兽医实验室考试题及答案

兽医实验室考试题及答案一、单项选择题（共20题，每题1分，共20分）1.兽医实验室中开展高致病性禽流感病原分离鉴定工作，所需的生物安全等级是（）A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-42.常用来进行细菌分离培养的培养基是（）A.营养琼脂平板B.PCR反应板C.ELISA酶标板D.细胞培养板3.高压蒸汽灭菌器杀灭所有细菌芽孢和繁殖体的常规参数是（）A.110℃0.05MPa10minB.121℃0.105MPa15-20minC.130℃0.15MPa5minD.100℃0.1MPa30min4.非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测的首选采样部位是（）A.鼻腔拭子B.抗凝血C.脾脏/淋巴结D.粪便5.ELISA检测中设置的阳性对照OD值低于临界值，首先应判定（）A.样品阳性B.样品阴性C.试验无效D.临界值调整6.下列哪种消毒试剂对非洲猪瘟病毒灭活效果最差（）A.2%氢氧化钠B.0.5%次氯酸钠C.75%乙醇D.氯己定（洗必泰）7.兽医实验室样品检测原始记录的保存期限至少为（）A.1年B.2年C.3年D.5年8.下列哪种方法属于血清学检测方法（）A.荧光定量PCRB.病毒分离C.中和试验D.宏基因组测序9.BSL-2实验室必备的个人防护装备是（）A.正压防护服B.生物安全柜C.护目镜/防护面屏D.呼吸防护器10.口蹄疫病毒通用型荧光定量PCR检测的保守靶基因是（）A.VP1基因B.3D基因C.5’UTR基因D.L基因11.下列哪种样品的采集需要使用无菌抗凝管（）A.血清样品B.全血样品用于病毒核酸检测C.组织样品D.拭子样品12.实验室PCR扩增产物污染的最主要来源是（）A.样品交叉污染B.试剂污染C.扩增产物气溶胶扩散D.移液器污染13.鸡新城疫血凝抑制试验中，4单位抗原的定义是（）A.能完全凝集1%鸡红细胞的最高抗原稀释度B.能完全凝集1%鸡红细胞的最低抗原稀释度C.每单位反应体系含4个血凝单位的抗原稀释液D.稀释4倍的抗原原液14.下列不属于兽医实验室质量控制要素的是（）A.人员培训B.仪器校准C.试剂验收D.样品数量15.发生疑似炭疽疫情时，下列哪种操作是禁止的（）A.采集血液样品涂片镜检B.解剖病死畜采集脾脏样品C.使用过氧乙酸对环境消毒D.对接触人员进行医学观察16.哺乳动物细胞培养最适宜的二氧化碳培养箱浓度是（）A.5%B.10%C.15%D.20%17.布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的结果观察时间是（）A.2min内B.4min内C.10min内D.30min内18.下列哪种病原属于RNA病毒（）A.非洲猪瘟病毒B.伪狂犬病毒C.口蹄疫病毒D.牛结核分枝杆菌19.实验室废弃的高致病性病原微生物样品处理方式正确的是（）A.直接扔入生活垃圾B.高压灭菌后按医疗废物处理C.用消毒水浸泡后扔入下水道D.常温放置72小时后丢弃20.ELISA检测中设置空白对照的作用是（）A.消除非特异性显色的背景值B.验证试剂有效性C.验证操作准确性D.判断样品阴阳性单项选择题答案1-5：CABCC6-10：DCCCC11-15：BCCDB16-20：ABCBA二、判断题（共15题，每题1分，共15分）1.BSL-3实验室可以开展所有一类动物病原微生物的实验活动。（）2.非洲猪瘟病毒对热敏感，56℃30分钟可以完全灭活。（）3.ELISA检测出现花板的原因一定是洗板不充分。（）4.荧光定量PCR检测中，Ct值大于40的样品可以直接判定为阴性。（）5.采集的血清样品如果不能及时检测，可在-20℃条件下长期保存。（）6.兽医实验室出具的检测报告需要经检测人、审核人、批准人签字后方可生效。（）7.血凝抑制试验中，抗原过剩会出现前带现象，导致凝集被抑制。（）8.生物安全柜内操作时可以使用酒精灯进行无菌操作。（）9.高压灭菌后的物品可以直接放入无菌室使用，无需验证灭菌效果。（）10.口蹄疫灭活疫苗免疫后的动物，口蹄疫非结构蛋白抗体检测为阳性。（）11.实验室接收样品时，只要样品包装完好就可以接收，无需核对采样记录。（）12.布鲁氏菌属于革兰氏阳性菌，无芽孢，无鞭毛。（）13.PCR实验的试剂配制、样品处理、扩增、产物分析可以在同一个房间进行，只要做好消毒即可。（）14.用于细菌分离培养的组织样品，采集时应避免接触消毒剂，以免抑制细菌生长。（）15.兽医实验室的废水可以直接排入市政管网，无需处理。（）判断题答案1.×2.√3.×4.×5.√6.√7.√8.×9.×10.×11.×12.√13.×14.√15.×三、填空题（共10题，每空1分，共20分）1.我国将动物病原微生物分为____类，其中高致病性病原微生物指____类。2.荧光定量PCR检测的三个关键反应阶段是____、____、____。3.禽流感病毒血凝试验常用的鸡红细胞悬液浓度为____。4.兽医实验室常用的血清学检测方法包括____、____、____（列举3种即可）。5.非洲猪瘟病毒的基因组类型为____（填DNA或RNA）。6.高压灭菌效果验证常用的生物指示剂为____。7.BSL-2实验室的个人防护装备包括____、____、____（列举3种即可）。8.一类动物病原微生物样品运输需使用____类包装，由____人以上专门护送。9.ELISA检测的核心原理是____的特异性结合反应。10.实验室质量控制分为____和____两类，其中室间质评属于____。填空题答案1.四；一、二2.变性；退火；延伸3.1%4.ELISA、血凝抑制试验、中和试验（或虎红平板凝集试验、琼脂扩散试验等，符合要求即可）5.双链DNA6.嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢7.隔离衣、一次性手套、护目镜（或医用外科口罩、工作鞋等，符合要求即可）8.A；29.抗原与抗体10.室内质量控制；室间质量评价；室间质量评价四、简答题（共5题，每题8分，共40分）1.简述兽医实验室开展高致病性动物病原微生物检测的生物安全防护要求。答：（1）实验室等级要求：开展一类动物病原微生物的分离培养、动物感染试验等活病毒操作需在BSL-3及以上实验室开展，仅开展核酸检测、血清学检测等灭活样品操作可在BSL-2实验室进行。（2）个人防护要求：BSL-3实验室操作需穿戴双层手套、N95及以上级别的呼吸防护器、护目镜/防护面屏、连体防水防护服、鞋套、工作帽，必要时配备正压头盔；BSL-2实验室操作感染性材料时需穿戴隔离衣、一次性手套、医用外科口罩，产生气溶胶时需佩戴护目镜和N95口罩。（3）操作要求：所有感染性材料操作需在生物安全柜内进行，禁止在开放台面操作；操作过程中避免产生气溶胶，使用一次性移液器吸头，避免交叉污染；产生的所有废弃物需就地高压灭菌后再按医疗废物处理。（4）管理要求：实验人员需经过生物安全培训并考核合格，定期开展健康监测，操作高致病性病原前需接种对应的疫苗（无疫苗的需制定应急处置预案）；实验室需配备足够的消毒试剂，定期对环境、设备进行消毒，做好消毒记录。2.简述荧光定量PCR检测非洲猪瘟病毒的操作注意事项及结果判定规则。答：（一）操作注意事项：（1）分区操作：试剂配制、样品处理、扩增分析需在独立的功能区进行，人员、物品单向流动，各区的移液器、离心机、防护服等设备用品不得交叉使用。（2）样品处理：组织样品需充分研磨，避免交叉污染，处理过程在生物安全柜内进行，所有样品处理后需灭活后再取出生物安全柜。（3）试剂管理：试剂需分装保存，避免反复冻融，每次实验需设置阴性对照、阳性对照、空白对照，排除试剂污染和操作污染。（4）污染防控：每次实验前后需用75%乙醇、0.5%次氯酸钠对台面、设备进行消毒，定期开展实验室环境核酸污染监测，发现污染立即停止实验，排查污染源并进行消毒处理。（二）结果判定规则：（1）试验成立条件：空白对照无Ct值，阴性对照Ct值≥40或无Ct值，阳性对照Ct值≤30。（2）阳性判定：样品Ct值≤35，判定为阳性。（3）可疑判定：样品Ct值在35-40之间，需进行复检，复检Ct值仍在35-40之间且有明显扩增曲线的判定为阳性，无扩增曲线的判定为阴性。（4）阴性判定：样品无Ct值或Ct值≥40，判定为阴性。3.简述兽医实验室样品采集、保存、运输的通用技术要求。答：（1）采集要求：根据检测目的选择合适的采样部位和采样工具，所有采样工具需无菌，避免交叉污染；采集过程中做好个人防护，避免人员感染和环境污染；每份样品需标注唯一标识，填写采样记录，包括采样地点、采样时间、动物信息、样品类型、采样人等信息。（2）保存要求：用于核酸检测的样品，24小时内检测的可在4℃保存，超过24小时的需放置在-20℃以下保存，避免反复冻融；用于病毒分离的样品需放置在-70℃以下超低温冰箱保存；用于血清学检测的血清样品，4℃可保存3-7天，-20℃可长期保存；用于细菌分离的样品需在4℃条件下24小时内送实验室检测，避免冷冻。（3）运输要求：样品需采用三层包装，内层为样品管，中层为密封袋，外层为保温箱，内层和中层需标注生物危险标识；运输高致病性病原微生物样品需使用A类包装，取得相关部门的准运证明，由2名以上经过培训的人员护送，运输过程中保持低温（冰袋或干冰），避免样品融化；运输过程中避免剧烈震动，防止样品泄漏，一旦发生泄漏立即启动应急预案，进行消毒处置。4.简述ELISA检测的室内质量控制要点。答：（1）试剂质量控制：新批次试剂使用前需与旧批次试剂进行比对试验，验证试剂的特异性、敏感性符合要求；试剂需按照说明书要求保存，避免反复冻融，过期试剂禁止使用。（2）对照设置：每次试验需设置空白对照、阴性对照、阳性对照（包括强阳性、弱阳性对照），必要时设置内部质控品，对照结果符合要求才能判定样品结果。（3）操作过程控制：移液器、酶标仪、洗板机等设备需定期校准，确保加样准确、读数准确；严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行，控制孵育温度、孵育时间、洗板次数等参数，避免操作误差。（4）结果分析控制：每次试验需计算临界值，临界值的计算需严格按照试剂盒说明进行；对可疑结果的样品需进行复检，必要时采用其他方法进行验证；定期绘制室内质控图，分析质控结果的偏移情况，及时发现试验系统的误差并进行整改。5.简述兽医实验室检测结果异常的溯源及处置流程。答：（1）异常结果确认：首先核实检测操作流程是否符合要求，对照的结果是否正常，排除操作误差、试剂误差、仪器误差导致的假阳性、假阴性结果。（2）样品溯源：核对样品的标识、采样记录、运输记录，确认样品是否存在交叉污染、变质、标识错误等问题，必要时重新采样进行复检。（3）系统排查：对仪器设备的参数、校准记录进行核查，对试剂的批次、保存条件、有效期进行核查，对实验室环境是否存在污染进行核查，排查导致结果异常的根本原因。（4）结果处置：如果是操作、试剂、仪器导致的异常结果，需重新进行检测；如果是样品问题导致的异常结果，需通知采样单位重新采样；如果是重大动物疫病阳性结果，需按照规定及时上报，同时将样品送上级实验室进行复核，确认后按照应急预案进行处置。（5）记录归档：所有异常结果的排查、处置过程需形成完整的记录，归档保存，定期开展分析，避免同类问题再次发生。五、案例分析题（共2题，每题12.5分，共25分）1.某兽医实验室开展非洲猪瘟荧光定量PCR检测时，发现阴性对照出现明显扩增曲线，Ct值为32，所有样品的Ct值均在28-35之间，请分析该问题的可能原因，并提出整改措施。答：（一）可能原因：（1）实验室扩增产物污染：之前的PCR扩增产物发生气溶胶泄漏，污染了试剂、移液器、台面、环境等，导致阴性对照和样品出现假阳性。（2）试剂污染：试剂配制过程中被阳性样品或者扩增产物污染，或者试剂本身质量不合格，存在阳性污染。（3）操作污染：样品处理过程中阳性样品发生泄漏，交叉污染了阴性对照和其他样品，或者移液器没有更换吸头，导致交叉污染。（4）阳性对照污染：阳性对照管发生泄漏，污染了反应体系。（二）整改措施：（1）立即停止实验，对整个实验室的环境（试剂区、样品处理区、扩增区）、设备（移液器、离心机、生物安全柜）、试剂进行核酸污染监测，确定污染源。（2）对污染区域进行消毒：采用0.5%次氯酸钠擦拭台面、设备表面，然后用紫外线照射30分钟以上，必要时采用核酸污染清除剂进行熏蒸消毒，连续3天开展环境监测，直到所有位点核酸检测为阴性才能重新开展实验。（3）更换所有未使用的试剂，使用全新的移液器吸头、离心管等耗材，移液器进行校准和消毒处理。（4）优化操作流程：严格执行分区操作，人员单向流动，每次实验前更换防护服、手套，操作过程中每处理一份样品更换一次吸头，避免交叉污染；阳性对照单独处理，避免污染其他样品和试剂。（5）完善质量控制：每次实验必须设置空白对照、阴性对照、弱阳性对照，对照结果不符合要求的，实验结果无效，不得上报。2.某实验室开展鸡新城疫灭活疫苗免疫抗体监测时，采用血凝抑制试验检测，发现免疫后21天的鸡群抗体效价全部低于2log2，远低于预期的5log2以上，请分析原因，并提出解决方法。答：（一）