CN115508329B 一种基于表面增强拉曼光谱检测新型冠状病毒n蛋白的方法 （厦门大学）

一种基于表面增强拉曼光谱检测新型冠状本发明公开了一种基于表面增强拉曼光谱S1制备Au@IR808@抗体的免疫拉曼信号金纳米粒合物；S4洗涤液磁吸_洗涤并最终浓缩定容至小粒子与SARS_CoV_2N蛋白以及生物素化抗体Ab2在液相中的高结合效率，实现对N蛋白的特异性21.一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型冠状病毒N蛋白的S3：将步骤S1制得的免疫拉曼信号金纳米粒子与步骤S2制得的生物素化抗体Ab2以及2.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型3.如权利要求2所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型冠状病毒N蛋白的方法，其特征在于，所述缓冲液由硼砂和氢氧化钠配制而4.如权利要求2所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型5.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型6.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型状病毒N蛋白抗体SARS_CoV_2NP_mAb，所述步骤S2中生物化抗体所添加的抗体Ab2为新型冠状病毒中和抗体SARS_CoV_2NP_m7.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型8.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型39.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新型10.如权利要求1所述的一种非疾病诊断和治疗目的的基于表面增强拉曼光谱检测新4型冠状病毒N蛋白的方法，用于检测新型冠状病毒的核壳蛋白基因(nucleocapsid[0002]新型冠状病毒SARS_CoV_2的检测方法中的病原学及血清学检查主要有核酸检测、CN202110353115.9公开了采用Pt_Pd合金纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒证。但现有的快速抗原检测试剂盒存在检测灵敏度不够导致假阴性以及检出率不高等问用免疫拉曼信号金纳米粒子与SARS_CoV_2N蛋白以及生物素化抗体Ab2在液相中的高结合曼光谱仪在15min内实现对SARS_CoV_2病毒N_蛋白的超灵敏[0007]S1：将拉曼信号分子和SARS_CoV_2病毒N蛋白抗体Ab1分[0009]S3：将步骤S1制得的免疫拉曼信号金纳米粒子与步骤S2制得的生物素化抗体Ab25[0019]优选地，所述步骤S1中SARS_CoV_2病毒N蛋白抗体Ab1为新型冠状病毒N蛋白抗体[0022]优选地，所述步骤S2中生物化抗体所添加的抗体Ab2为新型冠状病毒中和抗体6[0027]优选地，所述步骤S4中洗涤液为PBS_T，定溶液为PBS，在PBS溶液中加入浓度为[0030]优选地，所述步骤S5中拉曼检测仪器为便携式拉曼光谱仪或共聚焦拉曼光谱仪、金纳米粒子、100_1000ul不同浓度稀释液配制的新型冠状病毒SARS_CoV_2N蛋白(0.1pg/结合抗体的连接物，避免了金纳米粒子表面抗体复杂的修饰过程，并且在785nm激光下[0038]2.本发明利用免疫拉曼信号金纳米粒子与SARS_CoV_2N蛋白以及生物素化抗体免疫复合物，形成“免疫拉曼信号金纳米粒子—N蛋白—生物素化抗体—链霉亲和素化磁[0039]3.本发明提供的检测方法用于对新型冠状病毒S7冲液下检测新型冠状病毒重组N蛋白的检测限为0.1pg/ml，模拟咽拭子样本检测限为1[0045]图6是对比例1中“拉曼信号金—抗原—磁珠”反应方法检测稀释液中不同SARS_[0048]本发明的检测方法利用免疫拉曼信号金纳米粒子与SARS_CoV_2N蛋白以及生物素[0050]S1：将拉曼信号分子和SARS_CoV_2病毒N蛋白抗体Ab1分[0052]S3：将步骤S1制得的免疫拉曼信号金纳米粒子与步骤S2制得的生物素化抗体Ab2[0055]图1是本发明检测原理示意图，将制备Au@IR808@抗体的免疫拉曼信号金纳米粒8[0056]以下实施例中所用纳米粒子为郑州凌思生物科技有限责任公司研发的40_60nm粒药科技有限公司研发的货号C00154的新型冠状病毒N蛋白抗体SARS_CoV_2NP_mAb；生物化抗体所添加的抗体Ab2为江苏东抗生物医药科技有限公司研发的货号C00172新型冠状病毒[0059](2)生物素化抗体制备：取250ul5mg/ml的N蛋白抗体A5h，然后在PBS(pH7.2)溶液里通过5000分子量透析膜透析20h，然后采用PBS溶液定容至0.1pg/ml，相较于新型冠状病毒抗原检测试剂盒(金纳米粒子法)(N蛋白检测限为10_[0065](2)生物素化抗体制备：取250ul5mg/ml的N蛋白抗体A5h，然后在PBS(pH7.2)溶液里通过5000分子量透析膜透析20h，然后采用PBS溶液定容至[0066](3)免疫夹心复合物结构的制备：采用咽拭子采样棒充分擦取口腔咽部，然后于93mlN蛋白稀释液搅拌，制得咽拭子采样液，并加入N蛋白配置成不同新型冠状病毒SARS_体的免疫拉曼信号金纳米粒子、300ul不同浓度咽拭子采样液配制的新型冠状病毒SARS_米粒子、300ul不同浓度咽拭子采样液配制的新型冠状病毒SARS_CoV_2N蛋白(0pg/ml、[0081]上述实施例仅是本发明