,5-O-二咖啡酰基奎宁酸24.301517.1333—24.244517.1337—71,3,5-O-三咖啡酰基奎宁酸34.610515.1194353.088034.562515.1193353.0879滇桂艾纳香样品HPLC图鉴于目前中检院发放的对照品中仅有绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸三种，为兼顾对照品获得的便利性、数据溯源的可靠性及方法操作的可行性，在未找到滇桂艾纳香专属或有效性成分之前，本标准暂以三者含量总和作为质控指标。3.1.仪器、试药及样品3.1.1.仪器Agilent1200型液相色谱仪、XP205型电子天平（1/10万，梅特勒公司）；Milli-Q超纯水机（美国Millipore公司）；KQ-500E型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。3.1.2.试药绿原酸（批号110753-201415）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（批号111782-201405）、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（批号111894-201102）购自中国食品药品检定研究院；所有对照品经HPLC-DAD（面积归一化法）检测纯度均大于98.0%。甲醇、乙腈和磷酸为色谱纯（Fisher公司），试验用水为超纯水。3.2.溶液的制备3.2.1.对照品溶液的制备取绿原酸对照品、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶液（B.2.2.1）制成每1mL含绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸15μg、40μg、10μg的混合溶液作为对照品溶液。3.2.2.供试品溶液取本品粉末（过二号筛）约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇溶液25mL，超声处理（功率320W，频率40kHz）60min，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3.色谱条件及提取条件摸索3.3.1.色谱条件CAPCELLMGⅡ色谱柱（250×4.6mm；5μm）；以乙腈（A）-0.4%磷酸水溶液（B）进行梯度洗脱（见下表）；流速为1.0mL/min；检测波长为328nm；柱温为30℃；进样量为10μL。滇桂艾纳香含量测定梯度洗脱条件时间流速(mL/min)A(%)B（%）0～151.0118915～181.011→2389→7718～351.0237735～401.023→1177→893.3.2.提取条件3.3.2.1.提取方法的选择取滇桂艾纳香药材粉末约0.5g，（共10批，每批取2份），取精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，按超声提取法（功率为320W，频率为40kHz）及加热回流法分别提取30分钟，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按3.3.1色谱条件进行分析，通过以绿原酸和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸提取效果为代表，采用t检验方法，对比两种方法是否存在显著性差异，结果见下表。两种提取方法的t检验结果编号绿原酸超声含量（%）绿原酸回流含量（%）3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸超声含量（%）3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸回流含量（%）JDFC-150.150.18%0.45%0.51%JDFC-330.200.22%0.53%0.54%JDFC-350.12%0.14%0.36%0.35%JDFC-380.09%0.10%0.39%0.40%JDFC-390.23%0.24%0.49%0.48%JDFC-420.16%0.17%0.42%0.41%JDFC-430.10%0.11%0.34%0.35%JDFC-450.08%0.08%0.29%0.27%JDFC-500.15%0.16%0.36%0.35%JDFC-610.08%0.09%0.39%0.39%平均值0.14%0.15%0.40%0.41%标准差0.0005240.0005290.001870.00197合并标准差0.0005270.00192t计0.61190.1165t0.05（双侧）1.731.73由上表可知，绿原酸和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的t检验结果中，t计＜t0.05（双侧）。表明，超声提取法及加热回流法不存在显著性差异。考虑到超声提取法更简单方便，因此，确定超声为滇桂艾纳香含量测定的提取方法。3.3.2.2其他条件的选择采用正交实验法，对取样量，提取溶剂，溶剂量和提取时间这四个因素进行考察，根据Box—Behnken的中心组合设计原理，设计四因素三水平正交实验，将供试品溶液按6.3项下的色谱条件进行实验，并计算绿原酸和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量，结果见下表。正交实验四因素三水平表与实验结果表序号取样量（g）溶剂溶剂量（mL）提取时间（min）绿原酸含量（%）3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量(%)10.5甲醇25300.062%0.249%20.550%甲醇50450.056%0.180%30.530%甲醇100600.028%0.071%41甲醇50600.032%0.132%5150%甲醇100300.025%0.081%6130%甲醇25450.086%0.118%70.25甲醇100450.026%0.068%80.2550%甲醇25600.094%0.319%90.2530%甲醇50300.058%0.142%根据实验结果，对每个因素的K值（K值指相同因素的相同水平的实验结果之和）进行计算，并求出各个因素K值的极差R，从而得出各因素对结果影响的主次顺序，并通过各因素K值大小求出最优组合。以绿原酸，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量计算的各因素K值和R值计算结果，如下表。两种成分各因素的K值与R值水平因素绿原酸(%)3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(%)K1K2K3RK1´K2´K3´R´取样量溶剂0.1450.1430.1770.0350.5000.3110.1770.0350.1200.1740.1710.0540.4480.5800.1710.054溶剂量0.2410.1450.0780.1630.6850.4530.0780.163时间0.1440.1680.1530.0240.4270.1680.1530.024结果表明，两种成分各因素对实验结果的影响主次顺序均为溶剂量＞溶剂＞取样量＞时间，最优组合为溶剂量25mL，溶剂为50%甲醇，取样量为0.25g，提取时间60min。即样品制备的方法为取样约0.25g，精密称定，精密加入50%甲醇25mL，超声提取60min。3.4.含量测定3.4.1.系统适用性试验按“3.3.1”项下色谱条件进行检测，以绿原酸峰计算理论塔板数大于6000，分离度大于1.5。对照品及样品的色谱图见下图。1——绿原酸；2——3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（异绿原酸A）；3——4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（异绿原酸C）混合对照品液相色谱图1——绿原酸；2——3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（异绿原酸A）；3——4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（异绿原酸C）滇桂艾纳香试样液相色谱图3.4.2.线性关系考察精密吸取各对照品储备液适量分别置于7个量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得各系列浓度的混标溶液（具体配制记录见下表）。分别精密吸取各系列浓度的标准溶液及对照品储备液各10μL，注入液相色谱仪，测定，以各对照品质量浓度(μg·mL-1)为x轴，以峰面积为y轴，进行线性回归，各对照品回归方程和线性范围见下表。结果表明，3种成分在一定质量浓度范围以内，进样量与峰面积线性关系良好。种对照品不同浓度混标溶液的配制（浓度为μg/mL）绿原酸3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸储备液浓度300.71003.0248.2标曲1浓度1.2035.0150.993标曲2浓度2.40610.0301.986标曲3浓度6.01420.0604.964标曲4浓度12.02840.1209.928标曲5浓度18.04260.18014.892标曲6浓度24.05680.24019.856标曲7浓度30.070100.30024.8203种成分标准曲线方程、线性范围和相关系数成分回归方程线性范围/(μg·mL-1)相关系数（r）绿原酸y=33.287x-1.9381.2035~30.070.99993,5-O-二咖啡酰基奎宁酸y=44.143x+14.4975.070~101.40.99994,5-O-二咖啡酰基奎宁酸y=46.787x-5.6640.993~24.820.99993.4.3.检测限与定量限测定取“3.4.2”项下混合标曲溶液1用甲醇逐级稀释后进样测定，以色谱图中信噪比3：1为检测限，信噪比10：1为定量限。结果表明，绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、的检测限分别为3.3、2.1、2.3（单位为mg/kg）；定量限分别为：11.1、7.1、7.5（单位为mg/kg）。3.4.4.精密度试验精密吸取“3.3.2.2”项下供试品溶液10μL，连续进样6次，记录峰面积。结果绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸峰面积的RSD分别为0.25%、0.56%、1.24%（n=6），表明仪器精密度良好。3.4.5.重复性考察取样品粉末（样品1）6份，分别按照“3.3.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“3.3.1”项下色谱方法测定，记录峰面积，计算含量。结果各份供试品溶液的绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸测定结果RSD(n=6)分别为2.44%、2.80%、3.79%，结果表明重复性良好。3.4.6.溶液稳定性试验取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样测定。结果绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸峰面积的RSD(n=6)分别为1.52%、1.58%、1.24%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。3.4.7.加样回收率试验取已知含量的供试品粉末6份，每份各约0.125g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入上述7种对照品，按照“3.3.2.2”项下方法平行制备供试品溶液，进样分析，计算回收率，结果见下表，表明该方法加样回收试验结果良好。加样回收率试验结果(n=6)序号成分取样量（g）原有量（g）加入量（g）测得量（g）回收率（%）平均值（%）RSD（%）1绿原酸0.12550.10650.10540.2200107.69105.311.660.12550.10650.2194107.120.12810.10870.2193104.930.12810.10870.2193104.930.12570.10670.2162103.890.12570.10670.2156103.3223,5-O-二咖啡酰基奎宁酸0.12550.39830.39500.8285108.91108.230.690.12550.39830.8247107.950.12810.40650.8359108.710.12810.40650.8370108.990.12570.39910.8225107.190.12570.39910.8243107.6534,5-O-二咖啡酰基奎宁酸0.12550.11760.03330.2331102.48103.610.650.12550.11760.2352104.350.12810.12010.2370103.730.12810.12010.2365103.280.12570.11790.2353104.170.12570.11790.2347103.643.4.8.含量测定每个样品取2份，分别按“3.3.2.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取各供试品溶液10μL，按“3.3.1”项下色谱条件进行测定，三种成分含量之和结果见下表。32批滇桂艾纳香含量测定结果（%）（n=2）批次编号绿原酸3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸三者总和1JDFC-20.4030.5290.3051.2372JDFC-30.3630.9060.2741.5433JDFC-40.1910.6830.1441.0184JDFC-50.1440.7550.1091.0085JDFC-60.2530.4440.1910.8886JDFC-70.5320.7870.4021.7217JDFC-80.3040.3720.2300.9068JDFC-90.3530.6450.2671.2659JDFC-100.5950.8000.4501.84510JDFC-110.0410.2370.0310.30911JDFC-120.1320.4130.1000.64512JDFC-130.2890.7800.2181.28713JDFC-140.1700.5910.1290.89014JDFC-150.1680.4900.1270.78515JDFC-180.4750.5210.3591.35516JDFC-330.4020.8010.3041.50717JDFC-350.2460.6310.1861.06318JDFC-380.1170.2910.0880.49619JDFC-390.1160.4020.0880.60620JDFC-400.2530.4470.1910.89121JDFC-420.2710.6170.2051.09322JDFC-430.1630.3940.1230.68023JDFC-440.1100.3470.0830.54024JDFC-450.1010.3710.0760.54825JDFC-470.1020.3810.0770.56026JDFC-490.2220.4500.1680.84027JDFC-500.1890.4250.1430.75728JDFC-590.0860.0390.0650.19029JDFC-600.0140.0720.0110.09730JDFC-610.0890.4130.0670.56931JDFC-620.1950.6500.1470.99232JDFC-630.0650.3690.0490.483上述结果显示，JDFC-59、JDFC-60两份样品三个成分含量总结结果最低，分析其原因为：绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸具有一定的热敏性，在高温、高湿条件下易分解。JDFC-59、JDFC-60两份样品采自云南，采集时期为5月份，由于条件有限，采集时，将样品散放在汽车内，没有进行特殊处理，采集时为下雨天，气温较高（平均气温30℃），两份样品经过10天在汽车中无措施保存后，回到实验室在20℃恒温恒湿下自然风干。观察两份样品的状态发现，它们与采集后及时放到低温干燥状态环境下干燥的样品颜色更暗沉，可见一定的腐烂现象。本研究所用的32批次滇桂艾纳香药材均为课题组人员自行采集，烘干条件为自然阴干结合烘箱低温干燥，且每批次处理的样品量较少，故对于绿原酸等热敏性成分的保留较完全，多批次测定的含量值均较高。但实际大生产中，药材储存量大，处理周期较长，因存储及加工条件等因素造成的绿原酸等热敏性成分含量降低的机率大，综合各项因素考虑，拟定滇桂艾纳香按干燥品计算，绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的总量应不低于0.20%，该限度既能保证药材质量，又符合实际生产情况。3.5标准复核情况《药品标准管理办法》（国家药品监督管理局2023年第86号公告）第十一条规定“中检院和各省级药品检验机构负责药品注册标准复核，对申请人申报药品标准中设定项目的科学性、检验方法的可行性、质控指标的合理性等进行实验室评估，并提出复核意见”。本标准为广西壮族自治区药品检验研究院起草，由云南省食品药品监督检验研究院复核，两个单位均为省级药品检验机构，在药品标准起草及复核方面具备丰富的实战经验及可靠的技术能力。云南省食品药品监督检验研究院对滇桂艾纳香3批次样品（批号分别为：JDFC-38、JDFC-42、JDFC-50）复核情况如下：滇桂艾纳香现行标准为《广西壮族自治区壮药质量标准》第一卷（2008年版），起草单位修订了性状，新增了水分、总灰分、酸不溶性灰分，浸出物及含量测定项。3.5.1【性状】为修订项目，根茎直径由“1～3cm”修订为“0.5～3cm”，茎直径由“3～7mm”修订为“0.3～1.5cm”，增加了头状花序“直径0.5～0.8cm，花序柄长0.5～1cm”的描述。经复核，样品性状与标准草案基本相符。3.5.2【检查】水分为新增项目，标准草案规定不得少于13.0%，送复核3批次样品复核检验结果分别为9.0%、9.0%、8.2%。总灰分为新增项目，标注草案规定不得少于10.0%，送复核3批次样品复核检验结果分别为7.6%，6.9%、5.6%。酸不溶性灰分为新增项目，标准草案规定不得少于3.0%，送复核3批次样品复核检验结果分别为1.2%、1.5%、0.4%。3.5.3【浸出物】为新增项目，采用热浸法，水作溶剂，标准草案规定不得少于18.0%，经复核，方法基本可行。3.5.4【含量测定】为新增项目，采用高效液相色谱法测定绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的总量，规定按干燥品计，不得少于0.20%，经复核，方法重现性好，基本可行，方法学复核结果如下：（1）阴性样品（甲醇）按含量测定方法试验，结果无干扰；（2）线性关系考察—线性方程：绿原酸线性方程：y=33.287x-1.938，r=0.9999，即进样量在1.2028～30.07μg之间，与峰面积的线性关系良好；3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸线性方程：y=31.397x+10.974，r=0.9999，即进样量在5.07～101.4μg之间，与峰面积的线性关系良好；4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸线性方程：y=44.143x+14.497，r=0.9999，即进样量在5.015～100.3μg之间，与峰面积的线性关系良好；（3）精密度试验：取滇桂艾纳香（JDFC-38）同一供试品溶液连续测定6次，绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁