TYALAS022-2026 治疗性抗体在自身免疫病（特应性皮炎）模型中的给药与评价标准编制说明

自身免疫病（特应性皮炎）模型构建及治疗性抗体临床前评价的技术规范编制说明（征求意见稿）一、工作简况（一）任务来源特应性皮炎（AtopicDermatitis,AD）是一种慢性、复发性、炎症性皮肤病，以皮肤干燥、慢性湿疹样皮损和明显瘙痒为基本特征，严重影响患者生活质量。近年来，针对AD的靶向治疗抗体药物研发活跃，但临床前研究中动物模型构建方法多样、评价标准不统一的问题日益突出。为进一步规范AD动物模型构建及治疗性抗体临床前评价技术，提升研究数据的可靠性、可重复性及临床转化价值，特制定本技术规范。（二）起草单位起草单位：中国科学院昆明动物研究所，玖康隆(哈尔滨)生物医药科技有限公司，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，云南省实验动物学会（三）主要工作过程1）文献调研阶段：系统检索2013年至2026年间国内外AD动物模型及抗体药物临床前评价相关文献，重点关注模型构建方法、造模要素（动物品系、致敏原种类与浓度、刺激频率与周期）、评价指标体系（临床评分、组织病理学、免疫学指标）等。（2）政策法规梳理阶段：参考国家药监局药审中心发布的《特应性皮炎治疗药物临床试验技术指导原则》（2023年第58号），以及WHO关于单抗类药物非临床评价指导原则，确保本规范与现行监管要求衔接。（3）技术方案整合阶段：汇总国内外主流AD模型构建方案，包括半抗原诱导模型（DNCB、OXA）、维生素D3类似物诱导模型（MC903）等，并结合基因人源化小鼠模型在治疗性抗体评价中的应用实践，形成技术方案框架。（4）专家研讨与草案形成：组织相关领域专家进行研讨，就模型选择原则、关键评价指标、质量控制要求等形成共识性意见，在此基础上形成本规范草案。（四）主要起草人及任务分工姓名性别职务/职称工作单位任务分工吕龙宝男研究员中国科学院昆明动物研究所标准文稿修改乔瑜女副教授玖康隆(哈尔滨)生物医药科技有限公司析、标准文稿编写高彩霞女副研究员中国农业科学院哈尔滨兽医研究所标准文稿编写、修改高旭男教授玖康隆(哈尔滨)生物医药科技有限公司数据整理、标准文稿编写夏长友男研究员中国农业科学院哈尔滨兽医研究所标准文稿编写、修改任宪刚男副研究员中国农业科学院哈尔滨兽医研究所标准文稿修改二、制定标准的必要性和目的制定本技术规范的必要性与目的，根植于当前特应性皮炎（AD）抗体药物研发中一个核心且紧迫的矛盾：临床前研究迫切需要标准化，而现实却因模型方法的过度异质化而充满不确定性。制定标准的必要性在于：1.回应“模型异质”导致的行业痛点AD动物模型的制备方法极为多样，这在很大程度上阻碍了研究数据的可比性与可重复性。文献分析显示，仅在国内研究中，模型构建就存在显著差异：动物品系分散：BALB/c小鼠虽占主导（65.85%），但C57BL/6、NC/Nga等品系亦被广泛使用。诱导剂种类繁多：包括化学半抗原（DNCB、DNFB）及超抗原等，其中DNCB占比最高（40.95%），但具体方案仍不统一。关键参数不统一：如DNCB在致敏阶段的常见浓度为1.00%，激发阶段为0.50%，但实际报道的浓度范围从0.1%到2.0%不等；造模周期和刺激频率更是千差万别。这种“各自为政”的现状，直接导致以下后果：结果不可比：同一候选药物在不同模型下可能得出迥异的药效结论，延缓科学共识的形成。监管审评困难：IND申报时，面对缺乏标准化的数据，审评机构难以进行高效、统一的评估。资源浪费：因模型选择不当导致无效投入，增加了研发成本和时间。2.回应“人源化模型”评价的特殊需求治疗性抗体通常具有种属特异性，无法在小鼠常规模型上发挥药效，必须使用基因人源化小鼠。然而，人源化小鼠品系本身的构建策略和基线表型存在差异，这对抗体评价提出了更高要求。缺乏针对人源化AD模型用于抗体评价的系统性指导，已成为行业亟待解决的瓶颈。3.回应“数据不可重复”的系统性挑战AD小鼠模型的临床前数据可重复性受到多种因素影响，包括操作者差异、昼夜节律、试剂批间差及饲养环境等。一份发表于2021年的研究尖锐地指出，当时许多所谓的“AD”小鼠模型，实际上仅模拟了“过敏性”或“刺激性”接触性皮炎，并未充分反映人类AD的临床复杂性，这严重限制了模型的临床预测价值。因此，必须建立统一的技术规范，明确质量控制要求（如固定操作时间、预实验剂量滴定、设立对照等），以系统性提升数据的可靠性和可重复性。制定规范的目的：本规范的核心目的在于，通过确立一套科学、统一、可操作的技术标准，打通从模型构建到数据输出的全链条评价路径，具体目标如下：构建标准化的技术框架：明确推荐动物品系（如BALB/c）、诱导剂类型与方案（如DNCB、OXA、MC903的标准浓度与频次）、刺激部位与方式，为不同实验室提供可直接参照执行的方案，终结方法上的混乱。确立科学的评价指标体系：建立与临床疗效终点（如EASI、IGA评分）病理生理学基础相对应的临床前核心评价指标，包括临床体征评分（耳厚度、红斑）、组织病理学（表皮厚度、炎性浸润）、免疫学（血清总IgE、细胞因子）等，确保临床前评价与临床研究逻辑连贯。填补监管指导原则的空白：与国家药监局药审中心（CDE）2023年发布的《特应性皮炎治疗药物临床试验技术指导原则》形成衔接，为其中未覆盖的临床前技术环节提供操作细则，为药物IND申报提供数据规范依据。提高研发效率与成功率：通过标准化减少无效投入和重复劳动，提升临床前数据的可重复性和临床转化价值，最终加速安全、有效的AD治疗性抗体药物的研发进程。三、团标主要技术内容及确定依据（如技术指标、参数、公式、性能要求、实验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据）；修订团标时，应增加新、旧团标水平的对比；（一）制定规范的原则本技术规范的制定，依据《团体标准管理规定》及国家标准化工作的总体要求，确立以下七项核心原则，指导规范编制的全过程。（1）依法合规原则。技术规范的技术要求不得低于强制性标准的相关技术要求。编制过程中，严格遵守《中华人民共和国标准化法》《药品管理法》《药品注册管理办法》等法律法规，确保规范内容与国家药监局药审中心《特应性皮炎治疗药物临床试验技术指导原则》等现行监管文件协调一致，不产生冲突或抵触。（2）科学性与先进性原则。制定团体标准应当有利于科学合理利用资源，推广科学技术成果，做到技术上先进，经济上合理。本规范各项技术指标的确定，基于系统的文献计量学分析和实验验证数据。据统计，2013—2023年间国内AD动物实验文献的系统分析显示，BALB/c小鼠应用占比达65.85%，DNCB诱导占比40.95%，这些数据为动物品系和诱导剂选择提供了循证依据。同时，规范鼓励采用新技术、新模型，如针对治疗性抗体评价所需的基因人源化小鼠模型，以及MC903诱导等模拟上皮源性炎症启动机制的新型方案，确保规范内容代表该领域的前沿水平。（3）开放、公平与透明原则。社会团体应遵循开放、公平、透明和协商一致的原则，吸纳利益相关方广泛参与。在规范编制过程中，广泛吸纳药物研发机构、CRO企业、实验动物中心、科研院所及监管机构代表参与，确保各方意见得到充分表达和协调。（4）填补空白与市场需求导向原则。团体标准应当以满足市场和创新需要为目标，聚焦新技术、新产业、新业态和新模式，填补标准空白。目前国内特应性皮炎动物模型的制备方法多样，但尚未形成统一的浓度、频率、造模周期和模型评价标准。这一现状导致不同实验室间的数据难以比较，IND申报数据缺乏统一的审评依据。本规范定位于填补国家、行业标准在AD临床前评价技术领域的空白，回应产业对标准化临床前数据质量的迫切需求。（5）可操作性与实用性原则。规范内容应便于不同实验室参照执行。在具体技术参数设定上，基于文献中高频应用方案给出推荐范围——如DNCB致敏浓度1%、激发浓度0.5%，卡泊三醇浓度2nmol/L——同时保留预实验剂量滴定的弹性空间。在评价指标上，优先纳入耳厚度测量、临床严重程度评分、血清总IgE检测等操作成熟、设备普适的指标，避免对高端设备（如单细胞测序）的过度依赖，兼顾不同层级研究机构的实施能力。（6）动物福利与伦理原则。规范要求通过IACUC/等同伦理审批，建立镇痛与保湿护理流程，设定人道终止标准。具体包括：采用最小有效剂量与频次，避免深度屏障破坏导致的渗血或溃疡；建立体重监测机制，当体重下降>15%时启动人道终止；对溶剂对照组和模型组实施统一的保湿护理（如凡士林处理），控制非实验变量。这一原则体现了“3R”原则（替代、减少、优化）在标准制定中的贯彻。（7）动态更新与持续改进原则。团体标准实施后，应当根据相关领域的发展需要组织复审，复审周期一般不超过五年。考虑到AD治疗性抗体领域发展迅速——新靶点（OX40、IL-33/ST2等）不断涌现，新型模型（如屋尘螨+SEB复合模型）和评价技术（空间转录组、多重细胞因子检测等）持续迭代——本规范预留修订空间，在复审时可根据技术进展更新内容，保持先进性和时效性。（二）制定规范的依据本规范制定的主要依据是：《特应性皮炎治疗药物临床试验技术指导原则》（国家药监局药审中心，2023年第58号）。该指导原则由CDE于2023年12月1日发布，旨在指导AD治疗药物的科学研发和评价，提供可供参考的技术标准。该原则主要聚焦于临床试验阶段（受试者入排标准、疗效终点选择、安全性监测等），未涉及临床前动物模型构建与评价的具体技术细节。本规范与之形成体系衔接，填补了从临床前研究到临床评价之间的技术链条空白，使模型评价指标（耳厚度、临床评分、血清IgE等）与指导原则中的临床疗效终点（EASI、IGA、瘙痒NRS评分）在病理生理学基础上形成对应。（三）与法律法规标准关系本规范制定以现行国家标准、行业标准为依据，技术内容、指标、要求等与现行法律、法规和国家、行业标准相协调，无冲突。GB/T43051-2023《实验动物动物实验生物安全通用要求》。该标准规定了动物实验生物安全相关的实验动物质量、动物实验人员资格、风险评估和风险控制等通用要求。本规范中的质量控制条款（如SPF级饲养环境、预实验剂量滴定、固定操作时间等）与该标准的生物安全管理要求协调一致，是对该标准在AD抗体评价这一具体应用场景的技术细化和补充。GB/T42011-2022《实验动物福利通则》。该标准规定了实验动物福利的通用要求，涵盖实验动物来源、饲养、医护护理、从业人员能力等各环节。GB/T1.1《标准化工作导则》。本规范按照GB/T1.1的规定编写，确保文件格式、编号、结构符合国家标准编制规范。（四）主要技术参数本规范的核心技术参数基于2013—2023年间国内特应性皮炎动物实验文献的系统分析（共计纳入164篇）以及多项独立实验验证综合确定。（1）实验动物参数规范推荐BALB/c小鼠为首选品系。文献统计分析显示，BALB/c小鼠在国内AD动物实验中的应用占比高达65.85%（108次），远高于其他品系。该品系具有天然的Th2免疫偏移倾向，对半抗原刺激后的AD样炎症反应最为典型，与AD患者Th2占优的免疫学特征高度吻合，且皮损表型稳定、可重复性好。C57BL/6小鼠作为次选品系，占比14.02%（23次），适用于特定基因背景的研究需要。NC/Nga小鼠可在常规饲养条件下自发产生AD样皮损，但应用占比仅4.87%，可根据研究特殊需求选用。针对治疗性抗体的临床前评价，规范推荐使用B-hIL4/hIL4RA、B-hTSLP/hTSLPR等基因人源化小鼠，以解决抗体种属特异性问题。规范推荐使用6-8周龄小鼠，该周龄段在文献中出现频次最高，各品系均以此区间为主。BALB/c小鼠的推荐体重范围为18-22克，C57BL/6小鼠为25-30克。规范优先推荐雌性小鼠。文献统计显示，雌性在已发表研究中的占比为55.70%（83次），主要原因在于雌性小鼠便于群养，可避免雄性个体间打斗造成的皮损干扰，有利于维持造模条件的均一性。雄性占比31.54%，雌雄各半占比10.73%，研究者可根据具体研究目的及目标适应症人群特征灵活选择。（2）诱导剂参数文献分析显示，化学半抗原经皮诱导是最主要的造模方式，其中DNCB占比最高（40.95%，77次），其次为DNFB（20.74%，39次）和MC903（12.76%，24次）。DNCB诱导分为致敏与激发两个阶段。致敏阶段推荐浓度为1.00%，该浓度在文献统计中出现频率最高（38次），给药频率为每日1次，连续3天。激发阶段推荐浓度为0.50%（文献中出现27次），以每2天或每3天1次的频率持续激发，推荐总次数为12次，整个造模周期约为30天。实验验证数据表明，采用上述致敏1%/3天加激发0.5%/每2天共12次的方案后，造模小鼠皮肤出现明显的红肿、抓挠脱屑、皮肤粗糙增厚等典型AD体征，耳厚度及皮肤厚度较对照组极显著增加（P<0.01），组织病理学检查可见表皮明显增厚、真皮层淋巴细胞和肥大细胞浸润等改变，各项指标的变异系数控制在可接受范围内，验证了该方案在操作标准化和表型可重复性方面的可靠性。DNFB致敏阶段主流浓度为0.50%，给药频率为每日1次或每周2次；激发阶段主流浓度为0.20%，频率为每3天或每周2次。MC903诱导方案中，推荐浓度为2纳摩尔/升，该浓度在文献中应用最为广泛。给药频率为每日1次，以维持稳定的TSLP驱动性Th2炎症反应。造模周期以7至14天最为多见，连续诱导即可产生稳定的AD样表型，无需额外的致敏步骤。实验验证显示，MC903连续诱导14天后，模型组皮肤厚度极显著增加（P<0.01），组织内活性氧、IL-4、IFN-γ水平均呈现不同程度的升高（P<0.05），表型重复性良好。（3）造模操作参数规范推荐以背部单部位刺激为主，或采用背部联合耳部的多部位刺激方案。文献统计显示，背部单部位刺激的应用占比为44.32%（82次），是单部位刺激中最常见的选择，其优势在于操作面积大、便于标准化涂抹和皮损面积评估。耳部单部位刺激占比17.84%（33次），便于使用千分尺对耳厚度进行精确的动态测量。背部加耳部的联合刺激方案在多部位刺激中应用最广（占比32.43%），该方案可在背部观察皮损整体进展的同时，利用耳部进行定量的厚度测量，实现定性观察与定量检测的兼顾。涂抹是最主要的给药方式，文献中该方式的应用次数达166次，其优势在于操作简便、剂量可控且重复性好。少数研究采用外敷、腹腔注射或皮内注射等方式，主要用于特定类型的致敏原（如蛋白类抗原）给药。（4）阳性对照药参数规范推荐小分子药物以地塞米松为阳性对照首选，生物制剂以Dupilumab为阳性对照首选。地塞米松在文献中的应用统计次数最多，达22次，在DNCB、OXA、DNFB、MC903各类模型中均验证了明确的药效学活性，是公认的阳性参照药物。给药方式以局部涂抹为主，亦有灌胃、腹腔注射等方式。泼尼松龙应用频次次之，可作为备选。他克莫司作为钙调神经磷酸酶抑制剂，在部分文献中亦有应用记载。针对治疗性抗体的临床前评价，规范推荐Dupilumab（抗人IL-4Rα抗体）作为阳性对照。该药物已在多种人源化小鼠模型中验证可显著降低耳厚度、临床评分及血清IgE水平，其药效学特征明确，评价标准清晰，是抗体类药物最合适的阳性参照。（5）评价指标体系参数规范规定皮肤厚度测量采用千分尺或游标卡尺进行定量检测，以毫米为单位记录。文献及实验验证均表明，模型组皮肤厚度较对照组极显著增加（P<0.01），该指标灵敏度高、操作简便、可重复性好。临床严重程度评分采用半定量计分法，涵盖红斑、水肿、表皮脱落、苔藓样变等四个维度，每个维度按严重程度赋以0至3分或0至4分，将主观观察转化为可量化数据。该评分体系在各文献中应用广泛，与CDE指导原则中推荐的临床终点指标在病理生理学基础上形成对应。规范规定采用苏木素-伊红（H&E）染色法对皮损组织进行病理学检查，评价内容主要包括表皮厚度测量和炎性细胞浸润程度评估。表皮增厚和炎性浸润是AD模型的核心病理改变，模型组均呈现毛细血管扩张、真皮层淋巴细胞和肥大细胞浸润等典型AD样组织学改变。该指标作为药效评价的客观终点，与临床评分和血清学指标共同构成多维度的评价体系。规范规定血清总IgE检测采用ELISA法，该指标是AD系统性Th2免疫偏移的特征性标志物。文献及验证数据显示，DNCB、OXA、DNFB各模型组血清IgE水平均较对照组显著升高（P<0.05至P<0.01），阳性药干预后可显著回落，灵敏度高且检测方法成熟。细胞因子检测推荐采用Luminex多因子检测平台或ELISA法，重点检测IL-4、IL-13等Th2型细胞因子，必要时可同步检测IFN-γ（Th1型）、IL-17（Th17型）等以评估免疫偏移的整体格局。规范规定每日操作时间应固定，推荐安排在上午9时至11时之间，以控制昼夜节律对瘙痒行为和炎症反应水平的影响。这一要求在行业内商业CRO的标准操作流程中均有体现。规范要求建立预实验剂量滴定机制。由于不同批次试剂间可能存在活性差异，且各实验室的饲养环境和操作手法不尽相同，正式实验前应通过预实验确定本实验室条件下的最佳致敏浓度和激发浓度，以确保造模成功率并避免因浓度过高导致的刺激性皮炎或浓度过低导致的表型不充分。规范要求设立溶剂或赋形剂对照组，以区分致敏原诱导的特异性免疫性炎症与溶剂本身可能引起的刺激性反应。这一设计对于准确判定模型的有效性和候选药物的特异性至关重要。规范要求实施双人盲法评估或半自动算法评估。临床评分具有主观性，盲法评估可有效减少观察者偏倚，确保评价结果的客观性。双人独立评分后取均值可进一步提高数据的可靠性。规范要求完整记录试剂的批次编号、配制方式、保存条件等溯源信息。AD模型的稳定性受试剂批次间差异的显著影响，完整的记录可为数据异常时的原因追溯和跨实验比较提供依据。四、国内外标准情况简要说明目前国际上尚无专门针对特应性皮炎（AD）动物模型构建及治疗性抗体临床前评价的统一技术标准，但相关领域的指导性文件和学术共识可为本次规范制定提供重要参考。ICHS6（生物技术药物的非临床安全性评价）是生物制品（含单克隆抗体）非临床评价的纲领性文件，对药效学、药代动力学和毒理学研究提出了总体要求，但对AD这一特定适应症的模型选择和评价指标缺乏细则性规定。WHO关于单抗类药物的指导原则同样提供了框架性要求，未深入到AD动物模型的具体操作层面。我国团体标准需在国际通行的监管框架下制定适应症化的技术细则。2021年发表于《ExperimentalDermatology》的AD小鼠模型批判性评述指出，当时可用的所谓“AD”小鼠模型均不能令人满意地反映人类AD的临床复杂性，更多模拟的是“过敏性”或“刺激性”接触性皮炎，而非真正的AD病理状态。该研究提出了AD模型应满足的最低标准，包括：类AD表皮屏障缺陷（丝聚蛋白表达降低伴过度增殖和增生）、表皮TSLP和骨膜蛋白等表达升高、特征性真皮免疫细胞浸润（关键细胞因子IL-4、IL-13、IL-31、IL-33过表达）、“神经性皮炎”特征（感觉神经支配过度、神经源性炎症），以及对标准AD治疗药物的反应性。该共识同时指出，人源化AD小鼠模型（SCID小鼠上的人皮肤异种移植）为临床前研究提供了有前景的替代方案，尤其适合评价靶向人源靶点的治疗性抗体。这一判断与本规范引入基因人源化小鼠模型的思路高度一致。2023年12月，国家药监局药审中心（CDE）发布了《特应性皮炎治疗药物临床试验技术指导原则》（2023年第58号），旨在指导AD治疗药物的科学研发和评价，提供可供参考的技术标准。该指导原则主要聚焦于临床试验阶段，涵盖受试者入排标准、疗效终点选择（EASI、IGA、瘙痒NRS评分）、安全性监测等内容，但未涉及临床前动物模型构建与评价的具体技术细节。中华中医药学会发布的《儿科系列常见病中药临床试验设计与评价技术指南——湿疹/特应性皮炎》（团体标准T/CACM1333.7），针对中药治疗儿童AD的临床试验设计提供了思路和方法，但同样聚焦于临床研究阶段。2013年至2023年间国内AD动物实验文献的系统分析（共纳入164篇）显示，我国在该领域的研究积累丰富，但呈现出显著的标准化不足特征。具体表现为：动物品系以BALB/c小鼠为主（占比65.85%），但C57BL/6、NC/Nga、KM小鼠等品系均有使用；造模方法以化学半抗原经皮诱导为主，其中DNCB（40.95%）、DNFB（20.74%）和MC903（12.76%）应用最多；各方法的致敏浓度、激发浓度、刺激频率和造模周期差异较大，如DNCB致敏浓度从0.1%至2%均有报道，但以1%为主流。已有文献明确指出：“目前国内特应性皮炎动物模型的制备方法多样且相对成熟，但是尚未形成统一的浓度、频率、造模周期和模型评价标准”。在阳性对照药方面，地塞米松应用最多（22次），泼尼松龙、糠酸莫米松、他克莫司等亦有使用。这些数据为本规范的技术参数设定提供了直接的文献依据。综上，本规范的制定立足于填补国内外在AD动物模型及抗体药物临床前评价领域成文技术标准的空白，既回应国际学术界对AD模型标准化的呼吁，也回应国内产业对规范化临床前数据的迫切需求