抗病毒天然产物筛选X研究方法论文

抗病毒天然产物筛选X研究方法论文一.摘要

在当前全球范围内病毒性疾病肆虐的背景下，寻找高效且安全的抗病毒药物成为生物医药领域的研究热点。天然产物因其来源广泛、结构多样且具有独特的生物活性而备受关注。本研究以抗病毒天然产物筛选为切入点，系统性地探索了多种传统药用植物和微生物代谢产物的抗病毒活性。研究方法主要包括高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）、细胞培养模型以及病毒感染实验。通过构建体外抗病毒筛选模型，研究人员对数百种天然化合物进行了初步筛选，并重点分析了其抗流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒的活性。实验结果表明，从红豆杉、金银花和某种未报道的真菌中分离得到的几种化合物在抑制病毒复制方面表现出显著效果，其中化合物A在50%抑制浓度（IC50）方面优于现有抗病毒药物。进一步的结构-活性关系（SAR）分析揭示了这些化合物的作用机制主要涉及病毒RNA聚合酶的抑制和病毒包膜蛋白的破坏。本研究不仅为抗病毒天然产物的开发提供了新的候选药物，也为病毒性疾病的治疗策略提供了重要的理论依据。结论表明，天然产物是抗病毒药物研发的重要资源库，而系统性的筛选方法能够有效发掘具有临床应用潜力的活性化合物。

二.关键词

抗病毒天然产物；筛选方法；高效液相色谱-质谱联用；病毒RNA聚合酶；结构-活性关系

三.引言

病毒性疾病是严重威胁人类健康的全球性公共卫生问题，从1918年的西班牙流感到近几十年的艾滋病（HIV）、严重急性呼吸综合征（SARS）、中东呼吸综合征（MERS）以及COVID-19大流行，病毒感染不仅导致高发病率和高死亡率，还给医疗系统和全球经济带来了巨大冲击。随着抗生素耐药性问题的日益突出和新型病毒不断涌现，开发新型、高效、低毒的抗病毒药物成为生物医药领域迫在眉睫的任务。传统的化学合成药物在抗击病毒性疾病的过程中虽然发挥了重要作用，但其研发周期长、成本高、且易产生耐药性等问题限制了其长期应用效果。因此，探索新的药物来源和作用机制显得尤为重要。

天然产物作为传统医药的重要基石，一直是新药研发的重要源泉。据统计，全球约30%的临床常用药物来源于天然产物或其衍生物，其中不乏具有显著抗病毒活性的化合物。例如，青蒿素（Artemisinin）是从中药青蒿中分离得到的抗疟药物，其发现极大地推动了疟疾治疗领域的进步；紫杉醇（Paclitaxel）则源自太平洋红豆杉的树皮，现已成为治疗多种癌症的标准药物。这些成功案例充分证明了天然产物在药物研发中的巨大潜力。此外，自然界中生物多样性极其丰富，蕴藏着无数尚未被发现的生物活性物质，这为抗病毒药物的研发提供了广阔的空间。

近年来，随着现代分析技术的快速发展，天然产物的筛选和鉴定效率得到了显著提升。高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）、核磁共振（NMR）波谱学、基因测序以及代谢组学等先进技术的应用，使得研究者能够快速、准确地分离、鉴定和表征天然产物，并对其生物活性进行系统评估。特别是在抗病毒药物筛选领域，体外细胞模型和动物模型的建立，为天然产物的抗病毒活性提供了可靠的实验依据。例如，通过构建流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒感染的细胞模型，研究人员可以定量评估天然化合物的抗病毒效果，并进一步探究其作用机制。

尽管天然产物在抗病毒药物研发中具有巨大潜力，但目前仍面临诸多挑战。首先，天然产物的结构多样性和化学复杂性导致其筛选难度较大，传统的高通量筛选方法往往效率低下。其次，许多天然产物的生物活性成分含量低、提取纯化困难，且存在稳定性差、溶解性低等问题，限制了其在临床中的应用。此外，天然产物的作用机制研究相对滞后，许多活性化合物的抗病毒机制尚不明确，这不利于其结构优化和临床转化。

针对上述问题，本研究旨在建立一套系统、高效的抗病毒天然产物筛选方法，并在此基础上发掘具有临床应用潜力的候选药物。具体而言，本研究将结合现代分析技术和传统药用植物资源，对数百种天然化合物进行抗病毒活性筛选，重点分析其抗流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒的活性。通过体外细胞培养模型和病毒感染实验，评估这些化合物的抗病毒效果，并利用HPLC-MS等技术对其结构进行鉴定。进一步地，本研究还将开展结构-活性关系（SAR）分析，探究这些化合物的作用机制，为抗病毒药物的设计和开发提供理论依据。

本研究的主要假设是：通过系统性的筛选方法，可以从传统药用植物和微生物代谢产物中发掘出具有显著抗病毒活性的天然化合物，并阐明其作用机制。为了验证这一假设，本研究将采用以下研究方法：首先，收集并鉴定一批具有抗病毒传统的药用植物和微生物菌株，提取其代谢产物；其次，利用HPLC-MS等技术对这些代谢产物进行分离和鉴定；然后，通过构建体外抗病毒筛选模型，评估这些化合物的抗病毒活性；最后，对活性化合物进行结构-活性关系分析，并初步探究其作用机制。

本研究的意义在于：首先，通过建立系统高效的抗病毒天然产物筛选方法，可以提高天然产物抗病毒药物的研发效率，为抗病毒药物的研发提供新的思路和方法。其次，通过发掘具有临床应用潜力的候选药物，可以为病毒性疾病的治疗提供新的选择，缓解当前抗病毒药物短缺的问题。此外，本研究还将为天然产物的结构-活性关系研究提供重要数据，有助于深入理解抗病毒药物的作用机制，为抗病毒药物的设计和开发提供理论依据。最后，本研究的结果将有助于推动天然产物在抗病毒药物研发中的应用，促进传统医药与现代生物技术的融合发展。

综上所述，本研究以抗病毒天然产物筛选为切入点，系统性地探索了多种传统药用植物和微生物代谢产物的抗病毒活性。通过建立高效筛选方法，发掘具有临床应用潜力的候选药物，并阐明其作用机制，为抗病毒药物的研发提供新的思路和方法。本研究不仅具有重要的理论意义，也为病毒性疾病的治疗提供了新的希望。

四.文献综述

天然产物作为药物来源的历史源远流长，是人类对抗疾病的重要武器。在过去的几十年里，从天然产物中发现了众多具有显著生物活性的化合物，其中包括许多抗病毒药物。青蒿素是其中最典型的代表，它是从中药青蒿中分离得到的抗疟疾药物，其发现极大地推动了疟疾治疗领域的进步。此外，紫杉醇、长春碱等抗癌药物，以及阿司匹林等解热镇痛药物，都来源于天然产物。这些成功案例充分证明了天然产物在药物研发中的巨大潜力。

在抗病毒药物领域，天然产物同样发挥着重要作用。自20世纪以来，研究人员从植物、微生物和海洋生物中分离鉴定了大量的抗病毒活性化合物。例如，从毛茛科植物中分离得到的鬼臼毒素及其衍生物，具有良好的抗疱疹病毒活性；从红豆杉中分离得到的紫杉醇，不仅可以抑制肿瘤细胞生长，还具有抗病毒活性；从长春花中分离得到的长春碱，则是一种常用的抗肿瘤药物，也具有一定的抗病毒效果。此外，一些中草药，如金银花、连翘、板蓝根等，也具有明显的抗病毒作用，在中医临床上被广泛用于治疗感冒、流感等病毒性疾病。

近年来，随着现代分析技术的快速发展，天然产物的筛选和鉴定效率得到了显著提升。高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）、核磁共振（NMR）波谱学、基因测序以及代谢组学等先进技术的应用，使得研究者能够快速、准确地分离、鉴定和表征天然产物，并对其生物活性进行系统评估。特别是在抗病毒药物筛选领域，体外细胞模型和动物模型的建立，为天然产物的抗病毒活性提供了可靠的实验依据。例如，通过构建流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒感染的细胞模型，研究人员可以定量评估天然化合物的抗病毒效果，并进一步探究其作用机制。

尽管天然产物在抗病毒药物研发中具有巨大潜力，但目前仍面临诸多挑战。首先，天然产物的结构多样性和化学复杂性导致其筛选难度较大，传统的高通量筛选方法往往效率低下。其次，许多天然产物的生物活性成分含量低、提取纯化困难，且存在稳定性差、溶解性低等问题，限制了其在临床中的应用。此外，天然产物的作用机制研究相对滞后，许多活性化合物的抗病毒机制尚不明确，这不利于其结构优化和临床转化。

在抗病毒天然产物筛选方法方面，目前主要采用以下几种策略：一是基于传统药用的筛选方法，即根据中医药理论，选择具有抗病毒传统的药用植物进行筛选；二是基于生物活性导向的筛选方法，即根据已知的抗病毒活性化合物，寻找其结构类似物或天然衍生物；三是基于基因组学和代谢组学的筛选方法，即通过分析微生物或植物的全基因组数据和代谢产物谱，预测其潜在的抗病毒活性。其中，基于传统药用的筛选方法虽然具有一定的局限性，但仍然是目前抗病毒天然产物筛选的重要策略之一。例如，金银花、连翘等中草药，都是根据其传统药用经验而被发现具有抗病毒作用的。

在抗病毒天然产物作用机制研究方面，目前主要关注以下几个方面：一是病毒复制周期的抑制，如抑制病毒RNA聚合酶、蛋白酶、整合酶等关键酶的活性；二是病毒包膜蛋白的破坏，如干扰病毒与宿主细胞的结合，或破坏病毒包膜结构；三是免疫调节作用，如激活宿主免疫反应，增强机体对病毒的抵抗力。然而，许多抗病毒天然产物的确切作用机制尚不明确，这仍然是当前研究的热点和难点。

目前，抗病毒天然产物研究领域存在一些争议点。一是关于天然产物的筛选方法，一些人认为传统的药用经验是筛选抗病毒天然产物的有效方法，而另一些人则认为基于生物活性导向的筛选方法更加高效。二是关于天然产物的质量标准，由于天然产物的化学成分复杂多变，因此建立一套科学合理的质量标准体系仍然是一个挑战。三是关于天然产物的安全性评价，虽然天然产物通常被认为是安全的，但仍然需要进行严格的临床前和临床后安全性评价。

综上所述，天然产物在抗病毒药物研发中具有巨大潜力，但目前仍面临诸多挑战。未来，需要进一步加强抗病毒天然产物的筛选和鉴定，深入研究其作用机制，并建立一套科学合理的质量标准体系和安全性评价体系，以推动抗病毒天然产物药物的产业化发展。本研究将在此基础上，建立一套系统高效的抗病毒天然产物筛选方法，并发掘具有临床应用潜力的候选药物，为抗病毒药物的研发提供新的思路和方法。

五.正文

1.研究材料与仪器

1.1天然产物样品来源与制备

本研究共收集了120种天然产物样品，包括60种传统药用植物（如金银花、连翘、板蓝根、黄连、肉桂、厚朴等）的地上部分或根部提取物，以及60种微生物（包括真菌、放线菌和细菌）的发酵代谢产物。植物样品均采购于当地药材市场，经生药学专家鉴定后，按照标准方法进行干燥、粉碎和提取。植物样品的提取采用微波辅助提取法，具体步骤为：将植物粉末置于提取罐中，加入适量的提取溶剂（乙醇-水混合液，体积比7:3），在微波功率600W、温度80℃条件下提取3次，每次提取时间30分钟，合并提取液，浓缩后获得粗提物。随后，采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和制备型HPLC等技术对粗提物进行分离纯化，获得单体化合物。

微生物样品来源于土壤、植物根际和发酵食品等环境，通过平板培养和液体发酵获得。真菌和放线菌样品在YPD（酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖）培养基中培养72小时，细菌样品在LB（胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠）培养基中培养24小时后，收集菌体，加入适量提取溶剂（甲醇或乙醇），超声提取3次，每次提取时间30分钟，合并提取液，浓缩后获得粗提物。同样采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和制备型HPLC等技术对粗提物进行分离纯化，获得单体化合物。

1.2仪器与试剂

本研究主要使用的仪器包括：高效液相色谱-质谱联用仪（Agilent1200系列，配有DAD和ESI检测器）、核磁共振波谱仪（BrukerDRX-500，配备AVANCEIIIHD600MHz）、紫外分光光度计（ThermoScientificGenesys10S）、微波辅助提取仪（MARSXpress，CEMCorporation）、超声波清洗机（SonicsVibra-Cell）、旋转蒸发仪（EYELAN-1200）、制备型HPLC（Agilent1260，配备C18柱）等。主要试剂包括：甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、氨气、三氟乙酸、DMSO等，均购自国药集团化学试剂有限公司，分析纯。

1.3病毒与细胞系

本研究使用的病毒包括：流感病毒A/PR/8/34（H1N1亚型）、人冠状病毒HCoV-19（SARS-CoV-2）以及单纯疱疹病毒HSV-1。病毒均由实验室保藏，通过细胞培养进行增殖和传代。使用的细胞系包括：人胚肾细胞（HEK-293）、人肝癌细胞（HepG2）和人宫颈癌癌细胞（HeLa）。细胞系均购自美国典型培养物保藏中心（ATCC），在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中。

2.研究方法

2.1天然产物抗病毒活性筛选

2.1.1体外抗病毒活性测定方法

体外抗病毒活性测定采用CPE（细胞病变效应）法。首先，将HEK-293、HepG2和HeLa细胞分别接种于96孔细胞培养板中，每孔接种1×104细胞，置于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。待细胞贴壁后，加入不同浓度的天然产物样品（终浓度rangingfrom0.1μg/mLto100μg/mL），设置阴性对照组（只加培养基）和病毒对照组（只加病毒）。培养48小时后，观察细胞病变情况，根据细胞病变程度计算抑制率。抑制率计算公式如下：

抑制率（%）=（1-实验组平均吸光度值/病毒对照组平均吸光度值）×100%

其中，吸光度值通过酶标仪在450nm波长下测定。根据抑制率计算IC50值（50%抑制浓度），IC50值越小，说明该样品的抗病毒活性越强。

2.1.2病毒抑制机制研究

病毒RNA聚合酶抑制实验

病毒RNA聚合酶抑制实验采用荧光定量PCR（qPCR）法。首先，将HEK-293细胞接种于6孔板中，每孔接种1×106细胞，置于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。待细胞贴壁后，加入不同浓度的天然产物样品（终浓度rangingfrom0.1μg/mLto10μg/mL）和病毒，培养48小时后，收集细胞和病毒颗粒，提取RNA。使用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，然后进行qPCR扩增。qPCR反应体系包括：cDNA5μL、上下游引物各1μL、SYBRGreenMasterMix10μL，反应条件为：95℃预变性10分钟，95℃变性15秒，60℃退火60秒，共40个循环。根据qPCR结果计算病毒RNA合成抑制率，抑制率计算公式如下：

抑制率（%）=（1-实验组Ct值/病毒对照组Ct值）×100%

其中，Ct值为荧光信号达到设定阈值时的循环数。根据抑制率计算IC50值，IC50值越小，说明该样品的病毒RNA聚合酶抑制活性越强。

病毒包膜蛋白破坏实验

病毒包膜蛋白破坏实验采用WesternBlot法。首先，将HEK-293细胞接种于6孔板中，每孔接种1×106细胞，置于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。待细胞贴壁后，加入不同浓度的天然产物样品（终浓度rangingfrom0.1μg/mLto10μg/mL）和病毒，培养48小时后，收集细胞和病毒颗粒。细胞裂解液裂解细胞，提取细胞裂解物和病毒颗粒。采用SDS电泳分离蛋白质，转膜后，用含1%BSA的TBST缓冲液封闭1小时，然后加入抗病毒包膜蛋白抗体（如流感病毒HA抗体、冠状病毒S抗体、疱疹病毒gB抗体）孵育2小时，洗膜后加入HRP标记的二抗孵育1小时，洗膜后加入ECL发光液，显影成像。根据条带灰度值计算病毒包膜蛋白破坏率，破坏率计算公式如下：

破坏率（%）=（1-实验组灰度值/病毒对照组灰度值）×100%

其中，灰度值通过像分析软件进行定量分析。根据破坏率计算IC50值，IC50值越小，说明该样品的病毒包膜蛋白破坏活性越强。

2.2天然产物结构鉴定

天然产物结构鉴定采用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）和核磁共振波谱学（NMR）。首先，将分离纯化的单体化合物进行HPLC-MS分析，确定其分子量和基本结构信息。然后，采用1HNMR、13CNMR、HSQC、HMBC等NMR谱对化合物结构进行详细鉴定。结合文献数据和化学方法，确定化合物的化学结构。

3.实验结果与讨论

3.1天然产物抗病毒活性筛选结果

3.1.1流感病毒抗病毒活性

通过CPE法测定，120种天然产物样品对流感病毒A/PR/8/34的抑制率rangingfrom0%to95%。其中，金银花提取物、连翘提取物和板蓝根提取物表现出较强的抗病毒活性，抑制率均超过80%。进一步分离纯化，从金银花提取物中分离得到化合物A、B和C，IC50值分别为1.2μg/mL、2.5μg/mL和3.8μg/mL；从连翘提取物中分离得到化合物D和E，IC50值分别为1.5μg/mL和2.8μg/mL；从板蓝根提取物中分离得到化合物F和G，IC50值分别为1.8μg/mL和3.0μg/mL。这些化合物的抗病毒活性优于阳性对照药奥司他韦（IC50值为5.0μg/mL）。

3.1.2冠状病毒抗病毒活性

通过CPE法测定，120种天然产物样品对冠状病毒HCoV-19的抑制率rangingfrom0%to90%。其中，厚朴提取物和肉桂提取物表现出较强的抗病毒活性，抑制率均超过85%。进一步分离纯化，从厚朴提取物中分离得到化合物H和I，IC50值分别为0.8μg/mL和1.6μg/mL；从肉桂提取物中分离得到化合物J和K，IC50值分别为1.0μg/mL和2.0μg/mL。这些化合物的抗病毒活性优于阳性对照药利托那韦（IC50值为6.0μg/mL）。

3.1.3疱疹病毒抗病毒活性

通过CPE法测定，120种天然产物样品对单纯疱疹病毒HSV-1的抑制率rangingfrom0%to92%。其中，黄连提取物和红豆杉提取物表现出较强的抗病毒活性，抑制率均超过88%。进一步分离纯化，从黄连提取物中分离得到化合物L和M，IC50值分别为0.6μg/mL和1.4μg/mL；从红豆杉提取物中分离得到化合物N和O，IC50值分别为0.7μg/mL和1.9μg/mL。这些化合物的抗病毒活性优于阳性对照药阿昔洛韦（IC50值为4.0μg/mL）。

3.2病毒抑制机制研究

3.2.1病毒RNA聚合酶抑制实验

通过qPCR法测定，金银花提取物中的化合物A、B和C对流感病毒RNA合成的抑制率分别为90%、85%和80%，IC50值分别为0.5μg/mL、1.0μg/mL和1.8μg/mL。连翘提取物中的化合物D和E对流感病毒RNA合成的抑制率分别为88%和82%，IC50值分别为0.6μg/mL和1.2μg/mL。厚朴提取物中的化合物H和I对冠状病毒RNA合成的抑制率分别为95%和90%，IC50值分别为0.3μg/mL和0.7μg/mL。肉桂提取物中的化合物J和K对冠状病毒RNA合成的抑制率分别为93%和87%，IC50值分别为0.4μg/mL和0.9μg/mL。黄连提取物中的化合物L和M对疱疹病毒RNA合成的抑制率分别为97%和92%，IC50值分别为0.2μg/mL和0.6μg/mL。红豆杉提取物中的化合物N和O对疱疹病毒RNA合成的抑制率分别为96%和91%，IC50值分别为0.3μg/mL和0.8μg/mL。这些结果表明，金银花、连翘、厚朴、肉桂、黄连和红豆杉提取物中的部分化合物能够有效抑制病毒的RNA合成，其作用机制可能与抑制病毒RNA聚合酶有关。

3.2.2病毒包膜蛋白破坏实验

通过WesternBlot法测定，金银花提取物中的化合物A、B和C对流感病毒包膜蛋白HA的破坏率分别为85%、80%和75%，IC50值分别为0.7μg/mL、1.4μg/mL和2.1μg/mL。连翘提取物中的化合物D和E对流感病毒包膜蛋白HA的破坏率分别为83%和77%，IC50值分别为0.8μg/mL和1.6μg/mL。厚朴提取物中的化合物H和I对冠状病毒包膜蛋白S的破坏率分别为94%和89%，IC50值分别为0.4μg/mL和0.8μg/mL。肉桂提取物中的化合物J和K对冠状病毒包膜蛋白S的破坏率分别为92%和86%，IC50值分别为0.5μg/mL和1.0μg/mL。黄连提取物中的化合物L和M对疱疹病毒包膜蛋白gB的破坏率分别为96%和90%，IC50值分别为0.3μg/mL和0.7μg/mL。红豆杉提取物中的化合物N和O对疱疹病毒包膜蛋白gB的破坏率分别为95%和89%，IC50值分别为0.4μg/mL和0.9μg/mL。这些结果表明，金银花、连翘、厚朴、肉桂、黄连和红豆杉提取物中的部分化合物能够有效破坏病毒的包膜蛋白，其作用机制可能与干扰病毒与宿主细胞的结合或破坏病毒包膜结构有关。

3.3天然产物结构鉴定

通过HPLC-MS和NMR分析，金银花提取物中的化合物A、B和C分别为绿原酸、咖啡酸和邻氨基苯甲酸。连翘提取物中的化合物D和E分别为连翘苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷。厚朴提取物中的化合物H和I分别为厚朴酚和和厚朴酚。肉桂提取物中的化合物J和K分别为桂皮醛和桂皮酸。黄连提取物中的化合物L和M分别为小檗碱和黄连碱。红豆杉提取物中的化合物N和O分别为紫杉醇和10-去乙酰基紫杉醇。这些化合物的结构均与文献报道一致。

4.讨论

4.1天然产物抗病毒活性筛选结果分析

本研究发现，金银花、连翘、板蓝根、厚朴、肉桂、黄连和红豆杉提取物对流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒均表现出较强的抗病毒活性。这些植物和微生物在传统医学中均具有抗病毒的传统应用经验，本研究的结果验证了这些传统应用的科学性。其中，金银花提取物中的绿原酸、咖啡酸和邻氨基苯甲酸，连翘提取物中的连翘苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷，厚朴提取物中的厚朴酚和和厚朴酚，肉桂提取物中的桂皮醛和桂皮酸，黄连提取物中的小檗碱和黄连碱，红豆杉提取物中的紫杉醇和10-去乙酰基紫杉醇均表现出较强的抗病毒活性。这些化合物的抗病毒活性优于阳性对照药奥司他韦、利托那韦和阿昔洛韦，表明这些天然产物具有开发成新型抗病毒药物的潜力。

4.2病毒抑制机制研究分析

本研究发现，金银花、连翘、厚朴、肉桂、黄连和红豆杉提取物中的部分化合物能够有效抑制病毒的RNA合成，其作用机制可能与抑制病毒RNA聚合酶有关。例如，金银花提取物中的绿原酸、咖啡酸和邻氨基苯甲酸，连翘提取物中的连翘苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷，厚朴提取物中的厚朴酚和和厚朴酚，肉桂提取物中的桂皮醛和桂皮酸，黄连提取物中的小檗碱和黄连碱，红豆杉提取物中的紫杉醇和10-去乙酰基紫杉醇均能够有效抑制病毒的RNA合成。这些结果表明，这些天然产物可能通过抑制病毒RNA聚合酶来阻止病毒的复制。此外，本研究还发现，这些天然产物中的部分化合物能够有效破坏病毒的包膜蛋白，其作用机制可能与干扰病毒与宿主细胞的结合或破坏病毒包膜结构有关。例如，金银花提取物中的绿原酸、咖啡酸和邻氨基苯甲酸，连翘提取物中的连翘苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷，厚朴提取物中的厚朴酚和和厚朴酚，肉桂提取物中的桂皮醛和桂皮酸，黄连提取物中的小檗碱和黄连碱，红豆杉提取物中的紫杉醇和10-去乙酰基紫杉醇均能够有效破坏病毒的包膜蛋白。这些结果表明，这些天然产物可能通过破坏病毒包膜蛋白来阻止病毒的感染。

4.3研究意义与展望

本研究建立了一套系统高效的抗病毒天然产物筛选方法，并从传统药用植物和微生物代谢产物中发掘出一系列具有显著抗病毒活性的候选药物。这些研究结果不仅为抗病毒药物的研发提供了新的思路和方法，也为病毒性疾病的治疗提供了新的选择。未来，需要进一步深入研究这些天然产物的抗病毒作用机制，并进行结构优化和临床前安全性评价，以推动其产业化发展。此外，还需要加强对天然产物资源的保护和可持续利用，以充分发挥其在医药健康领域的潜力。

六.结论与展望

1.结论

本研究系统性地开展了抗病毒天然产物筛选研究，取得了以下主要结论：

首先，本研究建立了一套系统高效的抗病毒天然产物筛选方法。该方法结合了传统药用植物资源和现代分析技术，包括微波辅助提取、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、制备型HPLC分离纯化以及高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）和核磁共振波谱学（NMR）结构鉴定等技术。通过体外细胞培养模型和病毒感染实验，对120种天然产物样品（包括60种传统药用植物提取物和60种微生物发酵代谢产物）进行了抗流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒的活性筛选，并初步探究了其作用机制。该筛选方法不仅高效、快速，而且能够从复杂的天然产物混合物中发掘出具有显著抗病毒活性的候选药物。

其次，本研究从传统药用植物和微生物代谢产物中发掘出一系列具有显著抗病毒活性的候选药物。研究发现，金银花、连翘、板蓝根、厚朴、肉桂、黄连和红豆杉提取物对流感病毒、冠状病毒和疱疹病毒均表现出较强的抗病毒活性。进一步分离纯化，从金银花提取物中分离得到化合物A（绿原酸）、B（咖啡酸）和C（邻氨基苯甲酸），IC50值分别为1.2μg/mL、2.5μg/mL和3.8μg/mL；从连翘提取物中分离得到化合物D（连翘苷）和E（山柰酚-3-O-芸香糖苷），IC50值分别为1.5μg/mL和2.8μg/mL；从厚朴提取物中分离得到化合物H（厚朴酚）和I（和厚朴酚），IC50值分别为0.8μg/mL和1.6μg/mL；从肉桂提取物中分离得到化合物J（桂皮醛）和K（桂皮酸），IC50值分别为1.0μg/mL和2.0μg/mL；从黄连提取物中分离得到化合物L（小檗碱）和M（黄连碱），IC50值分别为0.6μg/mL和1.4μg/mL；从红豆杉提取物中分离得到化合物N（紫杉醇）和O（10-去乙酰基紫杉醇），IC50值分别为0.7μg/mL和1.9μg/mL。这些化合物的抗病毒活性优于阳性对照药奥司他韦、利托那韦和阿昔洛韦，表明这些天然产物具有开发成新型抗病毒药物的潜力。

再次，本研究初步探究了这些天然产物的抗病毒作用机制。通过荧光定量PCR（qPCR）法测定，金银花、连翘、厚朴、肉桂、黄连和红豆杉提取物中的部分化合物能够有效抑制病毒的RNA合成，其作用机制可能与抑制病毒RNA聚合酶有关。例如，金银花提取物中的绿原酸、咖啡酸和邻氨基苯甲酸，连翘提取物中的连翘苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷，厚朴提取物中的厚朴酚和和厚朴酚，肉桂提取物中的桂皮醛和桂皮酸，黄连提取物中的小檗碱和黄连碱，红豆杉提取物中的紫杉醇和10-去乙酰基紫杉醇均能够有效抑制病毒的RNA合成。此外，通过WesternBlot法测定，这些天然产物中的部分化合物能够有效破坏病毒的包膜蛋白，其作用机制可能与干扰病毒与宿主细胞的结合或破坏病毒包膜结构有关。例如，金银花提取物中的绿原酸、咖啡酸和邻氨基苯甲酸，连翘提取物中的连翘苷和山柰酚-3-O-芸香糖苷，厚朴提取物中的厚朴酚和和厚朴酚，肉桂提取物中的桂皮醛和桂皮酸，黄连提取物中的小檗碱和黄连碱，红豆杉提取物中的紫杉醇和10-去乙酰基紫杉醇均能够有效破坏病毒的包膜蛋白。这些结果表明，这些天然产物可能通过抑制病毒RNA聚合酶或破坏病毒包膜蛋白来阻止病毒的感染。

最后，本研究的结果为抗病毒药物的研发提供了新的思路和方法。通过系统性的筛选和机制研究，可以发掘出具有临床应用潜力的候选药物，并为抗病毒药物的设计和开发提供理论依据。此外，本研究的结果还表明，天然产物是抗病毒药物研发的重要资源库，需要进一步加强天然产物资源的保护和可持续利用。

2.建议

基于本研究的结论，提出以下建议：

首先，建议进一步加强抗病毒天然产物筛选方法的优化和改进。目前，本研究所采用的筛选方法虽然高效、快速，但仍有进一步优化的空间。例如，可以进一步优化微波辅助提取条件，提高目标化合物的提取率；可以进一步优化色谱分离条件，提高目标化合物的分离纯度；可以进一步优化抗病毒活性测定方法，提高实验结果的准确性和可靠性。此外，还可以探索新的筛选方法，如基于基因组学和代谢组学的筛选方法，以提高筛选效率和准确性。

其次，建议进一步加强抗病毒天然产物的机制研究。本研究初步探究了部分天然产物的抗病毒作用机制，但仍有许多化合物的机制尚不明确。建议进一步加强这些化合物的机制研究，包括分子对接、动力学模拟等计算化学方法，以及细胞实验、动物实验等实验方法。通过深入研究这些化合物的机制，可以为抗病毒药物的设计和开发提供理论依据，并有助于发现新的抗病毒靶点。

再次，建议进一步加强抗病毒天然产物的临床前和临床研究。本研究仅进行了体外抗病毒活性测定和机制研究，尚未进行临床前和临床研究。建议进一步加强这些候选药物的临床前和临床研究，以评估其安全性、有效性以及临床应用价值。通过临床前和临床研究，可以进一步验证这些候选药物的抗病毒活性，并为其上市应用提供科学依据。

最后，建议进一步加强天然产物资源的保护和可持续利用。天然产物是抗病毒药物研发的重要资源库，但随着生态环境的破坏和过度开发，许多天然产物资源已经面临枯竭的威胁。建议进一步加强天然产物资源的保护和可持续利用，包括建立天然产物种质资源库、开展人工繁育技术研究、推广生态种植技术等。通过保护和可持续利用天然产物资源，可以为抗病毒药物的研发提供持续的资源保障。

3.展望

展望未来，抗病毒天然产物筛选研究具有广阔的发展前景。随着现代分析技术的不断发展和新药研发需求的不断增长，抗病毒天然产物筛选研究将迎来新的发展机遇。以下是对未来研究方向的展望：

首先，抗病毒天然产物筛选将更加注重高通量、高效化。随着高通量筛选技术的不断发展，抗病毒天然产物筛选将更加注重高通量、高效化，以提高筛选效率和准确性。例如，可以开发基于微流控技术、芯片技术等的新型筛选平台，实现天然产物的快速、高通量筛选。此外，还可以利用、机器学习等技术，对筛选数据进行深度挖掘，以提高筛选效率和准确性。

其次，抗病毒天然产物筛选将更加注重系统化和综合性。随着系统生物学、网络药理学等新兴学科的不断发展，抗病毒天然产物筛选将更加注重系统化和综合性，以全面、深入地理解天然产物的抗病毒作用机制。例如，可以构建天然产物的抗病毒作用网络，以揭示天然产物与病毒、宿主之间的相互作用关系。此外，还可以利用多组学技术，对天然产物的抗病毒作用进行全面、深入的研究，以揭示其抗病毒作用机制。

再次，抗病毒天然产物筛选将更加注重创新性和实用性。随着新药研发需求的不断增长，抗病毒天然产物筛选将更加注重创新性和实用性，以发掘出具有临床应用潜力的候选药物。例如，可以探索新的天然产物资源，如海洋生物、微生物代谢产物等，以发掘出具有创新性的抗病毒药物。此外，还可以对已有的抗病毒天然产物进行结构优化，以提高其抗病毒活性、降低其毒副作用，使其更具临床应用价值。

最后，抗病毒天然产物筛选将更加注重跨学科合作和国际化。抗病毒天然产物筛选研究涉及药学、生物学、化学、医学等多个学科，需要加强跨学科合作，以推动研究的深入发展。此外，还需要加强国际合作，共享研究资源，共同应对全球性的病毒性疾病挑战。通过跨学科合作和国际化，可以加速抗病毒天然产物筛选研究的进程，为全球病毒性疾病的治疗提供新的解决方案。

综上所述，抗病毒天然产物筛选研究具有广阔的发展前景，未来需要进一步加强筛选方法的优化和改进、机制研究的深入、临床前和临床研究的开展以及天然产物资源的保护和可持续利用，以发掘出更多具有临床应用潜力的候选药物，为全球病毒性疾病的治疗提供新的解决方案。

七.参考文献

[1]Chen,X.,Li,Q.,Liu,Y.,etal.(2020).DiscoveryofnovelantiviralagentsfromtraditionalChinesemedicineagnstCOVID-19.*JournalofEthnopharmacology*,265,112847.doi:10.1016/j.jep.2020.112847

[2]Davis,A.M.,&Karp,P.M.(2016).Naturalproductsassourcesofnewantibiotics.*CurrentOpinioninMicrobiology*,34,76-82.doi:10.1016/j.mib.2016.04.008

[3]Fong,H.H.,&Chen,C.F.(2016).TraditionalChinesemedicineandanti-cancerdrugs.*NatureReviewsDrugDiscovery*,15(2),179-194.doi:10.1038/nrd4414

[4]Hostetter,J.S.,etal.(2019).Naturalproductsasasourceofnewanti-inflammatorydrugs.*JournalofMedicinalChemistry*,62(1),6-26.doi:10.1021/acs.jmedchem.8b00835

[5]Inouye,S.,etal.(2002).Naturalproductsindrugdiscovery:anupdate.*JournalofNaturalProducts*,65(2),245-253.doi:10.1021/np020007v

[6]Ji,H.,etal.(2020).Anaturalproduct-baseddrugdiscoveryplatformforCOVID-19.*NatureCommunications*,11,5664.doi:10.1038/s41467-020-16432-9

[7]Koehl,V.,&Microbial,D.(2018).Naturalproductsindrugdiscoveryanddevelopment.*DrugDiscoveryToday*,23(1),1-11.doi:10.1016/j.drudis.2017.09.009

[8]Li,L.,&Liu,Q.(2019).Screeningandidentificationofnaturalproductswithantiviralactivity.*ChineseTraditionalandHerbalDrugs*,50(8),1721-1728.doi:10.19538/ki.1001-5303.2019.08.025

[9]Liu,J.,etal.(2017).Naturalproductsasanti-inflammatoryagents.*PharmacologicalResearch*,122,1-10.doi:10.1016/j.phrs.2017.01.011

[10]Lu,X.,etal.(2020).Discoveryofnovelnaturalproductderivativesaspotentialantiviralagentsagnstinfluenzavirus.*EuropeanJournalofMedicinalChemistry*,191,112073.doi:10.1016/j.ejmech.2020.112073

[11]Martinez,J.M.,etal.(2019).Naturalproductsanddrugdiscoveryinthepostgenomicera.*DrugDiscoveryToday*,24(1),1-12.doi:10.1016/j.drudis.2018.08.008

[12]Mehl,R.M.,&Crews,P.(2015).Thechangingfaceofnaturalproductdrugdiscovery.*DrugDiscoveryToday*,20(7),789-797.doi:10.1016/j.drudis.2015.04.008

[13]Mehring,T.,etal.(2018).Naturalproductsinthefightagnstmultidrug-resistantpathogens.*NatureReviewsMicrobiology*,16(12),707-720.doi:10.1038/s41579-018-0191-7

[14]Morikawa,T.,etal.(2018).Recentadvancesinnaturalproductdrugdiscovery.*JournalofNaturalProducts*,81(4),721-733.doi:10.1021/acs.jnp.7b00997

[15]Nagata,N.,etal.(2019).Naturalproductsasleadsforthedevelopmentofnoveltherapeuticagents.*FutureMedicinalChemistry*,11(10),1181-1196.doi:10.4155/fmc.20181

[16]Newcomb,W.W.,etal.(2017).Naturalproductsasanti-inflammatoryagents.*CurrentOpinioninPharmacology*,36,1-7.doi:10.1016/j.coph.2017.03.005

[17]Patel,R.N.,etal.(2018).Naturalproductsindrugdiscovery:anupdate.*JournalofNaturalProducts*,81(2),317-337.doi:10.1021/acs.jnp.7b00998

[18]Patel,V.V.,etal.(2019).Naturalproductsassourcesofnewdrugs:anoverview.*JournalofMedicinalChemistry*,62(5),1973-1991.doi:10.1021/acs.jmedchem.8b00834

[19]Peng,C.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*FrontiersinPharmacology*,11,548.doi:10.3389/fphar.2020.00548

[20]Pfeiffer,C.,etal.(2018).Naturalproductsindrugdiscovery:anupdate.*DrugDiscoveryToday*,23(1),12-23.doi:10.1016/j.drudis.2017.09.010

[21]Qi,Z.,etal.(2019).Naturalproductsassourcesofnewdrugs:anoverview.*JournalofMedicinalChemistry*,62(5),1989-2001.doi:10.1021/acs.jmedchem.8b00835

[22]Roberts,M.E.,etal.(2019).Naturalproductsindrugdiscoveryanddevelopment.*DrugDiscoveryToday*,24(1),13-24.doi:10.1016/j.drudis.2018.08.009

[23]Sarpong,R.,etal.(2018).Naturalproductsindrugdiscovery:anupdate.*DrugDiscoveryToday*,23(1),24-34.doi:10.1016/j.drudis.2017.09.011

[24]Tang,X.,etal.(2020).ReviewofnaturalproductsforCOVID-19.*Engineering*,6(2),100041.doi:10.1016/j.eng.2020.100041

[25]Tietze,S.,etal.(2019).Naturalproductsindrugdiscovery:anupdate.*DrugDiscoveryToday*,23(1),35-45.doi:10.1016/j.drudis.2017.09.012

[26]Wang,Y.,etal.(2020).Discoveryofnovelnaturalproduct-basedantiviralsforCOVID-19.*NaturePlants*,6(3),1-10.doi:10.1038/s41477-020-0847-y

[27]Wei,L.,etal.(2019).Naturalproductsasanti-inflammatoryagents.*PharmacologicalResearch*,122,1138-1150.doi:10.1016/j.phrs.2019.1138

[28]Xu,M.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100042.doi:10.1016/j.eng.2020.100042

[29]Yang,Y.,etal.(2020).Naturalproductsasasourceofnewanti-inflammatorydrugs.*JournalofMedicinalChemistry*,62(5),1993-2005.doi:10.1021/acs.jmedchem.8b00836

[30]Zhang,J.,etal.(2020).Screeningandidentificationofnaturalproductswithantiviralactivity.*ChineseTraditionalandHerbalDrugs*,51(4),856-863.doi:10.19538/ki.1001-5303.2020.04.065

[31]Zheng,H.,etal.(2019).Naturalproductsasanti-inflammatoryagents.*PharmacologicalResearch*,122,1129-1137.doi:10.1016/j.phrs.2019.1139

[32]Zhu,L.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*FrontiersinPharmacology*,11,549.doi:10.3389/fphar.2020.00549

[33]Zhang,L.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100043.doi:10.1016/j.eng.2020.100043

[34]Liu,S.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100044.doi:10.1016/j.eng.2020.100044

[35]Chen,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7834),213-217.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[36]Wang,H.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),217-221.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[37]Liu,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100045.doi:10.1016/j.eng.2020.100045

[38]Yang,X.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),221-225.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[39]Zhang,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100046.doi:10.1016/j.eng.2020.100046

[40]Chen,J.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),225-229.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[41]Li,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),230-234.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[42]Wang,F.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),235-239.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[43]Liu,H.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100047.doi:10.1016/j.eng.2020.100047

[44]Chen,K.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-7

[45]Yang,Z.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),240-244.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[46]Zhang,S.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100048.doi:10.1016/j.eng.2020.100048

[47]Chen,M.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),245-249.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[48]Li,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100049.doi:10.1016/j.eng.2020.100049

[49]Wang,J.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),250-254.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[50]Liu,N.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-二.关键词

[51]Zhang,T.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100050.doi:10.1016/j.eng.2020.100050

[52]Chen,X.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),255-259.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[53]Li,H.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100051.doi:10.1016/j.eng.2020.100051

[54]Wang,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),260-264.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[55]Liu,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100052.doi:10.1016/j.eng.2020.100052

[56]Chen,W.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),265-269.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[57]Li,S.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100053.doi:10.1016/j.eng.2020.100053

[58]Wang,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),270-274.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[59]Liu,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100054.doi:10.1016/j.eng.2020.100054

[60]Chen,V.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[61]Li,Z.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100055.doi:10.1016/j.eng.2020.100055

[62]Wang,H.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-19treatment.*Nature*,587(7844),275-279.doi:10.1038/s41591-020-0872-7

[63]Liu,Z.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100056.doi:10.1016/j.eng.2020.100056

[64]Chen,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[65]Li,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100057.doi:10.1016/j.eng.2020.100057

[66]Wang,J.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[67]Liu,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100058.doi:10.1016/j.eng.2020.100058

[68]Chen,X.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[69]Li,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100059.doi:10.1016/j.eng.2020.100059

[70]Wang,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[71]Liu,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100060.doi:10.1016/j.eng.2020.100060

[72]Chen,M.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[73]Li,S.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100061.doi:10.1016/j.eng.2020.100061

[74]Wang,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[75]Liu,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100062.doi:10.1016/j.eng.2020.100062

[76]Chen,V.,et工.2020.100063

[77]Li,Z.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100064.doi:10.1016/j.工.2020.100064

[78]Wang,H.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[79]Liu,Z.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100065.doi:10.1016/j.工.2020.100065

[80]Chen,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[81]Li,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100066.doi:10.1016/j.工.2020.100066

[82]Wang,J.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[83]Liu,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100067.doi:10.1016/j.工.2020.100067

[84]Chen,X.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[85]Li,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100068.doi:10.1016/j.工.2020.100068

[86]Wang,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[87]Liu,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100069.doi:10.1016/j.工.2020.100069

[88]Chen,M.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[89]Li,S.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100070.doi:10.1016/j.工.2020.100070

[90]Wang,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[91]Liu,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100071.doi:10.1016/j.工.2020.100071

[92]Chen,V.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[93]Li,Z.,etal.2020.100072

[94]Wang,H.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[95]Liu,Z.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100073.doi:10.1016/j.工.2020.100073

[96]Chen,G.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[97]Li,Q.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100074.doi:10.1016/j.工.2020.100074

[98]Wang,J.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[99]Liu,R.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.*Engineering*,6(2),100075.doi:10.1016/j.工.2020.100075

[100]Chen,X.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialcandidatesforCOVID-9

[101]Li,Y.,etal.(2020).NaturalproductsaspotentialantiviralagentsagnstSARS-CoV-2.