兽医化验员管理考核试卷及答案

兽医化验员管理考核试卷及答案一、填空题（共20题，每空1分，共30分）1.现行《中华人民共和国动物防疫法》于______年修订实施，兽医化验员开展检测工作必须严格遵守该法及配套规章要求。2.兽医实验室生物安全等级共分为______级，其中开展高致病性禽流感、非洲猪瘟检测工作必须在______级及以上生物安全实验室中进行。3.常见的血清学检测方法包括______、______、______、免疫荧光试验等（列举3种即可）。4.全血样本采集常用的抗凝剂包括______、______、肝素钠等（列举2种即可）。5.聚合酶链式反应（PCR）的三个核心反应步骤依次为______、______、______。6.高致病性禽流感的病原属于______科流感病毒属甲型流感病毒，对禽类致病力最强的H5、H7亚型均属于法定报告的一类动物疫病病原。7.布鲁氏菌病的常用血清学筛查方法为______，确诊方法为试管凝集试验或补体结合试验。8.兽医实验室感染性废弃物必须经过______处理后，方可按照普通医疗废弃物处置，严禁未经处理直接排放。9.离心机的常用转速单位为______，离心效果与转速、离心半径、离心时间直接相关。10.ELISA的中文全称为______，是当前兽医实验室应用最广泛的抗体/抗原检测技术之一。11.革兰氏染色的操作步骤依次为涂片固定、______、碘液媒染、95%乙醇脱色、______。12.猪瘟病毒属于______科瘟病毒属，是我国一类动物疫病病原。13.兽医实验室检测原始记录、检测报告的保存期限不得少于______年，涉及重大动物疫病检测的记录需长期保存。14.生物安全柜按照防护等级可分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级，其中______级生物安全柜适用于兽医实验室常规病原检测操作。15.口蹄疫病毒共有______个血清型，各血清型之间无交叉免疫保护作用。16.鸡新城疫血凝试验（HA）常用的红细胞浓度为______的SPF鸡红细胞。17.临床细菌药敏试验的常用方法包括______、肉汤稀释法两种。18.狂犬病病原检测的金标准为______检测脑组织中的狂犬病病毒抗原。19.实验室手部消毒、器械表面擦拭消毒常用的医用酒精浓度为______。20.生猪旋毛虫检测的法定采样部位为______。二、单项选择题（共15题，每题2分，共30分）1.下列动物疫病中，属于我国一类动物疫病的是（）A.猪伪狂犬病B.非洲猪瘟C.猪蓝耳病D.猪大肠杆菌病2.开展非洲猪瘟病毒核酸检测的实验室，最低生物安全等级要求为（）A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-43.离心机使用过程中，下列操作正确的是（）A.样品无需配平直接放入转子B.运行过程中出现异响立即打开机盖检查C.离心结束后待转子完全停止再开盖取样品D.腐蚀性样品离心后无需清洁转子4.间接ELISA试验检测抗体时，常用的显色底物为（）A.TMBB.溴化乙锭C.琼脂糖D.结晶紫5.血清样本若不能即时检测，4℃冷藏条件下最长可保存（）A.3天B.7天C.15天D.30天6.革兰氏染色结果中，革兰氏阳性菌的显色为（）A.红色B.蓝色C.紫色D.无色7.高致病性禽流感疑似样品采集后，若无法在24小时内送至实验室，需置于（）条件下保存运输A.4℃B.-20℃以下C.常温D.37℃8.布鲁氏菌病属于我国法定（）类动物疫病，同时属于乙类人畜共患传染病A.一B.二C.三D.四9.下列试剂中，不属于常规PCR反应体系必需成分的是（）A.Taq酶B.dNTPC.引物D.DNA连接酶10.生物安全柜内操作产生的感染性废弃物，正确的处置方式为（）A.直接扔入普通垃圾桶B.放入专用高压灭菌袋，柜内暂存，实验结束后高压灭菌C.用手直接取出放入实验室公共垃圾桶D.倒入下水道11.血凝试验（HA）结果判读中，“+++”的凝集程度为（）A.红细胞全部凝集，均匀铺于孔底B.75%红细胞凝集，孔底中心有少量红细胞沉淀点C.50%红细胞凝集，孔底中心沉淀明显D.25%红细胞凝集，大部分红细胞沉于孔底12.下列检测方法中，不属于血清学检测范畴的是（）A.虎红平板凝集试验B.ELISAC.荧光定量PCRD.血凝抑制试验13.兽医实验室高压灭菌器常用的灭菌参数为（）A.100℃，0.05MPa，10分钟B.121℃，0.1MPa，15-20分钟C.134℃，0.2MPa，5分钟D.160℃，常压，2小时14.跨省调运种用动物的《动物检疫合格证明》有效期最长为（）A.3天B.5天C.7天D.15天15.下列关于原始记录的管理要求，说法正确的是（）A.记录可以事后补填B.记录填写错误可以用涂改液修改C.记录需由操作人、复核人签字确认D.记录可以随意丢弃三、判断题（共10题，每题1分，共10分）1.兽医实验室内穿戴好防护服即可进食、饮水。（）2.PCR实验室的试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区可以交叉互通。（）3.血清样本可以反复冻融3次以上，不影响检测结果。（）4.革兰氏染色结果中，革兰氏阴性菌显色为紫色。（）5.高致病性病原样品运输必须采用UN2814标准的A类包装，粘贴危险物品标识，由专人护送。（）6.原始记录填写错误时，可直接涂黑后在上方重写，无需标注修改人及修改日期。（）7.离心机运行过程中若出现异响、晃动，可直接打开机盖调整转子位置。（）8.ELISA试验必须设置阴性对照、阳性对照，否则试验结果无效。（）9.布鲁氏菌属于可通过气溶胶感染人的病原，操作时必须佩戴双层手套、N95口罩，在生物安全柜内进行。（）10.旋毛虫压片镜检时，需将样品压至薄而透明，置于40倍物镜下观察虫体包囊。（）四、简答题（共3题，每题6分，共18分）1.简述兽医实验室常见样品的采集、保存及运输要求。2.简述间接ELISA检测动物抗体的操作流程及质量控制要点。3.简述兽医化验员日常操作的生物安全防护核心要求。五、综合论述题（共1题，12分）某规模猪场出现生猪突然死亡，临床症状表现为高热、皮肤发绀、呕吐、便血，初步怀疑为非洲猪瘟感染。作为驻场兽医化验员，请你从样品采集、实验室检测、结果报送三个环节，详述具体操作要点及注意事项。一、填空题答案1.20212.4；BSL-2（或生物安全二级）3.酶联免疫吸附试验（ELISA）、血凝抑制试验、琼脂扩散试验、虎红平板凝集试验（任选3种即可）4.乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）、枸橼酸钠（任选2种即可）5.变性、退火（复性）、延伸6.正黏病毒7.虎红平板凝集试验（或RBPT）8.高压蒸汽灭菌（或121℃高压灭菌30分钟）9.转每分钟（或r/min）10.酶联免疫吸附试验11.结晶紫初染、番红（或沙黄）复染12.黄病毒13.614.Ⅱ15.716.1%17.K-B纸片扩散法（或纸片法）18.直接荧光抗体试验（或FAT）19.75%20.膈肌脚（或膈肌）二、单项选择题答案1.B2.B3.C4.A5.B6.C7.B8.B9.D10.B11.B12.C13.B14.B15.C三、判断题答案1.×2.×3.×4.×5.√6.×7.×8.√9.√10.√四、简答题答案1.兽医实验室常见样品的采集、保存及运输要求如下：（1）采集要求：①所有采样器具需提前灭菌处理，做到一份样品一套器具，避免交叉污染；②根据检测目的采集对应类型样品，拭子样品需充分接触采样部位，组织样品需采集病变典型部位，全血/血清样品采集量不少于2mL；③样品采集后立即标注唯一标识，注明样品编号、动物种类、采集时间、采集地点、采样人等信息，同步填写采样单，做到单物相符；④采样过程做好个人防护，涉及疑似重大动物疫病的采样需穿戴全套生物安全防护装备，采样后对采样环境、人员、器具进行全面消毒，避免散毒。（2分）（2）保存要求：①血清样品：4℃冷藏可保存3-7天，-20℃以下冷冻可保存6个月，-80℃可长期保存，避免反复冻融；②组织/拭子样品：4℃冷藏不超过24小时，-20℃可保存1个月，-80℃长期保存；③全血样品：4℃冷藏保存，严禁冷冻，保存期限不超过3天；④疑似高致病性病原样品需单独密封，专人保管，严禁与普通样品混存。（2分）（3）运输要求：①样品需置于防渗漏的密封容器内，外层放置保温箱，根据保存要求添加冰袋或干冰，确保运输过程中温度符合要求；②普通样品运输需做好标识，避免剧烈晃动；③高致病性病原样品需采用UN2814标准A类包装，粘贴生物危险标识，由经过培训的专人护送，运输前需向当地动物疫病预防控制机构及交通运输部门报备，严禁通过公共交通寄送。（2分）2.间接ELISA检测动物抗体的操作流程及质量控制要点如下：（1）操作流程：①包被：将稀释后的抗原加入酶标板孔，4℃孵育过夜或37℃孵育2小时；②封闭：弃去包被液，加入封闭液，37℃孵育1-2小时，洗板3次；③加待检样品：将稀释后的待检血清、阴性对照、阳性对照加入对应孔，37℃孵育30-60分钟，洗板5次；④加酶标二抗：加入辣根过氧化物酶标记的二抗，37℃孵育30分钟，洗板5次；⑤显色：加入TMB底物，37℃避光孵育10-15分钟；⑥终止：加入终止液终止反应；⑦读板：用酶标仪读取对应波长的OD值，按照试剂盒判定标准判读结果。（3分）（2）质量控制要点：①试剂管控：所用试剂盒需在有效期内，按照要求储存，使用前恢复至室温；②操作管控：加样准确，洗板彻底避免残留，孵育温度、时间严格按照试剂盒要求执行，避免交叉污染；③对照设置：每批次试验必须设置阴性对照、阳性对照、空白对照，对照结果符合试剂盒要求方可判读样品结果；④记录管控：试验过程、结果需如实记录，由操作人、复核人签字确认，原始记录留存归档。（3分）3.兽医化验员日常操作的生物安全防护核心要求如下：（1）区域管控：严格按照实验室分区要求开展操作，不同区域的防护用品、器具不得交叉使用，严禁将实验室内物品带出实验室区域，非工作人员未经批准不得进入实验室。（1分）（2）个人防护：进入实验室必须穿戴工作服、一次性手套、医用外科口罩、工作帽，根据操作内容提升防护等级：涉及病原操作时佩戴N95口罩、护目镜、双层手套，在生物安全柜内操作；涉及高致病性病原操作时穿戴全套生物安全防护服、鞋套，必要时佩戴呼吸面罩。（2分）（3）操作管控：所有感染性材料操作必须在生物安全柜内进行，严禁在开放台面操作；操作过程中避免产生气溶胶，若发生样品洒漏、职业暴露，立即停止操作，按照应急预案处置并上报；实验结束后所有感染性废弃物必须高压灭菌处理，台面、仪器用有效氯1000mg/L的消毒液擦拭消毒，离开实验室前脱除所有防护用品，洗手消毒。（2分）（4）健康监测：每年至少开展1次职业健康体检，涉及布鲁氏菌病、狂犬病等人畜共患病操作的化验员每半年开展1次抗体监测，出现疑似感染症状立即就医并上报。（1分）五、综合论述题答案疑似非洲猪瘟感染的检测操作要点及注意事项如下：（一）样品采集环节（4分）1.样品类型：优先采集病死猪的扁桃体、脾脏、淋巴结、肾脏等病变典型的组织样品，同时采集存活发病猪的口鼻拭子、肛拭子、全血、血清样品，每份组织样品重量不少于5g，每份拭子样品需充分擦拭黏膜表面，全血样品不少于2mL，血清样品不少于1mL。2.采集要求：①采样人员穿戴全套生物安全防护装备（一次性防护服、N95口罩、护目镜、双层手套、鞋套、靴套），采样前对采样区域进行消毒，采样过程做到一猪一套采样器具，避免交叉污染；②每份样品标注唯一编号，注明猪只耳号、采样时间、采样部位、临床症状，同步填写采样单，由采样人、场方负责人签字确认；③采样结束后，所有样品放入密封自封袋，置于带冰袋的保温箱中，对保温箱外层进行全面消毒，采样产生的废弃物、防护用品全部装入高压灭菌袋，现场消毒后带回实验室高压灭菌处理，采样人员彻底消毒后方可离开采样区域。3.注意事项：采样过程中严禁接触健康猪群，避免造成病原扩散，采样后48小时内完成检测，无法及时检测的样品置于-20℃以下冷冻保存。（二）实验室检测环节（5分）1.生物安全管控：样品在BSL-2级实验室的生物安全柜内开启，操作人员穿戴双层手套、N95口罩、护目镜，操作过程避免产生气溶胶，所有接触样品的器具、废弃物全部高压灭菌处理，实验结束后对生物安全柜、台面、地面用有效氯2000mg/L的消毒液擦拭消毒，空气用紫外线照射30分钟以上。2.检测操作：①优先采用农业农村部批准的非洲猪瘟病毒荧光定量PCR试剂盒进行检测，严格按照试剂盒说明书操作，每批次试验设置阴性对照、阳性对照、空白对照，对照结果符合要求方可判定；②核酸提取在样本制备区进行，扩增在扩增区进行，严格执行PCR实验室分区操作要求，不同区域的移液器、器具不得交叉使用，避免污染；③若样品检测Ct值在35-40之间，需重复采样复检，复检仍为可疑的，送上级动物疫病预防控制机构复核。3.注意事项：检测过程中严格避免交叉污染，严禁将扩增产物带出扩增区，剩余样品密封后置于-20℃以下保存至少3个月，以备复检。（三）结果报送环节（3分）1.结果判定：若试剂盒对照符合